miR-195靶向RAF1调控口腔鳞状细胞癌的生长、凋亡及迁移侵袭

目的探讨miR-195与RAF1的靶向关系及二者对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞生长、凋亡及迁移侵袭的调控。方法构建miR-195过表达载体并合成si-RAF1,转染入SCC-4细胞,以荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-195及si-RAF1在SCC-4细胞中的转染效率。MTT法、克隆形成及细胞周期实验评价miR-195对SCC-4细胞生长的影响,流式细胞仪检测miR-195对SCC-4细胞凋亡的影响;并通过双荧光素酶报告基因系统、qRT-PCR及Western blot检测miR-195与RAF1的靶向关系。结果成功构建miR-195真核表达载体并合成si-RAF1,qRT-PCR显示miR-195真核表达载体及si-RAF1在SCC-4细胞中均具有较高的转染效率(P <0. 01)。miR-195的过表达能够显著抑制SCC-4细胞的增殖活性及克隆形成,诱导细胞周期G1/S的阻滞,并促进细胞凋亡的发生;同时双荧光素酶报告基因分析表明,miR-195过表达能够显著抑制RAF1野生型报告载体荧光活性; Western blot和qRT-PCR进一步证实了miR-195能够抑制RAF1的mRNA和蛋白的表达。结论 miR-195可能通过直接靶向RAF1来抑制OSCC细胞的生长及迁移侵袭,诱导细胞凋亡的发生。

淫羊藿苷对大鼠正畸牙移动后保持期核因子κB受体活化因子配体表达的影响

目的探讨淫羊藿苷对大鼠正畸牙移动后保持期牙周组织的改建和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响。方法采用40只6周龄雄性SD大鼠建立正畸牙移动模型,在牙移动21 d后进入保持期,随机将大鼠分为4组,淫羊藿苷组、对照组、淫羊藿苷+保持丝组、保持丝对照组,每组10只。淫羊藿苷组和淫羊藿苷+保持丝组通过灌胃方式给予大鼠淫羊藿苷20 mg/(kg·d),对照组和保持丝对照组灌注等量生理盐水。在实验第1、3、7、14、21天处死大鼠,采集其上颌骨样本进行检测,确定出上颌第一磨牙远中移动复发距离。全部样本脱钙后制成切片,给予苏木精-伊红染色法(HE)染色和免疫组化染色,观察RANKL表达的变化。结果淫羊藿苷及淫羊藿苷+保持丝组在第7、14和21天,牙移动复发距离小于对照组。免疫组化显示,在保持阶段给药期间,从第1天至21天,淫羊藿苷+保持丝组牙周膜组织中RANKL表达低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论淫羊藿苷影响牙槽骨的改建,可以降低破骨细胞活性,有利于正畸牙移动到位后的保持。

转录因子Nrf2过表达对人牙髓干细胞增殖、迁移及成骨分化的影响

目的探讨核转录因子-E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)过表达对人牙髓干细胞增殖、迁移及成骨分化的影响。方法采用酶消化法提取人牙髓干细胞,将带有荧光标记的过表达Nrf2的慢病毒载体及空载病毒的载体分别转染至人牙髓干细胞,用嘌呤霉素筛选和PCR鉴定得到过表达组和空病毒组人牙髓干细胞。人牙髓干细胞分为过表达组、空病毒组以及空白组,MTT和Transwell实验检测细胞增殖和迁移能力。将过表达组和空病毒组细胞分别加入矿化诱导液诱导培养,诱导培养至14 d时,用茜素红染色和半定量分析比较两组细胞形成的矿化结节。当两组细胞诱导培养至7 d时,检测两组细胞ALP活性。结果细胞分别培养至48,72,96 h时,与空病毒组相比,过表达组人牙髓干细胞的增殖能力和细胞迁移数量下降(P<0.05)。细胞被诱导矿化至14 d时,过表达组形成的矿化结节少于空病毒组(P<0.05)。细胞被诱导矿化至7 d时,过表达组ALP活性低于空病毒组(P<0.05)。结论转录因子Nrf2过表达可降低人牙髓干细胞的增殖和迁移能力,同时抑制人牙髓干细胞成骨分化。

