节律分子BMAL2对急性髓系白血病细胞有氧糖酵解和细胞增殖的影响

目的:了解类芳烃受体核转位蛋白2(BMAL2)在急性髓系白血病(AML)中的表达及与患者预后的关系,分析其对AML细胞有氧糖酵解和增殖的影响。方法:应用实时定量PCR法检测AML患者和正常对照组的骨髓单个核细胞中BMAL2的表达情况。利用美国国家生物技术信息中心公共数据库分析BMAL2表达与AML患者预后的相关性。通过慢病毒系统敲低AML细胞系HL-60和Kasumi-1中BMAL2的表达,葡萄糖摄取实验、乳酸含量实验、CCK-8法、细胞集落形成实验检测其对细胞糖代谢、细胞增殖的影响。结果:BMAL2 mRNA在AML中的表达水平显著高于正常对照组(P<0.01)。BMAL2表达高的AML患者总生存时间较低表达患者明显缩短(P<0.05)。敲低AML细胞系HL-60和Kasumi-1中的BMAL2后,细胞葡萄糖摄取减少,乳酸生成减少。RT-PCR及Western blot检测结果显示,BMAL2通过增强HIF1A的表达来促进AML细胞有氧糖酵解,进而促进细胞增殖。结论:BMAL2高表达于AML中,通过HIF1A增强AML细胞有氧糖酵解从而促进细胞增殖。

DC-CIK细胞用于治疗急性髓系白血病MRD的研究

目的:探讨DC-CIK细胞治疗急性髓系白血病微小残留病灶的疗效。方法:对11例经化疗后MRD阳性的急性髓系白血病患者进行DC-CIK过继免疫治疗,并用FCM监测MRD变化。结果:经FCM检测,11例患者中7例MRD转阴,并处于持续完全缓解状态,其余4例(M21例,M42例,M51例)均复发。结论:DC-CIK过继免疫治疗具有清除急性髓系白血病MRD的作用。

隐匿性HBV感染在多发性骨髓瘤发病中的作用研究

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）感染与多发性骨髓瘤（MM）发病之间的关系，为MM的防治提供流行病学依据。方法：收集2010年10月至2014年10月西安市中心医院、陕西省人民医院、西安市交通大学西北医院等5所三级甲等医院185例新发MM患者的l临床和实验室资料，随机选择在年龄和性别上匹配的同期住院非肿瘤患者作为对照。采用ELISA法检测外周血HBsAg；对于HBsAg阴性者，采用巢式PCR扩增检测HBVDNA的S、C区基因。用SPSS16．0统计学软件进行组间的差异比较；HBV与MM发病之间的关系采用Logistic回归分析。结果：MM患者的HBsAg阳性率为8．11％（15／185），隐匿性HBV感染（occulthepatitisBvirusinfection，OBI）阳性率为3．53％（6／170），HBV的总感染率为1l-35％（21／185）；对照组的HBsAg阳性率为4．40％（8／182），OBI阳性率为0．57％（1／174），HBV的总感染率为4．95％（9／182）。两组HBsAg和OBI阳性率的差异均无统计学意义（P〉0．05），但MM患者HBV总感染率显著高于对照组（x。=-5．02，P〈0．05）；其OR值为2．46（95％C1：1．10～5．53），P〈0．05。另外，HBV感染者Ⅲ期MM所占比例明显高于未感染者（85．71％VS．60．37％，X2=5．15，P〈0．05）；血白蛋白水平在HBV感染者中较未感染者明显减低（x2=5．60，P〈0．05），K／λ轻链比值在HBV感染者中明显低于未感染者（P〈0．05）。结论：将OBI纳入分析后，感染HBV发生MM的风险较未感染者明显增高；伴有HBV感染的MM患者肝脏损害更为严重，建议对HBsAg阴性的MM患者在化疗前开展OBI筛查，以预防出现HBV再激活而影响生存期。

