人全层组织工程皮肤的研制

目的 :用组织工程的方法培养人的全层复合皮肤。方法 :胎儿背部皮肤为取材对象 ,分离表皮细胞和成纤维细胞。将成纤维细胞种植入牛I型胶原凝胶中 ,培养 3d后 ,将表皮细胞接种在凝胶的表面 ,继续培养 2d ,然后将凝胶移至气液面进行复层化。 5d后取材 ,进行HE染色 ,光镜和透射电镜观察。结果 :皮肤具备表皮层和真皮层 ,其结构和正常皮肤的结构相似。表皮层中包括基底层、棘层、颗粒层和角质层 ,细胞和细胞之间以细胞间桥的形式连接 ,个别部位有角化珠的存在。表皮层和真皮层之间有完整的基底膜。部分真皮层中可以见到长短不等的上皮钉突。透射电镜结果表明 ,表皮层的各层细胞之间以桥粒连接。结论 :以胎儿皮肤为细胞来源、牛I型胶原为支架的全层组织工程皮肤 ,是一种良好的生物活性皮肤替代物 ,可用来修复全层皮肤缺损。

生物活性皮肤替代物的超微结构观察

目的 :观察所培养的生物活性皮肤替代物的超微结构。方法 :以 5月龄胎儿的背部皮肤作为细胞来源 ,在牛I型胶原凝胶中立体培养成纤维细胞 ,3d后在凝胶表面接种表皮细胞 ,2d后将培养的皮肤替代物移至培养液气液面 ,促进上皮层的成熟和角化。观察HE染色后的人工皮肤组织学结构以及透射电镜下的超微结构。结果 :所培养的生物活性皮肤替代物同时含有表皮层和真皮层。表皮层中含有基底层、棘层、颗粒层和角质层。透射电镜观察结果显示 ,生物活性皮肤表皮层中 ,棘层细胞之间以桥粒连接 ,并具有天然皮肤中的板层体、张力纤维和脂滴等结构。结论 :生物活性皮肤替代物具有与天然皮肤类似的各种超微结构 。

颅骨锁骨发育不良患者牙齿矿化不全超微结构的研究

目的:研究成骨细胞特异性转录因子(runt-related gene2,runx2)基因突变导致的颅骨锁骨发育不良(cleidocranial dysplasia,CCD)患牙超微结构以及Ca、P元素含量的改变。方法:收集临床CCD患者的滞留乳牙以及萌出下恒切牙,制备牙齿磨片,通过扫描电镜研究CCD患牙超微结构的改变,通过色散能分光计对牙釉质和牙本质中Ca、P元素含量进行能谱分析。结果:与正常牙齿相比,CCD患牙发育不良:釉丛和釉板结构增多,釉牙本质界平直,牙本质小管分布不均,牙骨质薄;牙釉质和牙本质中Ca、P含量降低。结论:runx2基因突变对CCD患者牙齿构成及其组成元素均有很大的影响,表明runx2基因对于牙齿正常发育有重要作用。

HEMA-胶原抗菌药物缓释膜的制备与性能测定

目的 :研制甲基丙烯酸羟乙酯 (HEMA) 胶原抗菌药物缓释膜 ,考察其各项性能 ,为进一步应用于临床奠定基础。方法 :制备包裹有磺胺嘧啶银 (SD Ag)的HEMA 胶原抗菌药物缓释膜 ,测定膜的物理特性、载药量和包裹率等 ,并采用动态透析法考察体外药物释放特性。结果 :制备后得到乳白色半透明状、均匀有弹性的凝胶膜状物。平均载药率为 4.97% ,平均包裹率为 99.3 4%。体外 4h内释放接近 5 0 %的SD Ag ,8h内释放近70 % ,48h释放 99%以上的药物。结论 :此制备方法简单快速 ,成膜性好。HEMA 胶原抗菌药物缓释膜的体外累积释放量测定结果明显好于对照组 (P <0 .0 0 1)。