淫羊藿苷对小鼠脂肪干细胞成骨分化的促进作用

目的 探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)对小鼠脂肪干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs)成骨分化的促进作用。方法 分离培养2周龄C57BL/6J雄鼠的ADSCs,显微镜下观察培养细胞形态。采用成骨和成脂诱导分化培养液分别对细胞进行成骨和成脂诱导,茜素红和油红O染色检测其多向分化潜能。以含浓度为10^-7 mol/L淫羊藿苷的培养液培养作为实验组,单纯培养液培养作为对照组,RT-PCR检测细胞成骨分化相关基因Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的表达,免疫荧光法分析细胞骨钙素(osteocalcin,OCN)的表达。结果 显微镜下观察培养细胞呈纤维细胞样梭形,呈簇分布。成骨分化茜素红染色及成脂分化油红O染色结果都呈强阳性。ICA实验组成骨相关基因Runx2、OPN、ALP的表达水平均显著高于培养基对照组,差异具有统计学意义( P <0.05),并且ICA实验组OCN蛋白的表达强于培养液对照组。结论 浓度为10^-7 mol/L的淫羊藿苷具有促进脂肪干细胞成骨分化的作用。

牙齿移动对静止期牙周病动物模型牙槽骨的影响

目的观察牙齿移动对静止期牙周病动物模型牙槽骨骨微结构及炎症反应的影响。方法SD大鼠分为对照组(24只)和实验组(48只)。随机对实验组半数大鼠行牙周基础治疗(24只),所有实验组大鼠近中移动下颌右侧第一磨牙,分为牙周病组、牙周病加力组、静止期牙周病组(牙周治疗大鼠左侧)和静止期牙周病加力组(牙周治疗大鼠右侧)。各组于加力0,7,14,21 d取材,行micro-CT扫描、免疫荧光染色。结果加力0,7,14,21 d,静止期牙周病加力组骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb·Th)高于牙周病加力组,骨小梁分离距离(Tb·Sp)低于牙周病加力组(P<0.05);加力14 d和21 d,静止期牙周病加力组骨小梁数量(Tb·N)低于牙周病加力组(P<0.05)。静止期牙周病加力组BMD、BV/TV、Tb·Th在加力14 d降至最低,Tb·N、Tb·Sp升至最高。加力0,7,21 d,静止期牙周病加力组IL-6表达的平均光密度值(AO)低于牙周病加力组(P<0.05)。结论静止期牙周病动物模型牙齿移动初期牙周炎症加重,牙槽骨强度下降,加力14 d时牙槽骨吸收最活跃,但在整个牙齿移动过程中牙周组织的破坏程度较牙周病动物模型减轻。

SD大鼠三叉神经节内微血管的解剖结构观察

目的 研究SD大鼠三叉神经节内微血管的分支、分布及走行特点。方法 10%水合氯醛腹腔内注射麻醉大鼠,开胸插管,依次用0.9%氯化钠溶液和4%多聚甲醛灌流,再用5%明胶-墨汁灌注,解剖游离大鼠三叉神经节,通过透明标本不同焦点层面照片的焦点堆迭和石蜡切片的HE染色,观察大鼠三叉神经节内微血管的分支、分布及走行特点。结果 三叉神经节内神经元胞体聚集区微血管数量多、密度大,呈密网状分布于神经元胞体间;神经纤维聚集区的微血管数量少、密度小,沿神经纤维长轴走行,斜向或横向分叉吻合成疏网状;神经元胞体聚集区与神经纤维聚集区的交界处近神经元胞体聚集区的微血管数量比近神经纤维聚集区的微血管数量要多,微血管的走行方向由神经元胞体聚集区的网状逐渐向沿神经纤维纵向走行过渡,微血管的密度降低,断面逐渐变长,直径增大。结论 SD大鼠三叉神经节内微血管分支吻合成网状,不同区域的微血管数量和密度不同。

仿生磷酸钙缓释涂层改性三维支架异位成骨的实验研究

目的研究负载淫羊藿苷(icariin,ICA)去蛋白牛骨无机材料(deproteinized bovine bone,DBB)的异位成骨能力。方法使用仿生磷酸钙涂层技术制备负载ICA的改性DBB材料。6只雄性SD大鼠麻醉后,每只大鼠背部皮下分别植入3种材料:DBB组(未经处理的DBB),CaP组(CaP涂层改性的DBB),ICA-CaP组(CaP涂层内含有ICA的DBB)。8周后取材,HE和Masson染色并对样本进行组织学观察。结果组织学观察结果显示,DBB组材料的周围被纤维组织包绕,少量新生骨形成;CaP组的材料表面可见散在分布的新生骨;ICA-CaP组的材料表面可见多处新生骨生成。半定量分析结果表明ICA-CaP组的新生骨面积百分比显著高于DBB组和CaP组,各组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论通过仿生磷酸钙涂层技术负载ICA的改性DBB材料具有较好的异位骨诱导能力。