三氧化二砷诱导人骨髓瘤细胞RPMI8226发生Caspase非依赖性细胞凋亡的实验研究

本研究探讨三氧化二砷(As2O3)作用于骨髓瘤细胞RPMI8226引起非Caspase依赖性细胞凋亡。用MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测RPMI8226细胞的凋亡率,Western blot方法检测细胞BCL-2及Caspase-3蛋白表达水平。结果表明,As2O3(0.1-20μmol/L)作用于人骨髓瘤细胞RPMI8226 24,48,72 h显示出明显的增殖抑制作用(P<0.05),呈浓度和时间依赖性。与As2O3(10μmol/L)单独处理组相比,zVAD-fmk(20μmol/L)与As2O3联合处理组的凋亡率未见明显变化。与As2O3(10μmol/L)单独处理组比较,zVAD-fmk与As2O3联合处理组Caspase-3、BCL-2蛋白表达明显升高。结论:As2O3对RPMI8226细胞的增殖有明显的抑制作用。As2O3可诱导RPMI8226细胞发生凋亡,其凋亡过程中可能存在Caspase非依赖性细胞凋亡程序。

人脐血CD_3AK细胞生物活性及抗瘤作用的实验研究

目的 应用抗CD3单克隆抗体(CD3McAb)和重组人白细胞介素- 2(rhIL- 2)共同诱导人脐血单个核细胞以制备CD3AK细胞,动态观察其体外增殖能力、杀伤活性、免疫表型变化及分泌细胞因子水平。方法 用台盼蓝活细胞计数计算细胞扩增倍数,MTT法测定细胞杀伤活性,间接免疫荧光法分析细胞免疫表型,ELISA双抗夹心法检测肿瘤坏死因子- α(TNF- α)、干扰素 -γ(IFN- γ)、白细胞介素 -6(IL- 6)的水平。结果 脐血CD3AK细胞在第2周增殖能力最强,增殖倍数为78.56;培养至第12天的脐血CD3AK细胞杀伤活性最高,并对多种靶细胞的杀伤作用显著;表型分析脐血CD3AK细胞属异质性细胞群,培养第7、14 天,群体中 CD3+、CD8+、CD25+、CD38+、CD16+及 CD56+ 细胞较培养前显著增加(P<0.01); CD3 AK细胞培养至第 3 天的上清中 TNF -α、IFN -γ、IL -6 水平明显升高。结论 脐血CD3AK细胞是一种具有广谱杀瘤活力且增殖活性强的免疫细胞。本研究为脐血 CD3 AK细胞的免疫治疗提供了实验和理论依据。

成人急性髓系白血病患者化疗后院内感染的危险因素

目的探讨成人急性髓系白血病(AML)患者化疗后院内感染危险因素。方法回顾性分析2016年12月至2018年12月间在西安市中心医院血液病研究所进行联合化疗的110例成人AML患者的临床资料,患者在化疗骨髓抑制期出现感染,且均为单部位感染,作为感染组;选取同期在本院行联合化疗且未感染的100例AML患者作为对照组。记录两组患者的一般临床资料,统计患者感染发生部位和病原菌的分布状况,通过单因素和Logistic回归分析影响患者院内感染的相关因素。结果感染组患者行化疗268例次,感染出现170例次,感染率为63.43%(170/268),主要感染部位为上呼吸道,占24.71%,其次为肺部感染症,占14.71%;患者170例次感染中获取35株病原菌,其阳性率为20.59%(35/170),其中15株为革兰阴性杆菌,占42.86%,10株为革兰阳性杆菌,占28.57%,5株为真菌,占14.29%,5株为其他,占14.29%;感染组和对照组患者在年龄、是否行糖皮质激素治疗、血红蛋白含量、白细胞含量、化疗强度、降钙素原含量、中性粒细胞数及内毒素阳性水平方面比较差异均有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析结果显示,中性粒细胞数、年龄高于40岁、白细胞数、血红蛋白含量、高强度化疗及行糖皮质激素治疗是患者院内感染的独立危险因素(P<0.05)。结论中性粒细胞数、年龄高于40岁、白细胞数、血红蛋白含量、高强度化疗及行糖皮质激素治疗为患者院内感染的独立危险因素,临床对有上述特征者要密切观察,做好相关的预防措施。

