沉默微小RNA-218表达保护STZ诱导的糖尿病大鼠肾组织

目的:探讨沉默微小RNA-218(microRNA-218,miR-218)表达对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病肾病大鼠肾脏组织的保护作用及其可能机制。方法:采用单次腹腔注射STZ(50 mg/kg)方法制备糖尿病大鼠模型并构建miR-218短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体。SD大鼠被随机分为健康对照组、糖尿病模型组、空载慢病毒组及miR-218-shRNA组。于自动生化仪上检测不同时点(4、8和12周)大鼠血糖、24h尿蛋白量、血清肌酐(serum creatinine,SCr)及血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)含量。实时荧光定量PCR(RTqPCR)检测肾脏组织miR-218的表达。RT-qPCR和Western blot检测血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、肾病蛋白(nephrin)和p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)的mRNA及蛋白表达水平。Caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性。末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)法检测肾脏组织细胞凋亡。结果:与健康对照组相比,STZ处理后大鼠miR-218表达水平显著升高。同时模型大鼠的血糖、24 h尿蛋白量、SCr及BUN含量显著升高(P<0.05);模型大鼠肾脏组织中HO-1和nephrin的mRNA和蛋白表达水平显著降低,而p38 MAPK蛋白的磷酸化水平显著升高;另外,模型大鼠肾脏组织中的caspase-3活性也显著升高。模型大鼠感染miR-218-shRNA后,miR-218表达水平显著下降并可以显著逆转上述效应。miR-218-shRNA组肾脏组织细胞的凋亡水平显著低于糖尿病模型组及空载慢病毒组。结论:miR-218参与了糖尿病大鼠的肾脏损伤,慢病毒载体沉默其表达能有效抑制肾脏组织细胞的凋亡,提示miR-218可以作为糖尿病肾病的基因治疗靶点。

维生素D3通过调节RUNX3抑制腹膜间皮细胞纤维化

目的探讨维生素D3对人腹膜间皮细胞(HPMC)纤维化的抑制作用及其可能机制。方法将永生化的人HPMC分为2组培养48 h,对照组为正常糖浓度组(葡萄糖浓度5.6 mmol/L),另一组为高糖处理组(葡萄糖浓度50 mmol/L);免疫组化检测HPMC中上皮细胞转分化过程中的上皮标志蛋白上皮型钙黏素(E-cadherin)和间皮细胞标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。用无水乙醇将维生素D稀释至(10-10、10-9、10-8)mol/L三种不同浓度后处理HPMC 24 h;Western blot法及实时定量PCR(qRT-PCR)检测RUNX3、E-cadherin及α-SMA的表达;构建重组质粒RUNX3-siRNA并转染高糖培养的HPMC,以获得敲减RUNX3基因的HPMC,Western blot法检测10-8mol/L维生素D3处理转染后各组细胞RUNX3、E-cadherin和α-SMA表达情况。结果高糖可诱导HPMC中E-cadherin蛋白水平显著下降,而α-SMA蛋白表达水平显著增加,提示高糖作用后HPMC发生上皮间质转分化;维生素D3可诱导高糖处理的HPMC中RUNX3 mRNA和蛋白表达水平增加,且这种作用存在剂量依从性。同时发现E-cadherin表达水平逐渐增加,α-SMA表达水平逐渐降低。以上结果提示:维生素D3可能通过调控RUNX3抑制高糖处理的HPMC发生上皮细胞转分化。敲减RUNX3基因后,维生素D3处理的高糖培养HPMC中E-cadherin及α-SMA表达水平无明显变化。结论维生素D3可能通过调控RUNX3的表达抑制HPMC的上皮间质转分化,从而抑制腹膜纤维化进程。

