西藏林芝地区陇东苜蓿不同生育期养分动态研究

研究了陇东紫花苜蓿不同生育期营养物质的变化情况,测定结果表明,紫花苜蓿在返青初期干物质的含水量、粗脂肪(EE)和粗灰分含量最高,分别为89.45%、6.42%和15.47%;枯黄期粗纤维(CF)含量最高,达44.92%;返青一个月的粗蛋白(CP)含量最高,达25.33%。随着生育时间的推移,水分,粗灰分(ash)和粗蛋白(CP),粗脂肪(EE)含量呈逐渐下降趋势,而粗纤维(CF)含量呈升高趋势。紫花苜蓿的营养价值和饲用品质随着机体成熟度的增加而显著降低,返青初期的品质优良,分枝期的品质良好,结实期的品质差,枯黄期对家畜基本无饲用价值。

Cu^(2+)胁迫对西藏林芝市野生毛果胡卢巴种子萌发特性的影响

探索Cu^(2+)胁迫对西藏林芝市巴宜区毛果胡卢巴(Trigonella pubescens)种子萌发的影响,为西藏矿区周边Cu^(2+)污染土壤植被修复提供依据。以毛果胡卢巴种子为材料,采用纸上发芽法,对其进行不同浓度的Cu^(2+)溶液(0,40,80,160,300,400,500 mg·L^(-1))处理,研究不同浓度Cu^(2+)溶液对毛果胡卢巴种子发芽率、发芽指数、活力指数以及根长和芽长的影响。结果表明,低浓度的Cu^(2+)处理有利于种子萌发,但不利于其种子活力指数和根芽的生长;毛果胡卢巴种子的发芽率和发芽指数均以40 mg·L^(-1)1Cu^(2+)溶液浓度为界呈先升后降的变化趋势;活力指数、幼苗的根长和芽长随Cu^(2+)溶液浓度的升高呈持续下降的趋势。毛果葫芦巴对Cu^(2+)的耐受性较差,在修复Cu^(2+)污染的土壤植被中不具有应用潜力。

牦牛源产气荚膜梭菌β2基因的原核表达及生物信息学分析

为了原核表达一株牦牛源产气荚膜梭菌Qinghai-1的β2基因及了解其编码蛋白的生物信息。首先利用PCR扩增技术、基因克隆技术构建原核表达质粒并通过高通量测序、双酶切技术、SDS-PAGE检测和Western blotting方法对表达情况进行鉴定,其次利用生物信息学分析的方法对β2毒素蛋白的一级结构、二级结构、蛋白特殊区域、三级结构及B细胞线性抗原表位等多方面进行预测分析。原核表达结果显示:牦牛源产气荚膜梭菌β2基因在温度为37℃,IPTG浓度为1.5 mmoL/L,培养时间为8 h~10 h的条件下可得到大小约为28KD的可溶于细胞质的不含信号肽的目的蛋白。生物信息学分析结果显示:牦牛源产气荚膜梭菌β2基因大小为798 bp,共编码265个氨基酸,与印度的产气荚膜梭(FR687302.1)的β2毒素基因相似性最高;其分子式为C_(1392)H_(2136)N_(356)O_(418)S_(11),分子量为30.9 ku,pI=6.04,负电荷(Asp+Glu)残基总数36个,正电荷(Arg+Lys)残基总数35个,脂肪指数:74.64,不稳定指数:28.52,亲水性总平均值(GRAVY):-0.478;拥有1个跨膜螺旋和35个潜在磷酸化位点;为含跨膜结构的、含信号肽的、含磷酸化位点的、含多个B细胞线性抗原表位的、稳定的亲水性蛋白。研究结果旨在准确预测牦牛源产气荚膜梭菌β2毒素抗原表位,为进一步研究牦牛源产气荚膜梭菌β2毒素致病机理提供重要理论依据。

藏鸡新城疫病毒的分离与初步鉴定

新城疫（Newcastle disease）是由新城疫病毒（New castle disease virus,NDV）引起的侵害禽类的一种急性、高度接触性传染病,被国际兽疫局列为A类疫病[1]。该病曾经对我国和世界养鸡业造成巨大危害[2]。强制免疫对我国新城疫的控制起到了决定性作用,但伴随养禽业规模的扩大,

新城疫病毒西藏分离株的生物学特性鉴定及遗传进化分析

从西藏病死藏鸡中分离到具有血凝活性的病毒、经血凝抑制试验、电镜观察、PCR扩增和测序鉴定为新城疫病病毒(NDV),通过动物致病性试验证明该病毒对鸡具有致病性;分离毒株毒力测定结果显示,MDT为120h,EID50为10-8.44、IVPI为0.5、ICPI为0.6,均符合NDV弱毒株特征。血凝解脱及血凝素热稳定性试验显示:各分离株的血凝解脱时间短,血凝素热稳定性较差,符合NDV弱毒株的特征。F基因的序列测定遗传进化分析表明,西藏分离毒株之间的核苷酸序列具有99%的同源性,与疫苗株LaSota的同源性为90%;与国内标准强毒株F48E8同源性为81%。推导其氨基酸序列分析表明,各分离株的F蛋白的裂解位点氨基酸112 G-K-Q-G-R-L117,具有NDV弱毒株特征,与毒力测定结果相符。本研究首次报道了NDV西藏分离毒株遗传进化情况和生物学特性情况,为进一步研究高海拔、缺氧环境下NDV生物学特性变化研究奠定了基础。

