宁夏枸杞甜菜碱提取物高效液相色谱指纹图谱研究

建立宁夏枸杞甜菜碱提取物高效液相色谱指纹图谱,为鉴别不同来源的宁夏枸杞提供依据。以10批宁夏不同产地的宁夏枸杞主栽品种"宁杞Ⅰ号"样品建立枸杞甜菜碱提取物指纹图谱共有模式,采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"软件进行数据处理,对15批不同来源的枸杞样品进行了分析。结果表明:8个特征峰构成了宁夏枸杞甜菜碱提取物的色谱指纹图谱,不同产地、不同品种的枸杞样品甜菜碱提取物指纹图谱存在差异;建立的枸杞甜菜碱提取物高效液相色谱(HPLC)指纹图谱对不同产地、不同品种枸杞的鉴别有参考价值。

宁夏枸杞高效液相色谱指纹图谱研究

目的:建立宁夏枸杞黄酮类化合物和甜菜碱提取物的高效液相色谱指纹图谱,为鉴别不同来源的宁夏枸杞提供依据。方法:以10批宁夏不同产地的枸杞主栽品种"宁杞Ⅰ号"样品建立枸杞黄酮类化合物和甜菜碱提取物指纹图谱共有模式,采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"软件进行数据处理,对15批不同来源的枸杞样品进行分析。结果:本研究建立的方法重现性较好;不同产地、不同品种的枸杞样品黄酮类化合物和甜菜碱提取物指纹图谱存在差异。结论:所建立的枸杞黄酮类化合物、甜菜碱提取物HPLC指纹图谱,可用于鉴别不同产地、不同品种的枸杞。

硒砂瓜连作地微生物群落变化及一株优势芽孢杆菌的分离鉴定

为揭示由于长期连作而造成硒砂瓜减产的主要因素,以不同连作年限的宁夏硒砂瓜种植区土壤微生物作为研究对象,分析连作1 a、连作3 a、连作5 a、连作7 a和连作10 a的硒砂瓜种植区土壤微生物群落的变化规律。在此基础上对一株优势芽孢杆菌NB1菌株进行分离纯化鉴定。结果表明,随着连作年限的增加,硒砂瓜土壤微生物总量呈明显的下降趋势,且微生物菌群结构也发生了变化,总体表现为真菌增加、细菌和放线菌减少的发展态势。通过芽孢细菌形态特征、生理生化反应结合16S rDNA基因序列分析,初步鉴定NB1菌株为枯草芽孢杆菌。研究结果不仅为改善土壤微生物群落结构提供了理论依据,也为最大限度地发挥有益微生物作用、解决硒砂瓜连作障碍提供了科学依据。

枸杞品质及其与土壤肥力关系的研究

目的通过测定宁夏8个不同产区枸杞头茬、盛果期和秋果中总糖、多糖、甜菜碱、氨基酸、总黄酮、类胡萝卜素的量及百粒质量,并分析总糖碱比,研究枸杞中这些指标间以及它们与土壤肥力因子间的相互关系。方法采用HPLC和分光光度等实验方法以及聚类分析、相关性分析和方差分析等生物统计方法。结果枸杞中各指标被归为以总糖、甜菜碱和类胡萝卜素为代表的3类,各指标受各种土壤肥力因子的作用不同。结论总糖、甜菜碱和类胡萝卜素这3种成分及糖碱比值能较科学地评价枸杞的品质;施肥时应综合考虑各种肥力因子对枸杞成分的协同作用,不宜片面考虑其单一的相关性。该研究为枸杞品质评价及合理施肥提供了依据。

枸杞糖碱成分及其与土壤肥力间的关系研究

通过测定宁夏8个不同产区枸杞头茬果和盛果期果实中总糖、甜菜碱含量,研究枸杞中这两种成分的含量和比值变化以及它们与土壤肥力因子间的相互关系。结果表明:枸杞头茬果中总糖、甜菜碱含量均大于盛果期,而糖碱比在两茬间无显著性差异,但多数处于中糖中碱的优质枸杞范围内;土壤中的速效磷和速效钾是影响枸杞果实糖碱比的关键肥力因子。

绵羊肺炎支原体与猪肺炎支原体交叉抗原研究

为了研究绵羊肺炎支原体标准株Y98与猪肺炎支原体标准株232全菌蛋白免疫原性的异同,试验采用SDS-PAGE和免疫印迹分析技术对其进行了研究,结果表明:绵羊肺炎支原体标准株Y98同猪肺炎支原体标准株232免疫印迹结果基本一致,在70,50,40,25 ku蛋白带处存在共同抗原。

