三七总皂苷抑制人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞系增殖和促凋亡

目的:探讨三七总皂苷对人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的的影响及可能机制。方法:MH7A细胞用不同剂量(0.5、1.0、2.0mg/mL)三七总皂苷干预细胞24h后,CCK-8、流式细胞术、划痕实验和Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭,蛋白质印迹法检测蛋白(Ki-67、PCNA、E-cadherin和N-cadherin)的表达,qRT-PCR法检测miR-335-5p表达。转染miR-335-5p模拟物、转染miR-335-5p抑制剂至MH7A细胞后再用2.0mg/mL三七总皂苷干预24h,然后采用上述相同方法检测细胞增殖、迁移和侵袭。结果:与对照组比较,三七总皂苷降低MH7A细胞A值、划痕愈合率、侵袭数及Ki-67、PCNA和N-cadherin蛋白表达量(P<0.05),而提高细胞凋亡率、E-cadherin蛋白表达量(P<0.05),同时促进细胞中miR-335-5p表达(P<0.05)。上调miR-335-5p后,MH7A细胞A值、划痕愈合率、侵袭数及Ki-67、PCNA和N-cadherin蛋白表达量均降低(P<0.05),细胞凋亡率、E-cadherin蛋白表达量升高(P<0.05)。下调miR-335-5p逆转了三七总皂苷对MH7A细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论:三七总皂苷可能通过上调miR-335-5p抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡。

基于Wnt/β-连环蛋白通路探究金天格对肿瘤坏死因子-α诱导的小鼠MC3T3E1细胞生物学功能的影响实验研究

目的:探讨金天格通过调节Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)通路对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的小鼠成骨细胞(MC3T3E1)细胞生物学功能的影响。方法:体外培养MC3T3E1细胞,分为对照组、TNF-α组(50 ng/ml TNF-α)、L-金天格组(50 ng/ml TNF-α+10^(-6) g/L金天格)、M-金天格组(50 ng/ml TNF-α+10-5 g/L金天格)、H-金天格组(50 ng/ml TNF-α+10^(-4) g/L金天格)、Dickkopf-1(DKK-1)组(50 ng/ml TNF-α+10 ng/ml Wnt/β-catenin通路抑制剂DKK-1)、H-金天格+LiCl组(50 ng/ml TNF-α+10^(-4) g/L金天格+20μmol/L Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl)。用CCK-8试剂盒对细胞活性进行检测,用流式细胞仪对细胞凋亡情况进行检测,用酶联免疫吸附试验对细胞白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-6水平进行检测,用Western blot对细胞凋亡相关蛋白及Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达情况进行检测。结果:与对照组比较,TNF-α组细胞活性、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、细胞程序性死亡配体-1(PD-L1)蛋白表达降低,细胞凋亡率、IL-1β、IL-6水平以及B细胞淋巴瘤(Bax)、β-catenin、转录因子7样2(TCF7L2)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白表达升高(均P<0.05)。与TNF-α组比较,L-金天格组、M-金天格组、H-金天格组、DKK-1组细胞活性及Bcl-2、PD-L1蛋白表达升高,细胞凋亡率、IL-1β、IL-6水平以及Bax、β-catenin、TCF7L2、Cyclin D1蛋白表达降低(均P<0.05)。与H-金天格组比较,H-金天格+LiCl组细胞活性及Bcl-2、PD-L1蛋白表达降低,细胞凋亡率、IL-1β、IL-6水平以及Bax、β-catenin、TCF7L2、Cyclin D1蛋白表达升高(均P<0.05)。结论:金天格可能通过抑制Wnt/β-catenin通路减轻TNF-α诱导的MC3T3E1细胞损伤。

TGFA通过PI3K/AKT信号通路对骨关节炎小鼠软骨细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨转化生长因子α(TGFA)通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路对骨关节炎(OA)小鼠软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法小鼠分为假手术组及模型组,免疫组化法检测软骨组织Ki67、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3阳性细胞率;分离OA小鼠软骨细胞,分为对照组、TGFA低浓度组(5 ng/ml TGFA)、TGFA高浓度组(10 ng/ml TGFA)及通路抑制组(10 ng/ml TGFA+10μmol/L LY294002),均加10 ng/ml白细胞介素(IL)-1β,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western印迹法检测软骨组织、软骨细胞中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、Ki67、Caspase-3蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组小鼠软骨组织Ki67阳性细胞率及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、Ki67蛋白表达水平显著降低,Caspase-3阳性细胞率及Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与对照组相比,TGFA低、高浓度组OA小鼠软骨细胞OD值及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、Ki67蛋白表达水平显著升高,细胞凋亡率及Caspase-3蛋白表达水平显著降低,且TGFA高浓度组明显优于TGFA低浓度组(P<0.05);与TGFA高浓度组相比,通路抑制组OA小鼠软骨细胞OD值及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、Ki67蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率及Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论TGFA可促进OA小鼠软骨细胞增殖,抑制细胞凋亡,其机制可能与激活PI3K/AKT通路,调控Ki67、Caspase-3表达有关。

