荧光定量RT-PCR检测沙门氏菌方法的建立

目的建立沙门氏菌实时荧光定量PCR的快速检测方法 ,探讨该方法的可行性和应用价值。方法根据沙门氏菌fimY基因序列设计引物和探针,采用基因重组技术构建用于沙门氏菌检测的定量标准品,建立实时荧光定量PCR检测沙门氏菌的方法。结果成功构建了沙门氏菌重组质粒标准品和沙门氏菌实时荧光定量PCR方法 ;通过特异性、敏感性、稳定性和重复性验证,结果表明具有较好的特异性、敏感性、稳定性和重复性;对模拟标本与分离培养对比,二者符合率为100%。结论沙门氏菌实时荧光定量PCR检测方法的建立,为食源性沙门氏菌污染的快速检测提供依据,可应用于食品卫生监管、商品检验检疫以及临床诊断等。

乳品检测中实时荧光定量PCR仪的研制

完成了荧光检测系统、PCR热循环扩增系统、DNA核酸定量分析诊断系统等仪器关键技术研究,针对乳品检验及临床应用要求,在国家权威部门完成了仪器性能检测、使用验证、临床试验等全过程,实现了产品化和应用示范,并达到了准确性、安全性和有效性的要求。

生物检测及分子诊断高端装备的研制及应用

以生物检测与分子诊断技术发展为背景,总结了团队在医学诊断、疾控、食品安全、检疫检验、生物学医学科学研究等领域的分子诊断高端装备的研制情况,重点介绍了实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)分子诊断仪关键技术的研发及仪器工程化技术、检测性能的验证和在社会发展重点领域中的成功应用,手持式腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)生物发光法细菌快速检测仪的研发与应用,以及后续的全自动核酸定量检测与高分辨分析设备研制。

基于C8051F020的多通道手持式PCR扩增仪的设计

设计旨在研制一种新型的手持式PCR扩增仪,利用微电子机械系统(MEMS)技术制作PCR微加热芯片,采用聚二甲基硅氧烷(PDMS)材料制作一次性使用的微反应腔阵列,以C8051F020微控制器为核心搭建一个可以同时进行多路扩增的温控系统。它从根本上克服了传统台式PCR扩增仪的缺点,具有体积小、重量轻、反应速率快、节省反应试剂等诸多优点。

乳制品中阪崎肠杆菌的快速检测

阪崎肠杆菌是奶粉等乳制品中新发现的一种致病菌，可引起婴儿及早产儿脑膜炎、败血症及坏死性结肠炎的感染和暴发，由阪崎肠杆菌引发的疾病而导致的死亡率可达140％-80％。研究报告表明婴幼儿配方奶粉是其主要感染渠道，这已引起了世界多国的重视。

基于药物基因组学对《运动员常用治疗药物使用指南(2020版)》的解读

第二十四届冬奥会于2022年2月在北京举行。我国针对运动员常用药物制订《运动员常用治疗药物使用指南(2020版)》,并公布《兴奋剂目录(2022)》,以便于更好管理运动员用药。随着精准医学的发展,药物基因组学已成为指导临床个体化用药、评估药物疗效和不良反应发生风险的重要工具,药物基因组学结合遗传信息指导临床合理用药是精准医学的新兴应用之一。该文结合药物基因组学,对运动员常用的抗病毒药(利巴韦林),局部麻醉药(利多卡因和罗哌卡因),解热、镇痛、抗炎、抗痛风药(阿司匹林、布洛芬、美洛昔康),心血管系统药(氯沙坦、缬沙坦、卡托普利、氨氯地平、硝苯地平和阿托伐他汀钙片),消化系统药(奥美拉唑、泮托拉唑)等14个药物对应的基因位点进行综述,并归纳这14个药物的药物基因组临床应用证据级别,以期为运动员个体化用药提供参考依据。

PCR荧光技术在阪崎肠杆菌检测中的应用

本文就婴幼儿配方奶粉中食源性致病菌阪崎肠杆菌的分类、来源、特性、致病性以及减少婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的措施进行了介绍和综述。着重介绍了阪崎肠杆菌国内外检测标准、技术和检测仪器;综述了国际通行的保证食品安全的荧光PCR食源菌检测标准、仪器和方法;论述了荧光PCR法检测阪崎肠杆菌的政策要求、技术标准、实验技术、检测步骤以及荧光PCR实验室建设要点。

超敏荧光定量PCR法核酸检测与乙肝两对半联用在乙肝防控中的临床应用

目的探讨超敏荧光定量聚合酶链反应(PCR)法核酸检测与乙型肝炎(乙肝)两对半联用在乙肝防控中的临床应用。方法 155例乙肝患者分别采集血清样本,利用化学发光法和基于磁珠法自动化核酸提取的超敏荧光定量PCR法分别进行乙肝两对半和乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)检测。结果 155例样本中乙肝两对半共检出12种血清类型,其中小三阳占58.06%,大三阳占20.00%。155例样本超敏荧光定量PCR总阳性率为62.58%,检测下限低至10 IU/ml,其中小三阳阳性率为66.67%,HBVDNA平均含量(6.17±0.91)lg IU/ml;大三阳阳性率为90.32%,HBV-DNA平均含量(6.98±1.02)lg IU/ml。小三阳和大三阳组超敏荧光定量PCR阳性率及HBV-DNA平均含量比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论基于磁珠法自动化核酸提取的超敏荧光定量PCR法可准确测定病毒载量,检测下限低至10 IU/ml,与传统乙肝两对半联用有助于乙肝的临床诊断、用药指导及疗效监测。