RIP3对BCG感染后小鼠巨噬细胞凋亡的调控作用研究

目的:探讨受体相互作用蛋白3(RIP3)在卡介苗(BCG)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡过程中的调控作用。方法:构建RIP3腺病毒干扰载体并感染巨噬细胞,并用BCG进行感染。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力;利用流式细胞术对细胞凋亡率、线粒体膜电位及活性氧含量进行检测;通过Western blot检测RIP3及凋亡相关蛋白的表达水平。结果:BCG感染RAW264.7细胞后,细胞活力下降且RIP3蛋白表达量显著上调(P<0.01)。而与BCG单独感染组相比,BCG感染结合RIP3干扰处理组细胞凋亡率及活性氧含量降低,线粒体膜电位升高,同时促凋亡蛋白Bax与cleaved caspase-3的蛋白水平显著升高,抑凋亡蛋白Bcl-2的表达量显著降低(P<0.01)。结论:在BCG感染小鼠巨噬细胞RAW264.7的过程中,RIP3参与了BCG诱导的RAW264.7细胞的凋亡,且该过程可能是通过线粒体途径实现的。

梅花鹿结核分枝杆菌的分离与鉴定

目的探讨梅花鹿结核病的诊断方法,以及进行结核病的病原学的调查研究。方法利用病理学诊断方法、微生物分离方法以及分子生物学技术对患病梅花鹿进行疾病诊断。结果确定所分离的分枝杆菌是结核分枝杆菌,PCR法扩增出结核分枝杆菌特异的225bp片段,证实梅花鹿感染了结核分枝杆菌。结论结核病的诊断可以通过微生物分离诊断方法进行,分子生物学技术在结核病的诊断中的应用逐渐成为必不可少的诊断方法,它将有利于病原分离困难的小块病变组织的诊断。

结核分枝杆菌Erp蛋白PGLTS的4基序突变体的构建

以结核分枝杆菌H37Ra DNA为模板,通过PCR扩增,获得靶基因erp片段。采用重叠延伸PCR的方法得到erp基因PGLTS的4基序的突变体,依次删除突变体的C-末端、N-末端和C/N-端,构建重组质粒p ET28a-C4、p ET28a-N4、p ET28a-CN4,转化BL21(DE3)p Lys S。对重组菌株IPTG诱导后的表达产物进行Tricine SDS-PAGE,得到大小分别约为11.2、15.4、4.8 ku的目的蛋白。Western blotting分析结果表明,目的蛋白表达特异。

线粒体自噬与癌症关系的研究进展

线粒体自噬是选择性自噬的一种,线粒体通过自噬途径被选择性清除。线粒体自噬对于细胞内环境稳定来说十分关键,细胞利用线粒体自噬机制消除功能障碍的线粒体或减少线粒体数量等来适应应激,维持胞内内环境的稳定。因此,对于线粒体自噬的分子机制以及生理作用的研究具有重要的生物学意义。细胞可通过多种分子机制介导线粒体自噬,如PINK1/Parkin、Nix和FUNDC1途径。线粒体自噬调控机制的失调或障碍与人类多种疾病的发病密切相关,有研究发现在多种癌症中存在着不同水平的线粒体自噬,包括直肠癌、肺癌、乳腺癌等,从而也反映了线粒体自噬与癌症的密切关系。论文介绍了线粒体自噬作用和过程的最新研究进展,并着重总结自噬与癌症的关系。

宿主细胞感染支原体后的“宿命”

支原体(Mycoplasma)是介于细菌与病毒之间的一类原核微生物,无细胞壁,依靠细胞膜维持其个体形态和多种生理功能。临床上,支原体可引起动物和人类多种疾病,严重影响畜牧业的发展,威胁人类健康,但是目前针对支原体疾病的抗生素治疗效果不佳、疫苗有效性较差,且缺乏较为敏感的诊断工具,加之支原体个体微小、生长缓慢,暂缺乏有效的研究手段,其感染宿主细胞的分子机制仍不清楚,因此,至今支原体引起的疾病很难预防和控制。随着人们对支原体感染宿主细胞机制愈发关注,并取得了一些进展,本文就支原体感染后诱导宿主细胞的凋亡、自噬、癌变等方面进行概述,以期对支原体致病机制的研究提供帮助。

