西藏牦牛多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏分析

为了对西藏牦牛多杀性巴氏杆菌进行分离鉴定和药敏分析,为多杀性巴氏杆菌病的诊断、治疗以及防控提供一定理论依据,本试验对病死牦牛的内脏组织进行了细菌分离,再通过涂片镜检、生化鉴定、荧光定量PCR法对分离细菌株进行了鉴定,并利用17种抗菌药物对该细菌株进行了药敏分析。结果显示:该细菌株镜检为革兰氏阴性短杆菌,在血清琼脂平皿上形成了表面光滑、湿润、边缘较整齐的半透明灰白色菌落,在麦康凯琼脂平皿上未见生长;符合多杀性巴氏杆菌生化鉴定标准,且在细菌株DNA基因组中能扩增出多杀性巴氏杆菌鉴定基因,表明该致病菌为多杀性巴氏杆菌。13种抗菌药物对该细菌株有显著抑制作用,但其抑菌机理还需进一步研究。

口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗安全性和抗体消长规律

为研究口蹄疫(FMD)O型、A型二价灭活疫苗在山羊、牦牛体内的免疫安全性和抗体消长规律,试验选用疫苗接种、抗体检测等方法,对疫苗的免疫安全性和免疫抗体水平情况进行了测试和评估。结果显示,接种疫苗的试验动物无免疫副作用,免疫14 d内均未出现临床症状;但随着时间推移,试验动物口蹄疫O型、A型抗体合格率呈逐渐下降趋势,尤其是免疫150 d后抗体合格率下降较快。表明FMD疫苗具有良好的免疫安全性,在动物体内可产生高水平O型、A型抗体且维持较长时间。

ELISA竞争法在口蹄疫抗体监测中的应用

为进一步评价酶联免疫吸附试验(ELISA)竞争法在口蹄疫抗体监测中的稳定性,本试验选取30份免疫山羊血清,利用ELISA竞争法抗体检测试剂盒进行口蹄疫病毒O型抗体检测。结果显示,30份免疫羊血清均为FMDV-O型抗体阳性,平均吸光值为0.20~0.35,平均阻断率为70%~80%,且第一次、第二次的阻断率差异性不大,进一步表明FMDV-O型ELISA竞争法具有良好的稳定性和重复性。

阻断ELISA在小反刍兽疫抗体监测的应用

旨在评价阻断ELISA在小反刍兽疫抗体监测的稳定性。本试验选取20份免疫羊血清,利用阻断ELISA抗体检测试剂盒进行抗体检测。结果显示20份免疫羊血清检测均为小反刍兽疫抗体阳性,其中平均吸光值在0.10~0.19,平均阻断率维持在80%~90%。第一次检测与第二次检测的阻断率差异性较小,进一步表明阻断ELISA检测方法在小反刍兽疫抗体监测中较稳定。

荧光偏振测定法在布鲁氏菌病抗体检测中的应用

目的:研究荧光偏振测定法(FPA)对牦牛血清中布鲁氏菌病抗体检测的适用性。方法:利用FPA测定法对129份牦牛血清进行布鲁氏菌病抗体检测,并与试管凝集试验法(SAT)数据进行比对,从而分析评价FPA测定法的检测性能。结果:FPA试验筛选出41份抗体阴性样品和88份抗体阳性样品;数据比对显示FPA试验敏感性(100.00%)、特异性(80.39%)、符合率(92.25%)和约登指数(80.39%)较高,且阴性似然比值(0.00)和阴性预测值(100.00%)较好。结论:FPA测定法适用于牦牛血清的布鲁氏菌病抗体检测,且诊断准确性较高。

高原环境下羊败血性链球菌灭活疫苗生产工艺探索

为了优化羊败血性链球菌灭活疫苗的生产工艺条件,本试验对羊败血性链球菌C55001株、C55002株种子液的培养基种类、培养时间及发酵时间进行优化,从而确定羊败血性链球菌C55001、C55002株灭活疫苗的最佳生产工艺条件。再采用最佳生产工艺条件制备1×10^(8) CFU/mL、2×10^(8) CFU/mL、3×10^(8) CFU/mL及原液等4个浓度的羊败血性链球菌病灭活疫苗,进行安全性试验和效力试验。结果显示羊败血性链球菌C55001株、C55002株最适发酵培养条件为:种子液培养8 h,接种至链球菌干粉培养基,发酵培养7.25 h~8 h;安全性试验结果显示免疫接种疫苗的试验羊全部健活,未出现临床症状;效力试验结果显示免疫1×10^(8) CFU/mL、2×10^(8) CFU/mL、3×10^(8) CFU/mL及原液浓度疫苗的试验组,攻毒后全部健活,未见免疫副作用和临床症状。结果表明在最佳生产工艺条件下,羊败血性链球菌C55001、C55002株灭活疫苗具良好的免疫安全性和免疫原性,可产生极好的临床免疫保护效果。

那曲尼玛县牦牛布氏杆菌病血清抗体检测初报

为了解布氏杆菌病在西藏那曲市尼玛县牦牛群中血清抗体分布情况,于2019年从西藏那曲市尼玛县采集牦牛血清100份,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法进行血清抗体检测。结果表明:100份血清全部呈阴性。说明目前该地区牦牛群中无布氏杆菌病分布。

样品不同运输时长对小反刍兽疫病毒抗体检测结果的影响

目的:探究泡沫箱的保温效果及运输时长对血清检测结果的影响。方法:选取10份免疫羊血清样品,放置于模拟4℃、25℃和37℃等外界环境温度内,在不同时段测定泡沫箱内温度,并利用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定羊血清样品的小反刍兽疫病毒抗体。结果显示外界温度为4℃时,泡沫箱内温度会维持在6℃以下;外界温度为25℃时,在24 h内泡沫箱内温度会维持10℃以下;外界温度为37℃时,在8 h内泡沫箱内温度会维持15℃以下。随着运输时长的增加,4℃试验组的平均阻断率基本维持不变;在运输时长超过48 h时,25℃试验组的平均阻断率会降低2%~3%;在运输时长超过24 h时,37℃试验组的平均阻断率会降低2%~5%。结论:外界环境温度与泡沫箱内温度密切相关,而且血清样品的运输时长不宜超过12 h,才能保证检测结果的准确性。

小反刍兽疫疫苗病毒含量荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

为了建立快速、敏感、特异的小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR)活疫苗中病毒含量的检测方法,本研究根据GenBank数据库中登录的小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)基因序列设计合成特异性引物,采用RT-PCR扩增PPRV基因片段,并克隆至pUC57载体上,构建标准品质粒p UC57-N-PPRV,再采用SYBR GreenⅠ染料法进行实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测,绘制标准曲线并进行特异性、稳定性和重复性试验,同时应用于检测4批不同厂家生产的PPR活疫苗病毒含量。结果显示,用该方法检测病毒含量为2.61×10^(1)~2.61×10^(9)copies/μL的标准品,各稀释度质粒拷贝数与C_(t)值之间呈良好的线性关系,且相关系数高(R^(2)=0.999),说明引物特异性强。4批不同厂家生产的PPR活疫苗的病毒含量水平差异显著(P<0.05)。结果表明,该方法具有耗时短、灵敏度高、特异性强且稳定等优点,可用于检测PPR活疫苗中病毒含量水平。