人原发性肝内胆管细胞癌发病因素的探讨

原发性肝癌在我国发病及死亡率均较高，其中人原发性肝内胆管细胞癌较少见，发病原因及发病机理尚不清楚。本实验应用免疫组织化学方法，在２０例肝内胆管细胞癌及其癌旁组织内检测乙型肝炎病毒ＨＢｘＡｇ和ＨＢｓＡｇ，结果发现１７例（８５％）均呈ＨＢＶ特异性抗原阳性反应，其中ＨＢｘＡｇ阳性检出率甚高（８０％）。提示，ＨＢＶ感染与人原发性肝内胆管细胞癌发病密切相关；ＨＢＶ的Ｘ基因可能在细胞癌变中起重要作用；ＨＢｘＡｇ的检测可作为临床诊断指标之一。

热休克蛋白70、90在白血病细胞K562巨噬细胞样分化过程中的表达研究

目的 复制hexamethylenebisacetamide(HMBA)诱导白血病细胞K5 6 2向巨噬细胞样分化的模型 ,检测热休克蛋白 70、90 (HSP70 ,HSP90 )在这一分化过程中的表达变化。方法 用HMBA诱导K5 6 2细胞并通过联苯胺、萘酚AS D氯醋酸酯酶及吉姆萨 瑞氏染色、电镜观察、流式细胞仪证实其分化方向 ,并用Westernblot方法检测K5 6 2细胞分化前后HSP70、HSP90的表达变化。结果 成功地复制了这一模型 ,并检测到HSP70、HSP90蛋白在K5 6 2细胞向巨噬细胞样分化后表达增高。结论 HSP70、HSP90可能在K5 6 2细胞向巨噬细胞样分化过程中有重要作用。

抗HFRS病毒McAb制剂对动物的致敏、毒性和血管刺激性实验

抗ＨＦＲＳ病毒ＭｃＡｂ制剂对动物的致敏、毒性和血管刺激性实验薛小平，徐志凯，王海涛，尹文，晏培松，阎岩，吴兴安（西安第四军医大学微生物学教研室，西安第四军医大学病理学教研室，西安７１００３２）肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）是一种急性病毒性传染病，迄今尚无...

表皮生长因子受体在颊粘膜上皮良性和恶性病变中的表达及意义

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)在颊粘膜上皮良性和恶性病变中的表达,探讨其在颊粘膜上皮细胞恶变中的关系及意义。方法:采用免疫组化ABC法检测EGFR在正常颊粘膜上皮、慢性非特异性炎症病变、鳞状细胞癌和癌旁组织中的表达。结果:EGFR在恶性病变和部分癌旁组织中的表达明显高于正常颊粘膜上皮和良性病变。结论:EGFR与颊粘膜上皮恶变具有相关性。部分癌旁组织因有恶变倾向,EGFR也呈高表达。

人原发性肝细胞肝癌中丙型肝炎病毒C_（33c）抗原及HBxAg的分布及意义

作者应用抗ＨＣＶＮＳ３区Ｃ３３ｃ抗原２Ｂ６株单克隆抗体和抗ＨＢｘＡｇ多克隆抗体，采用ＡＢＣ法对１０２例人原发性肝细胞肝癌（ＰＨＣ）组织进行了ＨＣＶ及ＨＢＶ抗原定位研究。ＨＣＶＣ３。抗原及ＨＢｘＡｇ在ＰＨＣ中的阳性检出率分别是８１．４％及７４．５％，Ｃ３３ｃ抗原或ＨＢｘＡｇ阳性占所检病例９４．１％，相同病例二者同时阳性为６１．８％。１０２例ＰＨＣ中５０例有癌旁肝组织，其Ｃ３３ｃ抗原和ＨＢｘＡｇ的阳性检出率分别是６２％和９２％。ＨＣＶＣ３３ｃ抗原定位于肝癌细胞的胞浆内，胞核未见阳性信号。Ｃ３３ｃ抗原阳性细胞在ＰＨＣ中呈散在、局灶分布为主，在癌旁肝组织呈弥漫分布为主。本文结果提示ＨＣＶ感染在ＰＨＣ的发生中可能起重要作用。

用PCR技术对原发性肝癌4号染色体标记的分析

应用聚合酶键反应扩增后变性聚丙烯酰胺凝胶电泳．分析了45例原发性肝癌第4号染色体长臂10个微小卫星多态性基因标记，以探讨等位基因变化与原发性肝癌发生的关系．结果显示，等位基因的杂合型丢失存在于45例中的12例肿瘤组织，10个基因标志中7个出现杂合型丢失，但丢失的频率较低，占杂合型的31—12．9％．结果表明，第4号染色体的等位基因改变与原发性肝癌的发生有关，但特征性不明显，提示原发性肝癌的发生可能是一个多基因变化、多步骤的过程．