矿化液对骨髓基质细胞的生物学特性的影响

目的 :探讨骨髓基质细胞在矿化液的作用下生长、分化以及基质分泌情况的改变。方法 :采用矿化液 ( φ =10 %FBS、10nmol/L地塞米松、5 0mg/LL 维生素C和 10mmol/Lβ 甘油磷酸钠的DMEM培养液 )诱导体外培养第 3代骨髓基质细胞 ,以含 φ =10 %FBS的DMEM培养基培养第 3代骨髓基质细胞作对照。倒置相差显微镜观察细胞形态的改变 ,MTT法观察细胞诱导前后增殖情况 ,组织化学方法检测诱导前及诱导后 3、5、7d的碱性磷酸酶活性、免疫组织化学方法检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、骨形成蛋白的合成情况 ,VonKossa方法观察矿化结节的形成情况。结果 :在矿化液的作用下骨髓基质细胞增殖性能降低 ,诱导后第 5天细胞增殖速度降低。随时间的延长碱性磷酸酶的活性增加 ,5d时Ⅰ型胶原、骨形成蛋白呈强阳性表达 ,Ⅲ型胶原逐渐呈弱阳性或阴性表达。诱导 2 0d可见矿化结节。结论 :矿化液促使骨髓基质细胞向成骨细胞转化 ,诱导第 5天的细胞可作为种子细胞与骨组织工程支架材料复合。

出生后大鼠牙胚组织中nfic基因多种选择性剪接体的克隆研究

目的:研究nfic基因在牙齿发育中的作用。方法:提取出生后SD大鼠磨牙牙胚组织总mRNA, 反转录合成cDNA。根据NCBIGeneBank中nficcDNA序列,分别设计2对PCR引物,进行nfic基因部分序列的扩增,扩增产物与T载体进行T/A连接,然后转化高效感受态大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆进行酶切鉴定,并对扩增产物进行序列测定。结果:P1、P2为引物进行PCR扩增,可见大小约350bp的特异扩增产物;以P3、P4为引物进行PCR扩增,电泳可见大小不同的3条特异扩增产物,经克隆后的序列测定,为大鼠nfic基因的3种可变剪接体。结论:nfic基因在大鼠牙齿发育后期、牙根的发育前期有表达,并且存在至少3种大鼠nfic基因选择性剪接体。

小鼠牙胚发育过程中collagenⅠ/Ⅲ的表达分布

目的:探讨collagenⅠ、Ⅲ在Balb/c小鼠牙胚发育各期的时间和空间分布特点,及两者在牙齿发育矿化中的作用.方法:用免疫组化方法检测小鼠牙胚发育各期collagenⅠ、Ⅲ的表达、分布. 结果:collagenⅢ:出生前E13 d小鼠牙胚蕾状期:口腔上皮细胞阳性表达(+);E14～17 d帽状期:口腔上皮细胞、成釉器星网层细胞表达弱阳性;E18～19 d和出生后P1 d钟状期与分化期:口腔上皮细胞、成釉器星网层细胞、牙乳头细胞、牙囊细胞表达阳性(+);出生后P2～10 d牙冠发育成熟期:成釉细胞、釉基质、成牙本质细胞、前期牙本质、牙乳头细胞、牙囊细胞、牙髓组织等均表达阳性(+);P10～30 d牙根发育成熟期:除上述细胞成分外,上皮根鞘、根周及根尖牙槽骨、牙骨质和牙周膜表达强阳性(艹).collagenⅠ:在蕾状期无表达;帽状期:口腔上皮细胞、成釉器星网层细胞表达阳性;钟状期与分化期:口腔上皮细胞、成釉器星网层细胞、牙乳头细胞、牙囊细胞表达阳性;牙冠和牙根发育期:其分布和表达类似于collagenⅢ.结论:鉴于collagenⅠ、Ⅲ的表达和分布,表明它们均参与了牙胚和牙体硬组织的发育形成,但似乎cllagenⅢ的作用比collagenⅠ更为广泛.

造釉细胞瘤中抗凋零基因bc1－2表达产物的分布及意义

抗凋零基因ｂｃ１－２的表达产物可抑制细胞调零过程，从而导致肿瘤发生。我们利用免疫组化方法观察了４０例造釉细胞瘤中ｂｃ１－２基因产物的表达与分布。ｂｃ１－２基因产物主要位于正常牙胚的造釉上皮、缩余釉上皮和造牙本质细胞中，正常口腔粘膜上皮和牙源性囊肿上皮的基底层细胞可见ｂｃ１－２基因产物阳性。４０例造釉细胞瘤，ｂｃ１－２阳性病例达９０％。本文结果提示，ｂｃ１－２在牙源性上皮中的表达与细胞的分化程度有关，ｂｃ１－２的过量表达可能参与了造釉细胞瘤的形态发生过程。