在《医学生物化学》教学中如何突出专业特点

在《医学生物化学》教学中结合各专业特点进行有针对性的教学，是教学改革的一个非常重要的方面。本文就生物化学教学为什么要突出专业特点、如何突出专业特点等问题进行讨论，以期优化教学效果，提高学生专业素质。

提高成人专升本《医学生物化学》教学质量之探索

成人专升本教育是比较特殊的教育形式,在医学专业课程中生物化学是难度较大的课程之一,但又是非常重要的课程。如何提高成人专升本《医学生物化学》教学质量,是本文探索的焦点。通过选择合适的教材,强化知识点教学,采取多种教学方法,以及加强素质教育等方面来达到提高教学质量的目的。

p42/44MAPK抑制剂U0126对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响

目的研究U0126对人胃癌SGC-7901细胞生物学特性的影响。方法用MTT法测定U0126对SGC-7901细胞增殖的影响,流式细胞仪检测U0126对SGC-7901细胞周期和细胞凋亡的影响,用Western blot分析p42/44和p38以及其磷酸化水平的变化。结果 10、15、20μMU0126均能够抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖;可使S和G2/M期肿瘤细胞比例减少,G0/G1期肿瘤细胞比例增加,其中20μM浓度的U0126作用最强(P<0.01);U0126诱导肿瘤细胞凋亡,其中20μM浓度的U0126凋亡作用最强(P<0.01);U0126使p-p42/44下调而使p-p38上调。结论 U0126诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖,其机制可能是抑制p-p42/44表达,并使p-p38表达增强。

慢病毒介导的中性内肽酶对Aβ诱导的SK-N-SH细胞凋亡的影响

目的:探讨脑中性内肽酶(NEP)外源表达对神经毒物质β淀粉样肽(Aβ)诱导SK-N-SH细胞凋亡的影响。方法:采用脂质体法将含中性内肽酶NEP的四质粒系统慢病毒载体转染293FT包装细胞,制备高滴度病毒载体,感染Aβ处理的SK-N-SH细胞,用Western blotting方法检测NEP对Aβ的降解作用、MTT法检测细胞存活率、流式细胞术分析细胞凋亡情况、RT-PCR技术测定凋亡相关基因bcl-2及bax的表达及caspase-3活性检测。结果:胞内高表达的NEP能够显著降解Aβ,其降解程度与NEP的表达量有剂量依赖关系。细胞存活率及流式细胞术检测结果显示NEP高表达可减轻Aβ诱导的细胞凋亡,细胞存活率于感染病毒后48 h最强,为对照的170%(P<0.01),NEP活性组的凋亡率为3.86%,低于对照组的6.41%;RT-PCR结果显示NEP对Aβ诱导的细胞凋亡保护作用可能是通过减少bax的表达,抑制了caspase-3的激活程度来实现的。结论:NEP可以降解Aβ,可以保护由Aβ沉积所致的神经细胞凋亡。

鞘脂激活蛋白C通过上调雄激素受体的表达与活性促进LNCaP细胞的增殖

目的构建含有鞘脂激活蛋白C(Saposin C)的真核表达载体,探讨Saposin C在前列腺癌雄激素依赖性前列腺细胞(LNCaP)中对雄激素受体(AR)及细胞增殖的影响。方法通过cDNA法构建含有TAT和Saposin C的真核表达载体,并将其转染至前列腺癌LNCaP细胞。通过MTS、RT-PCR、Western blot等实验,分别检测TAT-Saposin C与Saposin C的AR基因表达与其转录激活功能,以及对前列腺癌细胞增殖的影响。结果在不依赖雄激素的情况下,Saposin C能够上调AR与PSA基因mRNA和蛋白质水平的表达,增加AR的转录激活活性,刺激LNCaP细胞的增殖。结论 Saposin C通过雄激素非依赖性上调AR的表达与转录激活活性,促进LNCaP细胞的增殖。

丙型肝炎病毒1bDY株ns5a基因的克隆及其所表达融合蛋白的免疫原性分析

目的:克隆和表达丙型肝炎病毒(HCV)1b型地方株DY株ns5a基因,为进一步研究和应用该基因及其表达产物奠定基础。方法:采用基因重组技术完成实验。设计特异的引物,采用巢式PCR法,从含HCV 1b DY株全长cDNA的质粒HCV17中扩增出目的片段,约480bp;将其插入克隆载体pMD18-Tvector中,再与原核表达载体pET-28a重组;经酶切、PCR及测序鉴定后转化入BL21菌株,在IPTG诱导下进行融合蛋白的表达。采用SDS-PAGE电泳及Western-blot检测NS5A蛋白表达水平。结果:含有HCV 1b DY株ns5a基因的重组体构建成功,并得以表达蛋白,并且NS5A蛋白具有与HCV患者阳性血清中的多克隆的结合活性,具有很好的免疫原性。结论:运用原核细胞基因工程技术成功构建和表达了HCV 1b DY株ns5a基因,为进一步研究HCVns5a的基因型及探讨该基因编码的NS5A蛋白的性质和生物学活性创造条件。