西藏林芝地区1例牛伪狂犬病的诊断

主要对西藏林芝地区某牛场不明原因牛猝死进行研究。通过病死牛病料组织触片镜检和分离培养皆未发现细菌;乳胶凝集试验检查血清为伪狂犬病病毒(PRV)抗体阳性;以脑组织制备DNA模板进行PCR,扩增到特异性的PRV DNA片段;对健康成年兔接种病牛脑、肺等病料,表现典型的伪狂犬病症状。综合流行病学、细菌学、血清学、分子生物学和动物试验结果,确诊为牛伪狂犬病。

1株青海牦牛腹泻产气荚膜梭菌基因分型及cpa基因生物信息学分析

为了解1株从青海玉树地区牦牛腹泻中分离的牦牛源产气荚膜梭菌Qinghai-1的分子型和cpa基因编码蛋白的生物信息,首先利用16S rDNA扩增、毒素基因检测、MLST分型、基因克隆等分子生物学方法对菌株毒素基因和管家基因进行分析,随后通过对cpa基因双向高通量测序、生物软件分析等生物信息学方法对其编码的α毒素蛋白的一级结构、二级结构、三级结构、蛋白特殊区域、B细胞线性抗原表位及蛋白互作关系进行分析。结果显示,Qinghai-1菌株分型毒素仅含有α毒素,各管家基因的等位基因序号依次为colA:9、groEL:96、sodA:91、plc:44、gyrB:67、sigK:55、pgk:8、nadA:16;cpa基因全长1197 bp,共编码398个氨基酸,与丹麦鸡源(EU839784.1)分离株plc基因差异性较小;其编码的α毒素蛋白分子式为C2036H3061N533O631S12,相对分子质量为45.5 ku,pI=5.68,脂肪指数:61.36,不稳定指数:19.88,亲水性总平均值-0.756,拥有1个跨膜螺旋和43个潜在磷酸化位点,B细胞线性抗原表位存在的区域为:25~36,81~121,194~202,312~324,356~364,389~394;其主要作用蛋白磷脂酶C(plc)与其他10个蛋白共形成23条相互作用连线。综上,Qinghai-1菌株为A型产气荚膜梭菌,是1株新的MLST型菌株,为ST-414型;其α毒素蛋白为含跨膜结构、含信号肽、含磷酸化位点、含多个B细胞线性抗原表位和能与多个蛋白相互作用的、稳定的亲水性蛋白。研究结果可为进一步了解牦牛源产气荚膜梭菌分子型以及通过深入的细胞毒性作用研究为后续进一步研究α毒素致病机理提供重要理论依据。

牦牛源产气荚膜梭菌Qinghai-1菌株全基因组测序及生物学特性分析

利用1株由本实验室分离保存的牦牛源产气荚膜梭菌Qinghai-1菌株,首先通过生化试验、药敏试验、PCR技术对该菌株生物学特性进行了研究,随后通过全基因组测序利用生物基因数据库对基因组的基因功能进行注释和耐药基因分析。生物学特性显示,该菌株为1株牦牛源A型产气荚膜梭菌,菌株在硫化氢、乳糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、赖氨酸、鸟氨酸、卵磷脂酶、明胶、硝酸盐、甘露糖、酪蛋白共12种生化鉴定管中成阳性反应;对头孢噻肟、氨苄西林、青霉素、四环素敏感,对庆大霉素、复方新诺明、多黏菌素B、链霉素、杆菌肽耐药。全基因组分析显示,该菌株基因组长度为3042374 bp,GC含量为28.58%,共含2906个基因,2721个CDS区,94段tRNA,10段rRNA,60段miscRNA,1段tmRNA,968段重复序列和1个基因岛,不含CRISPR序列。在GO、KEGG、COG数据库中分别有1643,849,1196个基因功能注释,在VFDB数据库中有237个与毒力因子相关的基因,在CARD数据库中仅有Clostridium perfringens mprF一个抗性基因注释。提交基因组序列至NCBI网站,获得登录号:CP092481。本研究完成了对Qinghai-1菌株的耐药特性研究和基因组信息分析,丰富了产气荚膜梭菌基因库宿主的类型,为进一步了解牦牛源产气荚膜梭菌遗传进化信息、基因功能、耐药特性提供了理论参考。

青海玉树牦牛源产气荚膜梭菌的分离鉴定及耐药性研究

无菌采集青海玉树地区牦牛源腹泻粪样,利用常规方法和分子生物学技术对样品中的产气荚膜梭菌进行分离鉴定,通过动物试验、药敏试验、耐药基因检测等方法对分离到的菌株进行了分析。结果显示,从148份样品中成功分离鉴定出牦牛源产气荚膜梭菌14株,其中10株为A型,4株为C型。利用16S rRNA基因序列对部分分离菌系统遗传进化树分析,结果发现,YS-1(MW980090)与印度豹源(MN326666.1)产气荚膜梭菌具有较近的亲缘性,YS-4(MW980093)和YS-13(MW980102)为单独的一枝,YS-6(MW980095)与北京人源(KP944154.1)产气荚膜梭菌具有相似性。A型菌YS-1(MW980090)和C型菌株YS-6(MW980095)动物试验结果显示,C型产气荚膜梭菌外毒素具有强致死性,A、C型菌具有强致死性。药敏试验结果表明,分离菌对复方新诺明、多黏菌素、青霉素、多西环素、四环素耐药,对克林霉素、氯霉素、万古霉素、氧氟沙星敏感。本研究为预防和治疗因产气荚膜梭菌导致牦牛腹泻等疾病提供用药指导。