乳腺癌p53蛋白过度表达和雌激素受体免疫组化检测及意义

应用免疫组化方法，对３２例乳腺癌组织中肿瘤抑制基因ｐ５３蛋白的表达和雌激素受体的状态分别进行了检测。结果３２例中ｐ５３蛋白阳性１８例，阳性率５６．３％，１８例伴有同侧腋下淋巴结转移者阳性１３例（７２．２％）３而１４例无转移者阳性５例（３５．７％）二组阳性率差异显著（ＰＭＯ．０５）。３２例中雌激素受体阳性１７例，１８例伴转移者阳性８例（４４．４％）；１４例无转移者阳性９例（６４．３％）。结果表明，ｐ５３蛋白的异常表达与乳腺癌的浸润转移有关，结合雌激素受体的检查，可作为临床预后判断一个有价值的标志。

提高非放射性标记核酸分子杂交敏感性的研讨

提高非放射性标记核酸分子杂交敏感性的研讨王伯云，彭玮丹，吴人亮，李玉松（西安第四军医大学病理学教研室，西安７１００３２）非同位素标记核酸探针应用于分子杂交技术，已受到重视，正在生物学和医学领域推广，在临床检测中已用于一些疾病的诊断，称多基因诊断。分子...

肝细胞角蛋白的表达

主要由细胞角蛋白构成的中间丝系统对维持肝脏细胞的结构与功能完整具有重要作用。在胚胎肝发生过程中细胞角蛋白表型可以发生转化 ,然而在乙型肝炎及肝硬变、肝损伤等肝脏疾病 ,尤其是肝脏肿瘤中 ,肝细胞细胞角蛋白表达也出现很大的异质性 ,表明肝脏细胞中所含的细胞角蛋白并不是固定不变的 ,在一定条件下 ,可以相互转化。因此细胞角蛋白作为细胞标志物 ,其表达的异常改变在肝脏疾病诊断中具有重要的应用价值。

颌骨软骨肉瘤cyclin D1和cdk4的表达及意义

目的 分析细胞周期素D1(cyclinD1)和细胞周期素依赖激酶 (cdk4 )在颌骨软骨肉瘤的表达及意义。方法 免疫组化ABC法检测cyclinD1和cdk4在 2 0例颌骨软骨肉瘤、8例骨软骨瘤和 4例软骨瘤的表达。结果 软骨肉瘤cyclinD1和cdk4阳性表达率分别为 70 % (14 /2 0 )和 6 5 % (13/2 0 ) ,二者的阳性表达存在正相关 (rs=0 .5 2 6 ,P <0 .0 5 ) ;而它们在骨软骨瘤的阳性表达率均为 12 .5 % (1/8) ,在软骨瘤无表达 ,与软骨肉瘤相比有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 CyclinD1和cdk4在颌骨软骨肉瘤过表达且与其发生和发展有关。

2型腺伴随病毒生物安全性的初步形态学观察

用野生型AAV－2感染宿主293细胞后对细胞进行了形态学观察，并采用AAVCap基因探针检测了感染细胞标本中的野生型AAVDNA；采用携带β-半乳糖苷酶基因，而不含AAVrep基因及其表达产物的重组AAV作对照，感染293细胞后检测细胞内β-半乳糖苷酶表达产物，同时对细胞作形态学观察。结果显示野生型AAV－2感染宿主细胞后24～48h，多数细胞胞体收缩、变形，部分细胞死亡、脱落，用Cap基因探针从病变的293细胞基因组DNA中检测到了野生AAVDNA；而被重组AAV感染的293细胞表达了β-半乳糖苷酶，而未出现细胞病变，本结果提示野生型AAV对敏感宿主细胞可表现出毒性作用，其原因可能与rep产物的作用有关。

肿瘤发生机制探析及“干细胞错位理论”的提出

长久以来，肿瘤的发生被认为是基因突变的结果，也就是所谓的基因突变论（Somatic mutation theory, SMT）。然而，这一学说目前已陷入泥沼，正受到越来越多的质疑。新的学说如组织结构场理论（Tissue organization field theory，TOFT）逐渐受到更多的关注。准确的说，目前正在经历一场肿瘤理论的危机。虽然每天都有大量的肿瘤研究的论文发表，但我们并不知道，肿瘤为什么会发生，怎样发生，为什么转移等。可以预见的是，在10年之内，科学界将会对肿瘤有完全不同的认识，肿瘤的基本理论将会被彻底改写。

穿刺组织的微波快速碳蜡制片法

穿刺组织的微波快速碳蜡制片法朱新生，眭翔，王伯云（西安第四军医大学病理学教研室，西安７１００３２）（北京医学高等专科学校病理学教研室，北京１０００７１）我们试用了微波辐射技术将穿刺组织（小块组织）进行了快速碳蜡包埋制片和ＨＥ染色．初步取得了较满意的效...