LncRNA NUTM2A-AS1调控miR-183-5p/TGFα影响骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的研究

目的探讨LncRNA NUTM2A-AS1对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的影响及分子机制。方法将软骨细胞随机分为对照组、模型组(5μg/L的IL-1β)、miR-183-5p+模型组、miR-NC+模型组、si-LncRNA NUTM2A-AS1+模型组、si-TGFα+模型组、si-NC+模型组、pcDNA-TGFα+si-LncRNA NUTM2A-AS1+模型组、pcDNA+si-LncRNA NUTM2A-AS1+模型组;运用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测LncRNA NUTM2A-AS1、miR-183-5p和TGFαmRNA的表达水平;运用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活性;运用流式细胞术检测软骨细胞凋亡情况;通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测TNF-α、IL-6水平;通过双荧光素酶报告实验检测NUTM2A-AS1、miR-183-5p、TGFα之间的靶向关系。结果IL-1β诱导的软骨细胞中LncRNA NUTM2A-AS1和TGFα表达升高,miR-183-5p表达降低,软骨细胞活性降低,而凋亡率升高,TNF-α、IL-6水平升高。低表达LncRNA NUTM2A-AS1、低表达TGFα或过表达miR-183-5p后可促进细胞增殖及抑制细胞凋亡、炎症反应。结论低表达LncRNA NUTM2A-AS1通过调控miR-183-5p/TGFα抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及炎症反应,促进细胞存活。

血清降钙素原诊断成人革兰阴性菌血流感染价值的Meta分析

目的系统评价血清降钙素原(PCT)对成人革兰阴性菌血流感染的诊断价值。方法计算机检索主要中英文数据库,收集关于血清PCT对成人革兰阴性菌血流感染的诊断研究。由2名研究者分别进行文献筛选、数据提取和质量评价。采用Meta-Disc 1.4软件进行统计分析。计算合并灵敏度和特异度、阳性似然比、阴性似然比估计值,构建受试者工作特征曲线,计算曲线下面积(AUC)并评估总体诊断性能。结果共纳入36项研究,Meta分析结果显示,血清PCT诊断革兰阴性菌血流感染的合并灵敏度和特异度分别为0.72(95%CI:0.71~0.73)和0.69(95%CI:0.68~0.70),AUC为0.828(95%CI:0.801~0.855)。结论血清PCT对成人革兰阴性菌血流感染具有较高的诊断价值,低血清PCT水平可用来排除革兰阴性菌血流感染,PCT动态变化及特定细菌感染类型的PCT水平仍需进一步研究。

马兜铃酸诱导TM3小鼠睾丸间质细胞凋亡机制

目的:探讨马兜铃酸(AAs)对TM3细胞凋亡的作用及分子机制。方法:用2.5、10、25、100、400、1000μmol/L浓度的马兜铃酸分别对TM3细胞作用24、48、72 h后,CCK-8法测定细胞活力;25、100、400μmol/L的马兜铃酸对TM3细胞作用48 h后,TUNEL检测细胞凋亡率,实时荧光定量法检测Caspase通路相关基因Caspase-3、Caspase-9和Bax mRNA相对表达情况,并通过Western blot法检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9和Bax蛋白表达水平变化。结果:不同浓度的马兜铃酸对小鼠睾丸间质细胞的活力有一定的抑制作用;用25、100、400μmol/L浓度的马兜铃酸处理TM3细胞48 h后,通过TUNEL染色发现,不同浓度的马兜铃酸能够促进细胞的凋亡,Caspase-3、Caspase-9、Bax mRNA和蛋白表达水平升高。结论:马兜铃酸通过Caspase途径促进TM3细胞的凋亡来影响生殖细胞的发育。