一例猫皮肤真菌病的诊治

猫皮肤真菌病是宠物临床上常见的疾病,临床上以脱毛、结痂、鳞屑和瘙痒为主要特征。文章中介绍了某宠物医院接诊的1例猫皮肤真菌病病例,通过伍德氏灯检查和皮肤刮片显微镜检查确诊为皮肤真菌病,采取内外联合抗真菌药,全身抗真菌药浴的治疗方案,效果良好。

沙坦类药物代谢酶CYP2C9的基因遗传多态性在高血压患者中的分布特征

目的本研究旨在观察沙坦类药物代谢酶CYP2C9的基因遗传多态性在高血压患者中的等位基因间分布特征及其在年龄、性别间的差异。方法选取2018~2019年就诊于北京大学航天中心医院全院的原发性高血压患者1236例,采用PCR-熔解曲线法对高血压患者CYP2C9*3位点的基因多态性进行分析,以年龄、性别进行分组进行统计学分析。结果对1236例高血压患者进行CYP2C9*3位点的基因型分析,发现高血压人群中CYP2C9*3的C等位基因分布频率为4.98%,高于正常人群的发生率,年龄、性别间无统计学差异(P均<0.05)。结论高血压人群中CYP2C9*3的C等位基因分布频率高于正常人群,为高血压患者药物治疗提供指导价值。

3种核酸提取方法及3种实时荧光定量PCR仪检测结果的比较

目的 探讨不同核酸提取方法以及不同实时荧光定量PCR仪检测结果之间的差异.方法 随机挑选呼吸道、肠道病毒阳性标本各25份,采用3种方法（方法A、B、C）进行核酸提取,比较不同核酸提取方法之间的差异;随机挑选呼吸道、肠道病毒阳性核酸各25份,在3种实时荧光定量PCR仪（仪器A、B、C）上进行实时荧光定量PCR,比较不同实时荧光定量PCR仪之间的差异.检测结果采用定量资料的随机区组方法分析.结果 3种核酸提取方法检测结果存在差异（x2=42.9162,P〈0.001）,其中方法A、B,方法B、C之间的差异具有统计学意义（Z=7.025,P〈0.001;Z=7.9,P〈0.001）,方法A、C之间的差异无统计学意义（Z=0.837,P=0.3816〉0.05）.3种实时荧光定量PCR仪的检测结果也存在差异（x2=23.773,P〈0.001）,其中仪器A、B,仪器A、C之间的差异有统计学意义（Z=5.70,P〈0.001;Z=6.45,P〈0.001）,仪器B、C之间的差异无统计学意义（Z=0.75,P=0.4533〉0.05）.结论 在相同条件下,用不同的核酸提取方法,以及用不同的实时荧光定量PCR仪检测的结果均有差异,在实际工作中要综合考虑评价检测结果.

全自动核酸纯化系统在临床分子检测中的应用研究

目的探讨全自动核酸纯化系统在实时荧光定量检测中的应用价值。方法手工法和全自动核酸纯化系统配套不同磁珠法试剂,分别提取HCV及肠道病毒核酸样本,通过实施荧光定量检测不同方法提取的RNA,对比CT值,比较不同方法的提取效率。结果同一检测项目不同试剂的机提之间无显著差异(t1=-0.805,P1=>005;t4=-1.952,P4>0.05),机提与手工法之间有显著差异(t3=-3.314,P3<0.01;t2=--3.576,P2<0.01);手工法提取30个样本所需时间均为2h左右;而全自动核酸纯化系统同时提取32个样本所需时间均在1h以内;结论全自动核酸纯化系统提取效率明显优于手工法,NP968全自动核酸纯化系统磁珠法试剂是全开放性的,全自动核酸纯化系统操作简单、快速、提取效率高,值得临床检验推广。

高通量多靶标核酸自动化定量检测关键技术及产业化应用

高端的高通量多靶标核酸检测仪器设备我国很长时间一直依赖进口.西安交通大学教授、西安天隆科技有限公司(以下简称天隆科技)创始人彭年才教授领衔的产学研团队,20余年长期深耕核酸检测仪器试剂关键技术,在蒋庄德院士作为技术负责人、彭年才教授为项目负责人的国家重大科学仪器设备开发专项等国家科技项目支持下,解决了核酸提取易交叉污染、快速热循环基因扩增温度均匀性差、集成式MEMS生物传感以及多靶标核酸检测等系列技术难题,发明高通量多靶标核酸自动化定量检测技术并成功产业化系列核酸提取检测产品,研制了96通量6通道的高通量多靶标实时荧光定量PCR检测系统和全自动核酸提取检测工作站等5类12个型号仪器产品;研制了与上述仪器配套的10类200多个提取检测试剂,形成了一体化的高通量多靶标核酸自动化定量检测系统解决方案和产品组合,牵头制定国家医药行业标准YY/T 1717-2020核酸提取试剂盒(磁珠法).