尿激酶联合低分子肝素治疗动静脉内瘘血栓形成的疗效分析

目的观察尿激酶联合低分子肝素治疗血液透析患者动静脉内瘘（AVF）血栓形成的疗效，并分析影响疗效的原因。方法17例维持性血液透析伴AVF血栓形成患者，将尿激酶30-40万U（加入0.154mol／L NaCl 30-50ml）在血管内瘘的动脉侧用微量泵缓慢注射，同时给予低分子肝素5000u／d皮下注射治疗，观察血栓形成时间、血栓长度、内瘘再通时间及不良反应，同时监测肝肾功能、血细胞分析、凝血酶原时间和纤维蛋白原含量。结果17例患者经治疗后12例内瘘恢复通畅，平均再通时间（15．5±11．8）h，5例治疗无效，改为手术切开取栓治疗。溶栓治疗成功者血栓形成时间明显短于未成功者，且尿激酶用量显著少于未成功者。结论尿激酶局部注射联合低分子肝素皮下注射治疗血液透析患者AVF血栓形成疗效好，操作简单，不良反应少，应作为血液透析患者AVF血栓形成治疗的首选方法。

达格列净联合骨化三醇治疗糖尿病肾病患者的效果及对微炎症状态的影响

目的探讨达格列净联合骨化三醇治疗糖尿病肾病患者的效果及对微炎症状态的影响。方法选取107例2型糖尿病肾病患者,随机分为观察组53例与对照组54例。两组患者在常规治疗的基础上给予口服达格列净,观察组同时给予口服骨化三醇。治疗3个月后,评价两组患者的临床疗效。比较两组患者治疗前后的收缩压、舒张压,糖化血红蛋白(HbA1c)、血清三酰甘油、总胆固醇、尿酸、白蛋白、尿素氮、肌酐水平及24 h尿蛋白,以及血清25-羟维生素D_(3)[25(OH)D_(3)]、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平。结果观察组治疗总有效率高于对照组(P<0.05)。治疗3个月后,观察组血清总25(OH)D_(3)、白蛋白水平均高于治疗前及对照组(均P<0.05);两组患者的收缩压、舒张压,血清HbA1c、三酰甘油、总胆固醇、尿酸、尿素氮、肌酐水平及24 h尿蛋白,以及血清hs-CRP、TNF-α、IL-1β、IL-6水平均较治疗前下降,且观察组24 h尿蛋白及血清尿素氮、肌酐、hs-CRP、TNF-α、IL-1β、IL-6水平均低于对照组(均P<0.05)。结论达格列净联合骨化三醇可降低糖尿病肾病患者的尿蛋白水平,改善患者肾功能,延缓病情进展,并能减轻患者微炎症状态。

基于Notch信号通路分析达格列净治疗早期糖尿病肾病大鼠的作用机制

目的探究达格列净治疗早期糖尿病肾病(DKD)大鼠的作用机制。方法选择适应性饲养1周的32只大鼠为研究对象。随机选取8只为对照组,其余注射链脲佐菌素(STZ)并给予高脂高糖饲料喂养制备DKD模型,将造模后的大鼠均分为模型组、二甲双胍组和达格列净组,分别用生理盐水、二甲双胍和达格列净进行灌胃处理。比较各组的血糖、肾功能指标、肾脏纤维化指标及Notch信号通路相关蛋白表达水平。结果灌胃开始第1天及第3、6、9周,模型组的空腹血糖(FBG)、血肌酐(Scr)、24 h尿微量白蛋白、尿素氮(Ure)、转化生长因子β1(TGF-β1)、胶原蛋白Ⅰ(Col-Ⅰ)水平均明显高于对照组(P<0.05);灌胃开始第1天及第3、6、9周,二甲双胍组和达格列净组的FBG、Scr、24h尿微量白蛋白、Ure、TGF-β1及Col-Ⅰ水平明显低于模型组,且达格列净组显著低于二甲双胍组(P<0.05)。灌胃处理9周后,达格列净组Notch信号通路蛋白Notch1、NICD1、Jagged1和Hes1表达水平明显低于模型组和二甲双胍组(P<0.05)。结论达格列净可通过抑制Notch信号通路过度激活,抑制相关蛋白表达和肾脏纤维化进程,发挥保护肾脏和治疗早期DKD的作用。