放射治疗通过调节肝癌细胞EZH2/CXCL10通路增加自然杀伤细胞瘤内浸润的机制

目的探讨肝细胞癌(HCC)在接受放射治疗后自然杀伤(NK)细胞在肿瘤组织中的浸润作用及其相关机制。方法应用人肝癌细胞系SK-Hep-1构建HCC荷瘤小鼠模型,分为4组:对照组、放射治疗组、NK细胞清除组及NK清除联合放射治疗组,同时记录肿瘤生长情况。应用流式细胞术及免疫组织化学检测小鼠外周血NK细胞比率及肿瘤组织内NK细胞浸润情况。应用慢病毒构建Zeste同源增强子2(EZH2)过表达的SK-Hep-1细胞,并检测放射治疗后EZH2过表达细胞的CXC趋化因子配体10(CXCL10)的表达量及对NK细胞的趋化作用。应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白免疫印迹法(WB)及免疫组织化学检测评价SK-Hep-1细胞在体外、体内进行照射处理后EZH2、CXCL10 mRNA和蛋白的表达水平,通过趋化及阻断实验验证CXCL10对NK细胞的趋化作用。组间的比较采用独立样本t检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。结果HCC荷瘤小鼠模型实验提示,与放射治疗组相比,NK清除联合放射治疗组小鼠HCC肿瘤生长差异更显著(P<0.05);与对照组相比,放射治疗组小鼠外周血NK细胞数显著减少,而瘤内NK细胞浸润显著增加(P<0.05)。流式细胞术及免疫组织化学检测体内体外的表达量实验提示,与对照组SK-Hep-1细胞及小鼠肿瘤组织相比,放射治疗组肝癌细胞系及肿瘤组织EZH2 mRNA和蛋白表达水平均下降(P值均<0.05),CXCL10 mRNA和蛋白表达水平均升高(P值均<0.05)。放射治疗后的细胞上清液对NK细胞趋化作用增强,中和CXCL10后抑制了NK细胞趋化作用。EZH2过表达体内外实验证实,放射治疗可通过下调EZH2表达上调CXCL10 mRNA及蛋白表达水平(P值均<0.05)。放射治疗处理后,EZH2过表达对NK细胞趋化作用明显减弱。结论NK细胞作为免疫效应细胞直接参与放射治疗激活的抗HCC免疫过程。放射治疗通过抑制HCC中EZH2表达,上调CXCL10表达量从而增强NK细胞瘤内浸润。