帐篷螺丝技术在下前牙区同期种植时水平骨增量的临床评价

目的:评价帐篷螺丝技术在下前牙区同期种植时水平向骨增量的临床应用效果。方法:18例下颌前牙区有较严重的水平向骨缺损时使用帐篷螺丝技术进行水平向骨增量,同期植入骨水平植体,植入术后6个月行二期手术,1月后进行上部修复,1年复诊。CBCT测量术前及术后6个月、修复后1年牙槽嵴宽度。采用单因素重复测量方差分析对所获数据进行统计分析。结果:18例患者38个种植位点,均获得较满意的骨增量效果。术前及术后6个月、修复后1年牙槽嵴宽度分别为(3.54±0.11)、(6.82±0.08)和(6.17±0.07)mm,统计分析显示术后6月牙槽嵴宽度较术前明显增加(P<0.05)。与术后6个月相比,修复后一年牙槽嵴宽度减小(P<0.05)。结论:下前牙区种植体植入伴严重水平向骨缺损时,行帐篷螺丝骨增量技术可获得较好的骨增量效果。

人参皂苷Rg1抑制舌鳞状细胞癌增殖和转移能力的作用机制研究

目的研究人参皂苷Rg1(GS-Rg1)抑制舌鳞状细胞癌(TSCC)增殖和转移能力的作用,以及相关的作用机制。方法用1.25、2.5、5.0和10.0μmol·L^(-1)的GS-Rg1处理TSCC细胞CAL-2748 h后,用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测不同浓度细胞的增殖能力,并计算GS-Rg1作用CAL-2748 h的IC_(50)值。TSCC细胞CAL-27分为对照组和GS-Rg1组,分别用0.9%NaCl和IC_(50)浓度的GS-Rg1处理对照组和GS-Rg1组48 h。用流式细胞仪检测各组细胞周期分布情况,用Transwell实验检测各组细胞转移能力。构建TOP/FOP Flash质粒,转染对照组和GS-Rg1组,用荧光素酶实验检测GS-Rg1对TSCC细胞CAL-27中wnt/β-连环蛋白(wnt/β-catenin)信号通路活性的影响。用wnt/β-catenin通路抑制药XAV939处理GS-Rg1组细胞(XAV939+GS-Rg1组),及wnt/β-catenin通路激活药HLY78处理GS-Rg1组细胞(HLY78+GS-Rg1组),检测GS-Rg1组、XAV939+GS-Rg1组和HLY78+GS-Rg1组细胞中wnt/β-catenin信号通路活性、细胞增殖能力、细胞周期分布以及转移能力变化,用蛋白质印迹法检测各组细胞中wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin及其下游细胞周期相关分子细胞性骨髓细胞瘤原癌基因(cMYC),细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)和细胞周期蛋白D1(cyclinD1)及转移相关蛋白钙黏蛋白E(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达。结果GS-Rg1显著抑制TSCC细胞CAL-27的增殖能力(P<0.05),GS-Rg1作用CAL-2748 h的IC_(50)值为(5.46±1.58)μmol·L^(-1)。对照组和GS-Rg1组G0/G1分别为(60.65±2.16)%和(71.20±2.38)%,细胞穿膜数分别为(87.33±7.51)和(50.67±3.21)个,荧光素酶活性分别为1.00±0.02和0.35±0.06,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与GS-Rg1组相比,XAV939+GS-Rg1组细胞中wnt/β-catenin信号通路活性、细胞增殖能力和转移能力均显著降低(均P<0.05),G0/G1期细胞增多(P<0.05),β-catenin、cMYC、CDK4、cyclinD1、E-cadherin、MMP-2蛋白表达均显著降低(均P<0.05),N-cadherin蛋白表达增加,而HLY78+GS-Rg1组细胞结果相反。结论GS-Rg1下调wnt/β-catenin信号通路抑制TSCC细胞增殖和转移能力。