钙敏感受体在无镁细胞外液中的表达及其与丝裂原活化蛋白激酶通路的关系

目的目前对癫痫机制中钙敏感受体(CaSR)的研究主要针对的是体内动物模型,以及单一细胞的体外培养模型。文中旨在探讨CaSR的表达情况及与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的关系。方法取wistar大鼠原代神经元与心肌细胞共同培养10 d后,将神经元与心肌细胞共培养的细胞随机分为5组:对照组(不做任何处理)、无镁组(无镁细胞外液)、无镁+精胺组(无镁细胞外液+激动剂精胺)、无镁+calhex231组(无镁细胞外液+抑制剂calhex231)、无镁+精胺+calhex231组(无镁细胞外液+精胺+calhex231)。无镁细胞外液孵育共培养细胞引起神经元异常放电,制备癫痫模型。采用HE染色、透射电镜观察各组细胞的形态学变化,MTT检测各组细胞的存活率,Western blot检测共培养细胞中CaSR、抗磷酸化的细胞外信号调节激酶(P-ERK)、抗磷酸化的c-jun N-末端激酶(P-JNK)、P-P38及Bcl-2蛋白的表达。结果与无镁组比较,无镁+精胺组细胞水肿、破裂程度更严重,出现细胞核碎裂;无镁+calhex231组细胞完整性较好。无镁+精胺+calhex231组细胞水肿、破裂,但较无镁+精胺组有改善。细胞存活率比较:无镁+精胺组[(61.08±15.44)%]、无镁+calhex231组[(82.80±14.37)%]及无镁+精胺+calhex231组[(82.04±17.37)%]较对照组[(100.00±0.00)%]显著降低(P<0.01);无镁+精胺组较无镁组[(88.88±9.85)%]显著降低(P<0.01)。无镁组CaSR蛋白量(0.73±0.19)高于对照组(0.45±0.12),低于无镁+精胺组(1.32±0.15)和无镁+精胺+calhex231组(1.19±0.12),差异有统计学意义(P<0.01)。无镁组Bcl-2、P-ERK蛋白表达量低于对照组,高于无镁+精胺组(P<0.01)。无镁组P-JNK、P-P38 MAPK蛋白量高于对照组,低于无镁+精胺组、无镁+精胺+calhex231组(P<0.05)。结论无镁细胞外液能够引起神经元与心肌细胞损伤,提高CaSR的表达及参与MAPK信号通路,介导神经元与心肌细胞凋亡,且CaSR抑制剂能够缓解CaSR激动剂引起的细胞损伤。