肝癌细胞内表达抗肝癌单链抗体对肝癌细胞的杀伤作用

为研究抗肝癌单链抗体（scFV）基因在肝癌细胞内表达对肝癌细胞的作用，采用脂质体转染技术把含抗人肝癌scFV基因的逆转录病毒载体导入人肝癌细胞系HCC9204中。G418筛选阳性细胞克隆。RNAdotblot杂交分析scFV基因在HCC细胞中的表达。光镜及电镜技术观察转染细胞结构的变化。流式细胞仪检测转染细胞的增殖活性。结果：抗人肝癌scFV在人肝癌细胞系HCC9204中稳定有效表达。流式细胞测定出现亚G1期死亡细胞峰；光镜下表现为细胞疏松，胞浆空泡变性，瘤巨细胞增多。电镜分析表现为细胞表面微绒毛显著减少，线粒体及内质网空泡变性，细胞死亡明显。提示：肝癌细胞内表达抗肝癌scFV对肝癌细胞有明显杀伤作用，为肝癌基因治疗提供一种新方法。

抗肝癌人源化单链抗体融合肿瘤坏死因子α的导向作用

目的：获得有临床应用潜力的人源化抗肝癌基因工程双功能抗体。方法：将鼠源性抗肝癌单克隆抗体HAb25的人源化单链抗体（hscFv25）基因与人TNF(基因偶连构建抗肝癌双功能抗体（hscFv25-TNFα），亚克隆入原核GST融合表达载体pGEX 4T-1中，在大肠杆菌中进行表达并纯化目的蛋白。对肝癌SMMC-7721细胞涂片进行间接免疫荧光染色测定纯化后的基因重组双功能抗体蛋白活性。MTT实验测定hscFv25-TNFα对靶细胞SMMC-7721杀伤活性。荷肝癌(SMMC-7721)裸鼠体内的初步抑瘤实验检测hscFv25-TNFα的导向治疗效果。结果：hscFv25-TNFα具有与亲本抗体HAb25相同的抗原结合特异性。1h预处理的MTT实验显示，hscFv25-TNFα对靶细胞SMMC-7721具有明确的杀伤作用，其IC50值为7.1mg/L，且该杀伤作用可被亲本抗体HAb25所封闭，表明hscFv25-TNFα对靶细胞的杀伤作用是抗体hscFv25介导的选择性杀伤作用。hscFv25-TNFα对荷肝癌裸鼠体内直径3.0mm左右的肿瘤具有明确的导向杀伤作用,有效率达到3/3，1/3完全缓解，强于TNFα对照组，该组有效者只有2/3，同时无完全缓解。结论：hscFv25-TNFα是具有一定临床应用潜力的抗肝癌双功能抗体。

阿霉素诱导人肝癌细胞凋亡模型的建立

目的建立肝癌细胞凋亡模型，为进一步研究细胞凋亡分子机理打下基础。方法用抗癌药阿霉素诱导培养的人肝癌细胞株ＨＣＣ－９２０４肝癌细胞发生凋亡，用四唑盐比色试验（ＭＴＴ法）检测。结果研究发现，０．５μｇ／ｍｌ放线菌素Ｄ可明显抑制２０μｍｏｌ／Ｌ阿霉素对肝癌细胞凋亡的诱导作用。用２０μｍｏｌ／Ｌ阿霉素作用肝癌细胞３小时，换培养液继续培养１２小时后，肝癌细胞ＤＮＡ结构断裂，电泳呈梯状带型。肝癌细胞形态学改变出现膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征。用流式细胞仪测定，出现典型的凋亡峰，凋亡细胞占７２．１％。用２０μｍｏｌ／Ｌ阿霉素诱导肝癌细胞凋亡后，细胞周期Ｇ１期、Ｓ期和Ｇ２期分别为７５．９％，２４．１％和０％，肝癌细胞活细胞率为３５．５％。结论用抗癌药阿霉素成功地诱导人肝癌细胞株ＨＣＣ－９２０４肝癌细胞发生凋亡，该细胞凋亡模型的建立，将有助于进一步探讨肝癌细胞凋亡的分子机制。