鞘脂激活蛋白C抑制LNCaP细胞雄激素受体降解的研究

目的:探讨Saposin C对LNCaP细胞雄激素受体(AR)蛋白降解的影响。方法:通过转染实验,将Saposin C、TAT-Saposin C真核表达载体转染至LNCaP细胞,MTS检测Saposin C对LNCaP细胞增殖的影响,Western blot检测Saposin C对AR蛋白水平的影响及其在细胞中降解的调节作用。结果:Saposin C抑制LNCaP细胞AR蛋白的降解,上调胞内AR蛋白水平,促进LNCaP细胞增殖。结论:Saposin C增强AR蛋白的稳定性抑制其在细胞中的降解。

Saposin C抑制雄激素受体的多泛素化以及在蛋白酶体中的降解(英文)

本研究旨在证实鞘脂活化蛋白C(saposin C)对雄激素受体(AR)多泛素化降解的影响及其机制.通过将真核表达载体saposin C转染LNCaP细胞,发现saposin C上调AR的蛋白水平和转录激活活性.进一步将野生型和突变型泛素质粒Ubwt和UbK48R分别与saposin C共转染LNCaP细胞发现,saposin C能够促进AR蛋白的单泛素化形式的稳定性,抑制AR的多泛素化修饰及其在蛋白酶体中的降解.其分子机制是saposin C、Ub和AR三者形成复合体,抑制了AR的进一步多泛素化过程.同时还发现,在这一机制中,细胞内低浓度的雄激素(0.1 nmol/L)与saposin C具有协同作用.

丙型肝炎病毒1b DY株ns5a基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的克隆和表达丙型肝炎病毒(HCV)1b型地方株DY株ns5a基因。方法运用原核细胞基因工程技术。设计目的基因的特异引物,采用巢式PCR法,从含HCV 1b DY株全长cDNA的质粒HCV17中扩增出约480 bp的目的片段,将其插入克隆载体pMD18-Tvector中,再亚克隆到原核表达载体pET-28a中;经酶切、PCR及测序鉴定后转化入BL21菌株,在IPTG诱导下进行融合蛋白的表达;采用SDS-PAGE电泳及Western-blot检测NS5A蛋白的表达水平。结果成功构建了含有HCV1b DY株ns5a基因的重组体,并得以表达。结论成功构建和表达了HCV1b DY株ns5a基因,为进一步研究HCVns5a的基因型及探讨该基因编码的NS5A蛋白的性质和生物学活性创造了条件。

Saposin C促进PC3细胞p27^(KIP1)蛋白泛素化降解的研究

目的:探讨Saposin C促进PC3细胞抑癌基因p27KIP1蛋白泛素化降解,刺激细胞增殖,以及与PI3K/AKT信号通路的关系。方法:利用含有Saposin C的真核表达载体转染PC3细胞,检测Saposin C对PC3细胞Skp2、抑癌基因p27KIP1蛋白水平的调节以及对细胞增殖的影响。结果:Saposin C通过激活PI3K/AKT信号途径上调细胞内Skp2的蛋白含量,下调抑癌基因p27KIP1的蛋白水平,其机制是加速p27KIP1的蛋白降解,促进PC3细胞增殖。结论:Saposin C在PC3细胞中通过激活PI3K/AKT信号途径促进抑癌基因p27KIP1的蛋白泛素化降解,刺激细胞增殖。

Ⅰ型糖尿病病理研究进展

Ⅰ型糖尿病是一种自体免疫疾病,临床病理表现为免疫系统攻击并杀死全部胰岛β细胞,发病机制至今不甚明确。本文从控制细胞表面人类白细胞抗原表达和编码免疫调节所需蛋白质的两种基因座切入,选取研究中的典型示例,着重介绍Ⅰ型糖尿病病理研究在基因致病方面的最新进展和总体方向,总结概括研究者迄今已掌握的病理机制。

神经特异性启动子PDGF-EGFP载体的构建及组织表达特异性鉴定

目的构建含有神经特异性启动子PDGF的绿色荧光蛋白真核表达载体,并进行组织特异性鉴定。方法提取人外周血基因组DNA,采用PCR技术扩增PDGF-B链上游启动子序列,将其定向克隆至增强型绿色荧光蛋白报告基因表达质粒pEGFP-1中,构建真核表达载体pPDGF-EGFP。将重组载体转染至人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH,以及4种其他组织来源细胞系,观察绿色荧光蛋白表达以鉴定其神经特异性。结果成功构建表达载体pPDGF-EGFP,经转染显示pPDGF-EGFP在人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH中高表达,而在其它4种非神经组织来源细胞株中极少量表达或未见表达。结论重组真核表达载体pPDGF-EGFP有较高的神经组织特异性,为进一步研究神经系统疾病的靶向基因治疗奠定了基础。