两种国产甲型流感病毒抗原试剂检测2009H1N1流感病毒敏感性实验研究

目的评价两种国产甲型流感病毒抗原试剂盒检测2009H1N1流感病毒的敏感性。方法用这两种试剂检测已知病毒滴度和血凝素基因拷贝数的2009H1N1流感病毒毒株，计算试剂敏感性；同时与real—time RT PCR方法比较，探讨其临床应用。结果免疫渗滤法对2009H1N1流感病毒敏感性为2．58×10^5copies／ml，检测底线TCID50为10^2.33／ml；胶体金法为2．58×100^8copies／ml，TCID50为10^5.33／ml。对59份核酸阳性标本进行检测，免疫渗滤法34份阳性，胶体金法21份阳性，两种方法检出率比较差异有统计学意义（Х^2=5．76，P〈0．05）。结论免疫渗滤法虽然操作繁琐，但在对2009H1N1流感病毒进行检测时敏感性明显高于胶体金法。

MDA-9对结肠癌SW620细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨MDA-9在结肠癌细胞中的表达及对SW620细胞迁移和侵袭的影响。方法:RT-qPCR和Western blot分别检测人正常结肠上皮细胞NCM460和3种结肠癌细胞(HCT116、SW480、SW620)中MDA-9的mRNA和蛋白表达水平。在SW620细胞中转染MDA-9靶向干扰序列(si-MDA-9)及对照序列(si-NC),划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测p-FAK、MMP-2蛋白水平的变化。结果:3种结肠癌细胞中MDA-9的mRNA表达水平(P<0.001)及蛋白表达水平(P<0.01)均高于NCM460细胞。si-MDA-9组SW620细胞相对迁移率(60.7±5.8)%及侵袭率(55.3±10.3)%,均低于si-NC组的(98.3±14.3)%和(98.4±9.5)%,及空白对照组的(100±9.8)%和(100±13.1)%,差异具有统计学意义(P<0.01)。且si-MDA-9组细胞中p-FAK(P<0.05)和MMP-2(P<0.01)蛋白水平也均低于si-NC组和空白对照组。结论:MDA-9在结肠癌细胞中高表达,抑制其表达水平将导致SW620细胞迁移和侵袭能力下降,这可能和下调p-FAK、MMP-2蛋白表达相关。

2019年西安市甲型H3N2亚型流感病毒血凝素基因特征分析

目的了解西安市甲型流感病毒H3N2亚型血凝素基因特征及抗原变异情况。方法对2019年西安市分离到的流感毒株7株进行HA基因扩增及序列测定,同时获取WHO推荐的疫苗株HA基因序列,利用MEGA 6.0、BioEdit 7.2.5和NetNGlyc 1.0 Server在线分析软件对HA基因序列进行进化分析和抗原变异分析。结果 2019年3月西安市2株H3N2分离株的HA基因与2018—2019年疫苗株核苷酸序列同源性为98.7%~98.8%,与疫苗株相比共发生了13处氨基酸位点变异,其中位于E区的E78G变异发生在抗原决定簇,且未发生糖基化位点改变,10—11月5株H3N2分离株的HA基因与2019—2020年疫苗株核苷酸序列同源性为96.5%~96.8%,与疫苗株相比共发生了24个氨基酸位点变化,其中有6个发生在受体结合位点和抗原决定簇,分别为N137K、A144T、K160S、N187K、E78G、S153F,同时出现糖基化位点的增加或消失现象。结论 2019年上半年西安市H3N2流行株与WHO推荐2018—2019年疫苗株相比变异较少,下半年H3N2流行株与WHO推荐的2019—2020疫苗株匹配度程度降低,发生了抗原漂移现象,应加强流感病毒的分子变异监测。

低强度超声辐照联合微泡对急性心肌梗死大鼠微循环的改善作用

目的分析低强度超声辐照联合静脉注射造影剂微泡对急性心肌梗死(AMI)大鼠微循环的改善作用,并探究其内在机制。方法将造模成功的45只大鼠按随机数字表法分为AMI组、超声组、超声辐照联合SonoVue造影剂微泡组(联合组),每组15只。选取15只健康雄性SD大鼠作为正常对照组。其中,正常对照组、AMI组按照同样方式饲养,不做处理;超声组大鼠舌下静脉滴注20 ml 0.9%氯化钠溶液联合超声辐照心脏;联合组给予SonoVue微泡联合超声辐照心脏。比较各组大鼠的超声检测指标[左心室舒张末期内径(LVEDD)、室间隔厚度(IVS)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室射血分数(LVEF)]变化,心肌染色结果、心肌氧化应激及炎症检测结果[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6]以及心肌组织的Western Blot检测结果[SOD2、核因子κB(NF-κB)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)和IL-1前体(pro-IL-1)]。结果实验干预14 d后,正常对照组大鼠全部存活,AMI组大鼠存活10只,超声组大鼠存活11只,联合组大鼠存活14只。AMI组和超声组的LVEDD高于正常对照组[(82.0±3.2)mm、(82.7±2.2)mm比(79.3±2.8)mm](P<0.05)。联合组的LVESD低于AMI组和超声组[(49.1±2.4)mm比(55.0±4.8)mm、(53.2±4.5)mm],LVEF高于AMI组和超声组[(74.3±3.2)%比(66.8±5.4)%、(70.0±5.8)%](P<0.05)。联合组的毛细血管密度较AMI组和超声组明显增大,胶原纤维数明显减少,存活的心肌也最多。联合组的MDA、IL-1β、IL-6水平低于AMI组和超声组[(4525±269)mmol/g比(9306±1359)mmol/g、(9857±647)mmol/g,(160.7±10.8)ng/L比(280.4±18.6)ng/L、(265.4±23.4)ng/L,(95.3±9.4)ng/L比(136.0±10.8)ng/L、(131.8±10.9)ng/L],SOD水平高于AMI组和超声组[(89.6±5.1)U/mg比(54.5±3.0)U/mg、(60.1±4.1)U/mg](P<0.01)。联合组的SOD2蛋白表达水平高于AMI组、超声组(1.87±0.17比1.33±0.19、1.11±0.18)(P<0.01),联合组的NF-κB、NLRP3和pro-IL-1蛋白表达水平均低于AMI组和超声组(0.92±0.15比1.38±0.19、1.78±0.23,1.01±0.11比2.35±0.17、1.92±0.16,0.62±0.05比1.94±0.17、1.73±0.16)(P<0.01)。结论低强度超声辐照联合静脉注射造影剂微泡可以改善AMI大鼠的心肌微循环灌注,促进心肌功能恢复,其机制可能为抑制氧化应激进而减轻炎症反应。

