TNF-α诱导类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MAPKs通路的活化

目的 :研究INF α在类风湿关节炎 (Rheumatoidarthritis,RA)成纤维样滑膜细胞 (Fibroblast likesynoviocyte ,FLS)信号转导中MAPKs激活情况。方法 :原代培养类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞 ;应用Westernblot检测TNF α短时间内引起RAFLS蛋白质酪氨酸磷酸化状态变化 ,及其对MAPKs家族成员活化的浓度效应和时相特点。结果 :INF α可以瞬时引起RAFLS蛋白质酪氨酸磷酸化程度增加 ;并在短时间内激活MAPKs通路 (ERK2 、JNK2 、P38为主 ) ,不同浓度梯度TNF α作用显示 :10U/ml时对ERK2 、JNK2 即可达到峰值活化 ,10 0U/ml时P38达到最大活化。时间上 ,ERK2 、JNK2 、P38的活化分别在TNF α作用后 5min、15min、15min最明显。结论 :INF α在RAFLS信号转导中 ,可以瞬时导致蛋白质酪氨酸磷酸化程度增加 ,并同时激活MAPKs 3条通路 ,但是MAPKs

类风湿关节炎与骨性关节炎成纤维样滑膜细胞蛋白酪氨酸磷酸化状态的比较

目的比较类风湿关节炎 (rheumatoid arthritis, RA)与骨性关节炎（ osteoarthritis, OA）成纤维样滑膜细胞 (fibroblast like synoviocytes, FLS)蛋白酪氨酸磷酸化状态的差异。方法滑膜细胞原代培养 ,流式细胞仪鉴定滑膜细胞型别 ,提取蛋白进行 SDS－ PAGE单向电泳和 ICE－ PAGE双向电泳分离后，应用抗蛋白酪氨酸磷酸化抗体进行 western blot检测。结果滑膜细胞原代培养至第三代时， CD3、 CD14、 CD20、 CD11b、 von Willibrand factor阳性细胞比例小于 1％ ,RA FLS蛋白酪氨酸磷酸化程度是 OA FLS的 4～ 6倍。结论滑膜细胞原代培养至第三代时即可以获得型别均一的 FLS,RA FLS酪氨酸磷酸化程度较 OA FLS明显增高。