肝硬变内HBVDNA及其五种抗原的表达及意义

取２２５例人肝硬变活检组织石蜡切片，检测了ＨＢＶＤＮＡ及其５种抗原。分别用免疫组化ＡＢＣ法检测ＨＢｘＡｇ、ｐｒｅ－Ｓ＿１和ｐｒｅ－Ｓ＿２抗原；用ＰＡＰ法检测ＨＢｓＡｇ和ＨＢｃＡｇ；用原位杂交方法检测ＨＢＶＤＮＡ；用免疫组化、原位杂交双标记方法检测ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｓＡｇ、ＨＢｘＡｇ或ＨＢｃＡｇ。结果显示，阳性检出率ＨＢｓＡｇ为７０．０％（１２８／１８３例），ｐｒｅ－Ｓ＿１抗原为６４．４％（８５／１３２例）、ｐｒｅ－Ｓ＿２抗原为６１．４％（８１／１３２例），ＨＢｘＡｇ为７５．３％（１１３／１５０例），ＨＢｃＡｇ为２２．４％（３９／１７４例），ＨＢＶＤＮＡ为６２．４％（５８／９３例）。双标阳性检出率ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｓＡｇ为３７．３％（１９／５１例），ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｘ－Ａｇ为８６．３％（４４／５１例），ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｃＡｇ为３９．２％（２０／５１例）。ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢＶ５种抗原阳性病例中８０％以上均伴有肝细胞不典型增生。这一结果表明，在我国肝硬变的发生发展与ＨＢＶ慢性感染有密切的关系。

大鼠视网膜神经节细胞诱向因子及其mRNA的生后发育变化

本文用视网膜神经节细胞诱向因子(RGNTF)单抗对生后不同龄大鼠视系统的RGNTF进行免疫组化定位、定量。结果发现:在0—1天龄组,大鼠上丘浅,深部的神经细胞及视膜神经节细胞(RGC)呈强阳性,其RGNTF含量分别为88％,100％和100％;在5—6天龄组,其RGNTF含量明显减少,至50％,30％和80％等;随年龄增第RGNTF含量渐减至0％(2年)。用^(32)P标合成RGNTF N-末端7个氨基酸序列的特异性DNA探针作原位杂交。其结果显示:只有0—1天龄组,大鼠上丘浅、深部神经细胞内有强杂交反应,表示大量RGNTF mRNA的存在;而RGC则无杂交反应。结论:初生大鼠的RGC是依赖上丘神经细胞供应RGNTF;其自然死亡可能与上丘的RGNTF大量减产,减少供应有关。

人肝细胞肝癌与正常肝组织内C／EBP的分布及其mRNA丰度分析

以兔抗增强子结合蛋白（ＣＣＡＡＴ／ＥｎｈａｎｃｅｒＢｉｎｄｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎ，Ｃ／ＥＢＰ）多肽抗体，用ＡＢＣ法对１８例人正常肝组织、５例新生儿肝组织及７９例肝细胞肝癌（其中４０例带有癌旁肝组织）中Ｃ／ＥＢＰ进行免疫组化定位，同时运用Ｃ／ＥＢＰｃＤＮＡ探针对３例人正常肝组织、１例新生儿肝组织、１０例肝细胞肝癌（其中８例含配对的癌旁肝组织）进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析。免疫组化结果显示，Ｃ／ＥＢＰ弥漫分布于分化成熟的肝细胞浆及肝细胞核中（胞浆含量更丰富），在肝癌分化差（或分化低）的组织细胞中含量低或检测不到，并和癌的分级存在一定相关性。所有增生的胆管上皮细胞也呈阳性。Ｃ／ＥＢＰｍＲＮＡ丰度（表达量）和免疫组化结果基本相符。以上结果进一步证实Ｃ／ＥＢＰ在维持肝细胞分化状态中担负重要作用。

γ－干扰素样物质在肾上腺皮质腺肿瘤中的表达

为了检测γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）是否在人肾上腺组织和肾上腺皮质腺肿瘤中有表达，我们对包括瘤旁肾上腺组织１４例；肾上腺皮质腺瘤１７例；皮质腺癌７例的组织标本，用抗大鼠ＩＦＮ－γ单克隆抗体ＤＢ－１做为一抗，采用ＡＢＣ法做免疫组化染色。结果：ＩＦＮ－γ样免疫反应阳性物可在１００％（７／７例）肾上腺皮质腺癌，４７％（８／１７例）皮质腺瘤细胞内和３０％腺癌（２／７例）和腺瘤（５／１７例）组织内毛细血管内皮细胞中检出，瘤旁肾上腺组织内未见阳性反应细胞。结论：（１）ＩＦＮ－γ的存在与肾上腺皮质肿瘤的分化有关，分化越低，ＩＦＮ－γ的阳性率越高。（２）肾上腺皮质肿瘤内的毛细血管内皮细胞可能具有ＩＦＮ－γ受体或能产生ＩＦＮ－γ。另外，在肿瘤组织内还发现一些树突状ＩＦＮ－γ阳性细胞，其存在意义尚待探讨。