直接免疫荧光法和实时荧光定量PCR法检测汉坦病毒效果的比较

目的比较直接免疫荧光法（DFA）和实时荧光定量PCR法检测鼠肺汉坦病毒（HV）带毒效果的差异。方法于2012年4-10月在陕西省户县、泾阳县和眉县3个肾综合征出血热（HFRS）高发县的居民区和野外鼠类活动地，采用鼠夹法捕获野鼠和家鼠共479只。解剖取鼠肺，1份鼠肺经冰冻切片后免疫荧光染色检测HV抗原，另1份经抽提组织RNA后应用实时荧光定量PCR法检测HV核酸。比较2种方法的病毒阳性检出率和检测结果的一致性。结果捕获的479只鼠中，包括家鼠105只、野鼠374只。DFA和实时荧光定量PCR两种方法在家鼠肺中均未检出HV，而DFA法检测野鼠带毒率为13．1％（49／374），实时荧光定量PCR法检测野鼠带毒率为14．7％（55／374），差异无统计学意义（X^2=0．402，P=0．526）。对每份鼠肺标本分别检测，DFA法检测鼠肺HV带毒率为10．2％（49／479），实时荧光定量PCR法检测带毒率为11．5％（55／479），两种方法比较差异无统计学意义（X^2=1．286，P=0．257），检测结果Kappa一致性系数（K）为68．2％，两种方法结果有高度一致性（X^2=11．759，P〈0．05）。以DFA法为标准，实时荧光定量PCR法在检测鼠肺HV的灵敏度为77．6％（38／49），特异度为96．1％（413／430）。DFA检测的9个疑似阳性结果中6个被实时荧光定量PCR方法证实，3个被否定。结论与DFA法相比，实时荧光定量PCR法同样可用于检测鼠肺中HV带毒率，而且结果更稳定。