通过改革实验设计及方法观察细胞分裂

动态观察细胞分裂过程是培养学生学习兴趣、加强理论联系实际、增加动手能力的综合过程.通过从指导学生培养洋葱根尖、自制临时标本片、显微镜观察分析和绘图等环节进行改革,不仅较好的完成教学任务,还提高了学生的综合素质.

HK2通过Wnt/β-catenin信号通路上调Cyclin D1、MMP7和Slug表达促进宫颈癌细胞增殖和迁移

目的研究己糖激酶2(HK2)对宫颈癌细胞HeLa增殖和迁移的影响及其作用机制。方法G418压力筛选获取HK2稳定表达的HeLa细胞系;细胞计数法、MTT法、流式细胞仪检测HK2对HeLa细胞增殖、细胞活力及细胞周期的影响;细胞划痕和Transwell小室检测HK2对HeLa细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot和免疫细胞化学检测β-catenin、Cyclin D1、MMP7和Slug蛋白的表达;TOP/FOP实验检测HK2对Wnt/β-catenin信号转导通路活性的影响;Wnt/β-catenin信号通路抑制剂XAV-939观察在HK2过表达HeLa细胞中抑制Wnt/β-catenin信号通路活性后细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果成功构建HK2稳定表达的HeLa细胞系;过表达HK2可以促进HeLa细胞的增殖和细胞活力、促进细胞周期从G_0/G_1期向S期转换、增强细胞迁移和侵袭能力、增强Wnt/β-catenin信号转导通路活性,上调Cyclin D1、MMP7和Slug的表达;XAV-939抑制Wnt/β-catenin信号通路在HK2过表达HeLa细胞中的活性后,可以抑制HK2对细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用。结论HK2通过Wnt/β-catenin信号转导通路上调Cyclin D1、MMP7和Slug蛋白表达促进HeLa细胞增殖、迁移和侵袭。

VEGFR1下调对Aβ1-42诱导人脑微血管内皮细胞衰老及PI3K信号通路的影响

目的探讨小干扰RNA(siRNA)沉默血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR1)基因表达对β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)诱导人脑微血管内皮细胞HBMEC衰老及磷酸肌醇3激酶(PI3K)信号通路的影响。方法体外培养人脑微血管内皮细胞HBMEC,将细胞分为4组:HBMEC组(不转染,不采用Aβ1-42诱导),HBMEC+Aβ1-42组(不转染,50μmol/L Aβ1-42诱导)、neg+Aβ1-42组(转染VEGFR1siRNA-neg,50μmol/L Aβ1-42诱导),VEGFR1 siRNA+Aβ1-42组(转染VEGFR1siRNA,50μmol/L Aβ1-42诱导)。转染48 h后,利用人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)试剂盒检测细胞活力,用β-半乳糖苷酶染色试剂盒(B-gal Kit)检测细胞衰老情况,Hochest 33342/PI双染法观察细胞凋亡情况,蛋白印迹(WB)法检测细胞VEGFR1、p-Akt、p-mTOR、PI3K蛋白表达。结果与HBMEC组比较,HBMEC+Aβ1-42组、neg+Aβ1-42组、VEGFR1 siRNA+Aβ1-42组细胞存活率及细胞中VEGFR1、p-Akt、p-mTOR、PI3K蛋白表达水平均显著下降(P<0.05),衰老及凋亡细胞均增多(P<0.05);与HBMEC+Aβ1-42组、neg+Aβ1-42组比较,VEGFR1 siRNA+Aβ1-42组细胞存活率及细胞中VEGFR1、p-Akt、p-mTOR、PI3K蛋白表达水平均显著下降(P<0.05)、衰老及凋亡细胞均增多(P<0.05)。结论沉默VEGFR1可能通过抑制PI3K信号通路活化,促进Aβ1-42诱导的人脑微血管内皮细胞衰老及凋亡。

尼莫地平对大鼠星形胶质细胞β淀粉样蛋白转运功能的影响及可能机制

目的探讨尼莫地平对大鼠星形胶质细胞(Ast)β淀粉样蛋白(Aβ)转运功能的影响及可能机制。方法利用Transwell装置共培养大鼠脑微血管内皮细胞与大鼠Ast建立体外血脑屏障模型,并分为Ast组(给予0μmol/L尼莫地平)、低浓度尼莫地平+Ast组(给予5μmol/L尼莫地平)、中浓度尼莫地平+Ast组(给予10μmol/L尼莫地平)、高浓度尼莫地平+Ast组(给予20μmol/L尼莫地平)。给予相应干预48 h后,检测跨膜电阻及荧光素-葡聚糖4000(FD4)通透性以评价血脑屏障完整性,观察Aβ跨血脑屏障由脑侧向血管侧的转运情况,检测蛋白磷酸酶2A(PP2A)活性,以及低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1)、晚期糖基化终产物受体(RAGE)、磷酸化Tau(p-Tau)蛋白、PP2A、成对免疫球蛋白样受体B(PirB)、糖原合酶激酶3β(GSK3β)蛋白表达水平。结果4组细胞的跨膜电阻、FD4通透性差异无统计学意义(P>0.05)。Ast组、低浓度尼莫地平+Ast组、中浓度尼莫地平+Ast组、高浓度尼莫地平+Ast组Aβ跨血脑屏障由脑侧向血管侧转运量依次增多,Ast中LRP-1蛋白表达、PP2A活性及蛋白表达依次升高,RAGE、p-Tau、PirB、GSK3β蛋白表达依次降低(均P<0.05)。结论尼莫地平可促进大鼠Ast中Aβ的外向转运,减少Tau蛋白磷酸化,这可能其与下调RAGE、PirB、GSK3β蛋白表达,上调LRP-1、PP2A蛋白表达有关。