一株GⅠ.3[P13]型诺如病毒的全基因组序列分析

诺如病毒(Norovirus,NoV)是人类非菌性急性肠胃炎的主要病原,GⅠ和GⅡ基因群在人类中流行较广,但对GⅠ群少有研究。为分析西安市2018年一株GⅠ型诺如病毒CHN/Xian/18N239的全基因组基因特征,本研究对某幼儿园急性肠胃炎病例肛拭子检出的一株GⅠ型诺如病毒,使用下一代测序方法对其全基因组测序,用Blastn比对和诺如病毒在线定型工具分析CHN/Xian/18N239的基因型,用MEGA-X对其进化分析,用Bioedit对其同源性、氨基酸变异和熵值进行计算,并用SWⅠSS-MODEL和PyMOL2.3.2预测和可视化三维结构。CHN/Xian/18N239株全长7684 nt,开放阅读框(ORF)1~3分别长5316 nt(84~5399 nt)、1635 nt(5383~7017 nt)和648 nt(7017~7664nt),ORF1和ORF2的重叠区长17 nt。Blastn比对显示其与GⅠ.3[P13]型2019年中国台湾株(MN922738)核苷酸同源性最高(98.91%)。系统进化分析表明其为GⅠ.3[P13]型,与韩国2017-2018年、中国台湾2018-2019年流行株核苷酸同源性为98.7%~99.3%。与参考序列U04469比,变异位点共75个,主要在P2区,其中在人外周血抗原结合位点Ⅱ有1个,且在A-Loop、T-loop、U-loop和S-loop区的三维结构改变较大。VP2区熵值为0的位点最少,VP1区易突变位点最多。应加强对本地区诺如病毒分子型别监测,提高防控能力。

病毒-宿主蛋白相互作用组学研究进展

病毒和宿主之间的蛋白相互作用贯穿其整个生命周期。对病毒-宿主蛋白相互作用组的研究不仅可以阐明病毒的感染过程和机体的防御机制,而且还可以揭示潜在的抗病毒治疗靶点。本文回顾了病毒-宿主蛋白相互作用组学常用的研究方法,并探讨了每种方法的优点及局限性。

风疹病毒衣壳蛋白与宿主细胞相互作用蛋白的初步筛选及分析

风疹病毒(Rubella virus,RV)的衣壳蛋白(Capsid protein,CP)不仅是病毒颗粒的重要组成部分,而且还可以通过与宿主蛋白之间的相互作用来调控病毒的转录和复制。为了系统研究衣壳蛋白与宿主蛋白之间的相互作用关系,我们从RV基因组中克隆获得衣壳蛋白基因序列,将该序列导入含有eXact⁃6His串联亲和纯化标签的慢病毒表达载体中,并构建了稳定表达eXact⁃6His⁃Capsid融合蛋白的293T细胞系。通过eXact和6His标签的两次亲和纯化获得衣壳蛋白相互作用蛋白复合物,质谱检测并筛选后发现22个可能与衣壳蛋白相互作用的宿主蛋白。随后构建衣壳蛋白的相互作用网络并进行功能学分析,发现其相互作用蛋白主要参与病毒感染、RNA剪切、细胞凋亡及酶相关通路等过程。

风疹病毒-宿主蛋白相互作用组学研究进展

风疹病毒(rubella virus, RV)的感染与致病机制取决于病毒与宿主细胞中蛋白的相互作用,这种相互作用扰乱宿主细胞正常防御机制并有助于病毒生命周期的完成。近年来,关于风疹病毒-宿主蛋白相互作用的研究越来越多,为有效防控该病提供了理论依据和具体实践。本文就风疹病毒蛋白组成、相关功能及与宿主蛋白相互作用等研究进展进行综述,旨在正确认识和深入理解风疹病毒致病机制,为风疹病毒感染的预防、治疗、疫苗或药物的研发提供参考资料。