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题名变形链球菌CH43变链素Ⅰ基因片段的克隆及表达
被引量:3
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作者
石馨
倪龙兴
田宇
邝容
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机构
西安第四军医大学口腔医学院牙体牙髓病学教研室
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出处
《实用口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期339-342,共4页
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基金
陕西省科技基金 2004k11-G3(3)
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文摘
目的:获得编码变形链球菌CH43变链素Ⅰ前体肽基因片段,并诱导其在不杀伤工程菌的前提下高效表达。方法:用PCR技术从变形链球菌CH43基因库中扩增出编码变链素Ⅰ成熟肽mutA基因片段相应大小的DNA片段,将片段与pMD18 T载体连接后测序。将测序正确的mutA按照BamHⅠ和HindⅢ酶切位点克隆入原核表达载体pProEX,将连接产物转化入E.coliDH5α,挑出阳性克隆,IPTG诱导表达重组的6×His融合蛋白。以IPTG浓度、A600值、诱导时间各梯度优化表达。结果:PCR获得的mutA序列与GenBank报道的一致(为147bp)。优化了诱导条件使重组载体在E.coliDH5α中高效表达,融合蛋白经SDS PAGE,在相对分子质量为5. 7×103处有特异的蛋白条带,在A600为1. 666时,加入IPTG至终浓度为1. 0mmol/L,诱导6h,目的蛋白表达量最高,占菌体总蛋白量的20%左右。结论:成功克隆变形链球菌CH43变链素ⅠmutA基因片段,并在E.coliDH5α中高效表达。
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关键词
变形链球菌
龋病
变链素
mutA
克隆
表达
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Keywords
Streptococcus mutan
Dental caries
Mutacin
mutA
Cloning
Expression
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分类号
R346
[医药卫生—基础医学]
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