三七总皂甙对多发性骨髓瘤细胞的增殖抑制作用及机制的研究

目的:观察三七总皂甙(PNS)对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖抑制的作用;并观察三七总皂甙与阿霉素(adriamycin,ADM)联合,是否具有协同效应,为三七总皂甙应用于多发性骨髓瘤临床治疗提供一定的实验依据。方法:MTT法检测三七总皂甙对RPMI8226细胞增殖的影响;运用金氏公式分析三七总皂甙与ADM联合的协同效应;RT-PCR法检测Bcl-2、Bax mRNA水平的变化。结果:三七总皂甙可抑制RPMI8226细胞的增殖,并呈剂量依赖性,24h IC50值为213.42±2.21μg/ml;三七总皂甙与ADM联合,表现出协同效应;三七总皂甙与ADM联合处理MM细胞24h后,Bcl-2 mRNA表达较单独应用三七总皂甙或ADM前明显下调,而Bax表达则明显上调。结论:三七总皂甙可以抑制多发性骨髓瘤细胞增殖,联合阿霉素,具有协同效应;其作用可能是通过下调Bcl-2,上调Bax在转录水平的表达而实现的。

索拉菲尼诱导NB4细胞凋亡机制研究

目的:研究索拉菲尼对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:用不同浓度的索拉菲尼(0、1.5、3、6和12μmol/L)干预NB4细胞后,用MTT法检测细胞的增殖变化,用流式细胞术检测细胞的凋亡变化;提取细胞总蛋白后用Western blot方法检测细胞中凋亡相关分子Caspase-3、Caspase-8和MCL-1蛋白表达情况;提取细胞mRNA后用RT-PCR检测细胞中凋亡相关分子Caspase-3、Caspase-8和MCL-1基因表达。结果:与对照组相比,不同浓度的索拉菲尼干预均能有效抑制NB4细胞增殖,诱导细胞凋亡,并呈现浓度依赖效应。索拉菲尼干预可以上调NB4细胞促凋亡信号分子Caspase-3和Caspase-8的表达,并下调抗凋亡分子MCL-1的表达。结论:索拉菲尼可以抑制急性早幼粒细胞白血病NB4细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制与通过诱导细胞调节凋亡信号通路分子的表达有关。

急性颅脑损伤后血凝障碍的临床与实验室研究

目的 探讨急性颅脑损伤后血凝障碍的临床意义。方法 对 75例急性脑外伤患者伤后不同时间分别测定八项血凝指标 ,结合临床及影像学资料 ,进行比较分析。结果 伤后 2 4h内血凝指标检测结果与伤后 7d、1 4d比较均有非常显著的差异 ;按伤情轻重以及有无迟发出血进行分组比较 ,均具有统计学意义。结论 急性脑损伤后血凝障碍主要发生在伤后 2 4h内 ,与脑实质损伤程度及迟发颅内出血密切相关。检测结果出现三项以上异常 ,对预测迟发出血有重要价值 ;D dimer血浆水平≥ 8mg/L时 ,可作为预后险恶的可靠指标。

