人神经营养素-3成熟区基因在大肠杆菌内的表达

【目的】应用基因工程方法制备人神经营养素 3(hNT 3)蛋白 ,为探讨其对阿尔茨海默病等中枢神经退行性疾病的治疗作用提供材料。【方法】将通过序列分析确定的hNT 3成熟区基因重组至原核表达质粒pBV2 2 0中 ,构建了重组表达载体 pBV/mhNT 3 ,在大肠杆菌中表达后 ,SDS PAGE法测定表达蛋白的相对分子质量 ,鸡胚背根节培养法检测其生物学活性。【结果】pBV/mhNT 3可在大肠杆菌中表达出一相对分子质量为 15× 10 3 的新蛋白 ,与hNT 3蛋白相对分子量相符。表达蛋白主要以包涵体形式存在 ,经纯化复性后 ,可明显促进鸡胚背根节的生长。【结论】人神经营养素 3成熟区基因可在大肠杆菌内高效表达hNT 3。

小梁细胞体外培养技术的建立及细胞骨架的形态学观察

目的 :建立体外培养牛眼小梁细胞 (bovinetrabecularmeshworkcell,TMcell)的方法并观察小梁细胞骨架 (cytosleleton)的形态学特征 ,尤其是actin和bubulin。方法 :采用常规方法对牛眼小梁细胞进行体外培养 ,并且免疫组织化学的方法神经原烯醇化酶及Ⅷ因子相关抗原 (NSE ,Ⅷfactorrelatedantigen) ,光学及电子透射显微镜对原代及传代培养的细胞进行形态学及生长特性的观察。并用免疫组化的方法对微丝及微管染色。结果 :牛眼小梁细胞培养成功 ,成活率 80 % - 10 0 % ,免疫组化法对actin和tubulin染色效果良好。结论 :体外培养牛眼小梁细胞技术是研究小梁细胞特性的重要实验技术。我们的研究说明选择性的收集小梁组织块是培养成功及保证成活率的有效手段。

细胞因子与脑缺血再灌注损伤

脑缺血再灌注时,缺血区有大量白细胞浸润。既往认为:缺血区白细胞的聚集浸润是继发于组织坏死的迟发的炎性反应,作用是清除梗死区坏死组织碎屑和参与疤痕形成;近年研究发现:白细胞不但在脑梗死的组织修复阶段起作用,而且脑缺血的早期即出现,在缺血再灌注损伤中发挥重要作用,使缺血向不可逆的梗死方向发展。白细胞到达缺血区是多步骤过程:附壁、与内皮细胞粘附、浸润到脑实质,每一步骤都受到细胞因子的调节。细胞因子是低分子量蛋白质。