基于Wnt/β-连环蛋白信号通路探究金天格胶囊对肿瘤坏死因子α干预下前成骨细胞生物学功能的影响

目的:探讨基于Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路对金天格胶囊在肿瘤坏死因子α(TNF-α)干预下前成骨细胞生物学功能的影响。方法:取第4代MC3T3-E1细胞,将细胞分为正常组、TNF-α组(TNF-α15 ng/mL)、TNF-α+10μg/mL金天格组(TNF-α15 ng/mL+10μg/mL金天格胶囊)、TNF-α+20μg/mL金天格组(TNF-α15 ng/mL+20μg/mL金天格胶囊)、TNF-α+40μg/mL金天格组(TNF-α15 ng/mL+40μg/mL金天格胶囊)、Dickkopf相关蛋白1(DKK1)组(TNF-α15 ng/mL+40μg/mL金天格胶囊+0.1μg/mL Wnt/β-catenin信号通路抑制剂DKK1)、40μg/mL金天格组(40μg/mL金天格胶囊),各组细胞均使用相应药物共培养24 h。CCK8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测细胞上清白介素-6(IL-6)、IL-1β、IL-10水平;ALP试剂盒法检测细胞ALP活性;茜素红染色观察细胞矿化分化情况;qRT-PCR法和Western-Blot法检测细胞β-catenin、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)表达情况。结果:与正常组相比,TNF-α组细胞存活率、ALP活性、相对吸光度值、钙结节数量、上清IL-10水平、p-β-catenin、p-GSK-3β、RUNX2、OPG表达显著下降,细胞凋亡率、上清IL-6、IL-1β水平、RANKL表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);40μg/mL金天格组细胞存活率、ALP活性、相对吸光度值、钙结节数量、p-β-catenin、p-GSK-3β、RUNX2、OPG表达升高,细胞凋亡率、RANKL表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);与TNF-α组相比,TNF-α+10μg/mL金天格组、TNF-α+20μg/mL金天格组、TNF-α+40μg/mL金天格组细胞存活率、ALP活性、相对吸光度值、钙结节数量、上清IL-10水平、p-β-catenin、p-GSK-3β、RUNX2、OPG表达显著升高,细胞凋亡率、上清IL-6、IL-1β水平、RANKL表达下降,差异有统计学意义(P<0.05);Wnt/β-catenin信号通路抑制剂DKK1逆转了金天格胶囊对TNF-α刺激的前成骨细胞促增值和分化作用,并增加细胞凋亡和炎症反应。结论:金天格胶囊可通过Wnt/β-catenin信号通路抑制TNF-α诱导的前成骨细胞的凋亡和炎症,促进细胞增殖和分化。

赖氨葡锌颗粒辅以干扰素对轮状病毒性肠炎患儿机体微炎症 肠黏膜屏障功能的影响

目的 研究赖氨葡锌颗粒辅以干扰素对轮状病毒性肠炎患儿机体微炎症、肠黏膜屏障功能的影响。方法 将天津市宁河区医院于2019—2021年收治的轮状病毒性肠炎患儿150例随机分为对照组75例、研究组75例,两组患儿均行常规水、电解质酸碱失衡、脱水等纠正治疗,对照组患儿使用干扰素治疗,研究组患儿使用赖氨葡锌颗粒辅以干扰素方案治疗。在治疗前、后对比两组患儿肠道菌群数量变化、机体微炎症状态以及肠黏膜屏障功能异常的改善作用,分析两组临床各症状改善情况、治疗效果。结果 研究组治疗总有效率96.00%高于对照组的84.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组腹泻停止、发热消退、呕吐停止时间均短于对照组[腹泻停止(1.29±0.30)d vs.(2.34±0.65)d、发热消退(1.42±0.21)d vs.(2.21±0.29)d、呕吐停止(1.67±0.24)d vs.(2.11±0.32)d],差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后研究组肠道菌群数量含量异常恢复,乳酸杆菌、双歧杆菌数量均高于对照组[乳酸杆菌(9.81±0.57)lgCFU/g vs.(8.12±0.76)lgCFU/g、双歧杆菌数量(9.11±0.96)lgCFU/g vs.(7.95±0.53)lgCFU/g],差异有统计学意义(P<0.05);大肠埃希菌数量低于对照组[(6.00±0.32)lgCFU/g vs.(6.45±0.79)lgCFU/g],差异有统计学意义(P<0.01)。治疗后研究组机体微炎症指标水平均低于对照组[IL-1β(16.74±2.43)ng/L vs.(20.91±2.74)ng/L、IL-6(10.29±1.23)μg/L vs.(13.64±1.75)μg/L、CRP(7.82±0.98)mg/L vs.(10.12±1.87)mg/L、TNF-α(1.12±0.29)ng/L vs.(2.23±0.42)ng/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后研究组肠黏膜屏障功能改善优于对照组[DAO(0.87±0.09)mg/L vs.(1.22±0.12)mg/L、D-乳酸(1.23±0.56)mg/L vs.(3.86±0.81)mg/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 赖氨葡锌颗粒辅以干扰素可明显缓解轮状病毒性肠炎患儿临床症状,抑制机体微炎症反应,促进肠黏膜屏障功能恢复,效果理想。