凝血异常对急性颅脑损伤预后意义的研究

目的 研究凝血异常对评估急性颅脑损伤伤情及预后的价值。方法 以PT、TT、KPTT、PC、Fg、D-二聚体、PLM活性、PAI等8项指标,对75例急性颅脑损伤患者于伤后24 h内、1 w、2 w时进行检测,与正常对照组比较;再按伤情轻重、损伤类型及转归等进行组间比较。结果 ①凝血异常,伤后24 h内为90.67％,DIC为10.6％,伤后2 w为68.97％。②伤后24 h内凝血异常为7项(P<0.001);1,2 w D-dimer显著异常(P<0.001)。③凝血异常在脑内血肿组,GCS≤8分组及死亡组均较对照组显著。早期6-7项异常,以D-dimer PLM及PAI最为显著(P<0.01);1,2 w此3项仍显著(P<0.01)。④24 h内凝血异常>3项,且以D-dimer、PLM、PAI为主,则迟发脑内出血发生率高。⑤早期D-dimer水平>8 mg/L,死亡率高(63.13％)。结论 凝血异常,在急性颅脑损伤中表现明显高达90.67％。早期血液高凝与继发纤溶亢进并存,后期以纤溶亢进为主。早期凝血异常指标>3项,且以纤溶指标为主时,伤情严重,迟发脑出血发生率高,死亡率高。提示凝血异常对评估脑外伤预后极有价值。

多发性骨髓瘤与HBV、HCV及EBV病毒感染的关系

目的:探讨多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)发病与乙肝病毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)和EB病毒(EBV)感染之间的相关性。方法:采用多中心、以医院为基础的1∶1配对病例对照研究。265例MM病例来自西安市五家三级甲等医院血液科在2011年10月至2014年9月期间住院患者。对照来自同期、同院住院的非肿瘤患者,与病例在性别和年龄(±5岁)上匹配。ELISA方法检测研究对象血清中的HBs Ag、抗-HBc、抗-HCV和抗-EBV。应用Logistic回归分析不同病毒感染与MM发病的关联性。结果:MM组HBs Ag阳性率与对照组相比差异无显著性意义(7.55%vs 4.49%,P>0.05)。MM组抗-HBc阳性率明显高于对照组(45.82%vs 33.64%,P<0.01),OR值为1.66(95%CI:1.17~2.36)。将HBs Ag和抗-HBc合并分析发现两组差异有统计学意义(P<0.01),OR值1.82(1.28~2.58)。HCV和EBV病毒阳性率在两组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:HBV感染增加MM的发病风险,而HCV和EBV感染与MM发病风险无明显关联。

三氧化二砷诱导人骨髓瘤细胞RPMI8226自噬及凋亡关系的研究

目的通过引入自噬及凋亡抑制剂观察三氧化二砷(As2O3)作用于骨髓瘤细胞RPMI 8226引起自噬和凋亡之间的关系。方法①MTT法计算细胞生长抑制率。②流式细胞仪检测RPMI 8226细胞的自噬率及凋亡率的变化。③通过Western Blot方法检测不同实验组Beclin-1及Caspase-3表达的变化。结果①各浓度As2O3对人骨髓瘤细胞RPMI 8226都显示出明显的生长抑制作用(P<0.05),且呈时间-剂量依赖性。②与As2O3单独处理组相比,3-MA预处理组,As2O3诱导RPMI 8226细胞凋亡率呈下降趋势,有统计学意义(P<0.05);zVAD-fmk与As2O3联合处理组,凋亡率未见明显变化(P>0.05)。与As2O3单独处理组相比,3-MA预处理组,As2O3诱导RPMI 8226细胞自噬率下降,有统计学意义(P<0.05);zVAD-fmk与As2O3联合处理组As2O3诱导RP-MI8226细胞自噬率亦下降,有统计学意义(P<0.05)。③与As2O3单独加药组比较,3-MA预处理组As2O3诱导RPMI 8226细胞Procaspase-3蛋白表达明显升高,Beclin-1表达下降;zVAD-fmk预处理组亦表现为Procaspase-3蛋白表达明显升高,Beclin-1下降。结论①不同浓度组As2O3作用24、48、72h对RPMI8226细胞的增殖均有明显的抑制作用(P<0.05),且该作用成时间-剂量依赖关系。②As2O3可诱导RPMI 8226细胞发生凋亡及自噬,两者的关系表现为互为前提。抑制任何一方都会导致另一方过程受抑。③As2O3诱导RPMI 8226细胞凋亡过程中可能存在Caspase非依赖型细胞凋亡程序。

