MicroRNA-219在脂毒性环境下对肝细胞脂质代谢、细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究在脂毒性环境下microRNA-219(miR-219)对肝细胞脂质代谢、细胞增殖及凋亡的影响。方法分别以低脂饲料(low fatty diet,LFD)与高脂饲料(high fatty diet,HFD)喂养小鼠,构建对照组及脂肪肝小鼠模型,HE、油红染色观察小鼠造模情况。使用两步胶原酶灌注法从C57BL/6J小鼠提取原代肝细胞(primary hepatocytes,PHC),200μmol棕榈酸(palmitic acid,PA)处理24 h以模拟脂毒性环境,检测AST和ALT水平判断肝细胞脂肪变性情况。Q-PCR检测脂肪肝小鼠肝组织与PHC中miR-219表达水平,过表达miR-219后脂质代谢因子[硬脂酰辅酶A去饱和酶1(stearoyl-CoA desaturase 1,SCD1)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)]、增殖因子[增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)]、凋亡相关因子[B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase3)]的mRNA表达;油红染色观察细胞脂质沉积;EDU检测细胞增殖情况。结果 非酒精性脂肪性肝病小鼠模型建模成功。相比对照组,在高脂小鼠和PA处理的PHC中miR-219的表达水平均明显下降,HFD组为0.455±0.028,LFD组为1.000±0.125(P<0.05);PA处理组为0.676±0.064,对照组为1.000±0.190(P<0.05)。在PA刺激的PHC中,相比对照组,过表达miR-219组PHC中脂质代谢因子SCD1、FAS的mRNA表达明显下降[SCD1(mi-miR219+PA:0.539±0.048,miR-NC+PA:1.000±0.033,P<0.01),FAS(mi-miR219+PA:0.722±0.036,miR-NC+PA:1.000±0.051,P<0.05)],油红染色也提示脂质沉积明显减轻;过表达miR-219后,PHC增殖因子(PCNA、Cyclin D1)的表达明显上升[PCNA (mi-miR219+PA:1.652±0.185,miR-NC+PA:1.000±0.203,P<0.05)和CyclinD1 (mimiR219+PA:1.791±0.154,miR-NC+PA:1.000±0.135,P<0.05)],EDU检测也提示细胞增殖明显增加。另外,促凋亡因子Casepase3的表达下降(mi-miR219+PA:0.574±0.054,miR-NC+PA:1.000±0.35,P<0.05),抑凋亡因子Bcl-2的表达上升(mi-miR291:1.535±0.109,miR-NC:1.000±0.208,P<0.05)。结论 在脂毒性环境下,miR-219可明显缓解肝细胞脂质沉积,提高肝细胞活性,促进增殖而抑制细胞凋亡,缓解NAFLD。