人fadd基因cDNA的克隆和诱导舌癌细胞凋亡的研究

目的 :观察人 fadd基因对舌癌 (Tca 8113 )细胞的凋亡诱导作用。方法 :用反转录PCR获取人fadd基因 ,将基因克隆入真核表达载体 pcDNA3和 pIRES2 EGFP中 ,脂质体法转染舌癌细胞 ,通过细胞计数、荧光显微镜及电镜观察、流式细胞仪等检测被转染细胞的生长及其凋亡状况。结果 :成功获取了人fadd基因。与对照组相比 ,在转染 1～ 3d内 ,fadd基因的表达导致舌癌细胞存活数目减少 ,大量细胞发生凋亡。结论 :人 fadd基因可以诱导转染的舌癌细胞发生凋亡。

融合蛋白TNFR1/DED介导舌癌细胞凋亡的实验研究

目的 :构建含FADD及TNFR1基因功能结构域的融合基因TFL ,稳定转染入舌癌细胞后 ,通过体内、外实验初步观察融合蛋白TNFR1/DED在重组人肿瘤坏死因子 α(rhTNF α)作用下介导舌癌细胞凋亡的效应。方法 :反转录及重组PCR构建融合基因TFL ;鉴定融合蛋白TNFR1/DED在建系舌癌细胞T TFL中的表达 ,通过MTT法、形态学观察、DAN片段及体内抑瘤实验 ,观察融合蛋白TNFR1/DED介导舌癌细胞凋亡的效应。结果 :获得了人FADD及TNFR1基因并构建成功融合基因TFL ,转染入Tca 8113细胞后 ,能表达融合蛋白TNFR1/DED活性 ,体外实验观察到rhTNF α可有效地杀伤舌癌细胞 ,体内可明显抑制移植瘤的生长 ,且荷瘤动物内脏器官无病理性改变。结论 :融合蛋白TNFR1/DED可有效地介导舌癌细胞凋亡 ,为舌癌基因治疗研究提供实验基础。