qRT-PCR法用于检测模拟环境表面载体HBV DNA的可行性研究

目的探讨实时荧光定量PCR法(qRT-PCR法)用于检测模拟环境表面载体乙型肝炎病毒(HBV)DNA的可行性。方法用4种浓度的HBV标准品5×106、5×105、5×104、5×103 IU/mL污染载体,放置3 d和7 d,采用qRT-PCR法,检测HBV载体表面HBV DNA浓度。结果5×103 IU/mL标准品污染后的HBV载体,放置3 d后阳性检出率为70.0%,7 d后的阳性检出率为80.0%;其余3种浓度的标准品污染后的载体放置3、7 d的阳性检出率均为100.0%。4种浓度的标准品污染后的载体放置3 d后检测HBV DNA浓度差异有统计学意义(F=8.327,P<0.001);4种浓度的标准品污染后的载体放置7 d后检测HBV DNA浓度差异有统计学意义(F=7.302,P=0.001)。4种浓度的标准品污染后的载体放置3 d后HBV DNA浓度下降值与放置7 d后的下降值进行比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论qRT-PCR法可以应用于医疗机构环境表面HBV污染状况的检测;HBV污染浓度越高,HBV DNA浓度越高;病毒污染载体后,放置7 d仍可检出HBV DNA。

全反式维甲酸、α-干扰素联合小剂量阿糖胞苷治疗低增生性急性髓性白血病7例

我所自1995年-2004年期间收治低增生性急性髓性白血性7例，应用全反式维甲酸、α-干扰素联合小剂量阿糖胞苷方案治疗，均达完全缓解。临床疗效和随访结果显示此方案平均治疗时间35天，缓解率高，缓解期较长，副作用相对较小。

生物钟昼夜节律调节基因(CLOCK)在肝癌中高表达且与预后不良相关

目的明确生物钟昼夜节律调节基因(CLOCK)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及对细胞生长的作用。方法采用免疫组织化学染色法检测CLOCK在158例HCC组织及对应癌旁组织中的表达,利用HCC公共数据(共356例)验证CLOCK在HCC组织中的表达变化。单因素统计分析CLOCK表达与HCC患者临床病理特征间的关系,并且采用生存分析法比较CLOCK表达水平高低对HCC患者生存的影响。敲低肝癌Hep G2细胞中CLOCK水平,采用MTS法检测CLOCK对细胞生长的影响。结果 CLOCK在HCC组织高表达,而在356例HCC公共数据中,癌组织中CLOCK表达同样显著上调。按照CLOCK的表达水平,将158例HCC患者分为低表达组和高表达组,单因素分析结果显示,CLOCK在HCC中的表达与肿瘤直径、TNM分期、门脉侵袭有关。CLOCK低表达组HCC患者的总生存时间和无复发生存时间均显著长于高表达组患者。在肝癌Hep G2细胞中,敲低肝癌细胞CLOCK后细胞增殖能力显著降低。结论 CLOCK在HCC中呈高表达趋势,与HCC的恶性程度相关,其表达上调提示HCC患者预后不良,敲低CLOCK显著抑制肝癌细胞生长。

吉非替尼与厄洛替尼治疗非小细胞肺癌脑转移的Meta分析

目的:比较吉非替尼与厄洛替尼治疗非小细胞肺癌脑转移的疗效与安全性。方法:计算机检索pubmed、embaes、中国期刊网全文数据库(CNKI)、万方医学网等数据库,收集吉非替尼与厄洛替尼治疗非小细胞肺癌脑转移的随机对照实验(randomized controlled trial,RCT),用Revman5.3软件进行Meta分析。结果:本文纳入的6个研究中共405名患者,Meta分析显示,在疗效方面,吉非替尼与厄洛替尼有效率、疾病控制率比较无统计学差异(P>0.05);在不良反应方面,厄洛替尼皮疹、恶心呕吐、肝功能损害的发生率均高于吉非替尼(P<0.05)。结论:非小细胞肺癌脑转移患者应用吉非替尼和厄洛替尼靶向治疗效果相当,但吉非替尼的不良反应发生率低。