谷氨酰胺对BCG诱导小鼠传代巨噬细胞凋亡的调控作用

旨在探讨谷氨酰胺在牛分枝杆菌卡介苗(Bacille Calmette-Guerin vaccine,BCG)感染巨噬细胞过程中对凋亡的调控作用。本文采用小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,首先建立了BCG感染致细胞凋亡的细胞模型,采用Western blotting检测凋亡关键因子的表达变化,确定最佳感染条件;进而利用无谷氨酰胺培养基构建谷氨酰胺剥夺模型并结合BCG感染,采用ELISA、免疫印迹、免疫荧光和流式细胞术等技术检测了细胞内谷氨酰胺关键代谢指标的差异变化。通过上述研究,阐明谷氨酰胺对BCG诱导的巨噬细胞凋亡的调控作用,并初步探讨其机制。结果表明,BCG感染显著上调了小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞中Caspase 3和PARP的蛋白表达(P<0.001),最佳感染时间为12 h,最佳感染复数为10 MOI,同时BCG感染促进了RAW264.7细胞内谷氨酰胺的分解代谢。剥夺谷氨酰胺后能极显著降低BCG感染后巨噬细胞中谷氨酸(P<0.001)和谷胱甘肽(P<0.01)的含量,极显著增加了细胞内ROS的含量(P<0.001)。同时,抑制谷氨酰胺代谢促进了RAW264.7细胞内促凋亡蛋白Caspase 3、PARP、Cytc和Bax的表达(P<0.001),极显著下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达(P<0.001)。综上表明,在BCG感染RAW264.7细胞的过程中,抑制谷氨酰胺代谢可以降低细胞内谷胱甘肽的含量,造成ROS的累积,进而通过内源性途径促进细胞凋亡。

评价ELISA方法在奶牛结核病检测中的应用

本实验通过PPD变态反应对ELISA检测结果进行评价,为ELISA方法在牛结核病检测中使用的可行性提供一定的数据支持。

黑果枸杞多倍体诱导及鉴定

为了建立黑果枸杞多倍体诱导方法及快速、准确和高效的多倍体鉴定技术,以黑果枸杞二倍体种子经浸泡后的吸胀种子与萌动种子为材料,用不同浓度的秋水仙素进行不同时间的诱导处理,通过流式细胞仪测定细胞核DNA含量的方法对诱导后的植株进行倍性鉴定,并与传统的染色体计数、气孔密度和大小测定、叶绿素相对含量测定等不同方法进行比较。结果表明,0.1%的秋水仙素(内含2%的DMSO)可有效地诱导黑果枸杞萌动种子的染色体加倍,其中24 h处理的效果最好,诱导率为33.3%。经流式细胞仪细胞核DNA含量测定以及压片染色体计数等方法鉴定,获得的多倍体有四倍体、八倍体。在形态上,多倍体植株具有叶色深绿,叶脆,易折断,叶片加厚、卷曲,叶下表皮气孔增大,密度减少等特征。本研究建立的黑果枸杞多倍体诱导方法以及利用流式细胞仪进行细胞核DNA含量测定分析植株倍性技术可方便快速的培育出黑果枸杞多倍体植株,为黑果枸杞新品种选育提供参考。

上皮钠通道在相关呼吸系统疾病中的研究进展

上皮钠通道(epithelial sodium channel,ENaC)是一种非电压依赖性的离子通道,是上皮细胞主要的Na+转运通道之一,属于ENaC/退化蛋白(degenerin)超家族[1-2]。ENaC对阿米洛利敏感,主要分布于人体肺部[3]、肾脏[4]、结肠、生殖道[5]及中枢神经系统[6]等多种组织的上皮细胞,能够控制Na+进入上皮细胞,对稳定细胞内Na+浓度及维持细胞渗透平衡具有重要作用[7]。

基质金属蛋白酶对结核肉芽肿形成及免疫调控作用的研究进展

结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的具有高致病性及死亡率的人畜共患传染病。作为一种胞内致病菌,Mtb通过气溶胶等途径感染肺部,随后被驻留在肺泡中的巨噬细胞识别、吞噬并发生复杂的相互作用。一方面,当Mtb感染巨噬细胞时。

组织驻留记忆T细胞在抗结核分枝杆菌感染中的研究进展

结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染引起的一种严重威胁人畜健康的传染性疾病,目前仍然是全球十大致死率疾病之一[1]。据WHO报告指出:由于这两年受到COVID-19大流行的影响,TB患者的数量大幅度下降,但由于多重耐药、共患病等因素的上升以及对TB诊断、预防和服务支出的下降,导致TB的预防和治疗现状变得更加棘手[2-3]。据不完全统计,全球目前有近四分之一的MTB潜伏感染者,这部分感染者免疫力下降后,就可能发展为活动性TB患者。由此可见,结核病发生发展与机体免疫应答功能密切相关。

谷氨酰胺酶1对卡介苗诱导的巨噬细胞自噬的调控作用

目的:探讨谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1)在卡介苗(Bacille Calmette-Guérin,BCG)感染的巨噬细胞中对自噬的调控作用。方法:培养小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,利用小干扰RNA敲减巨噬细胞内GLS1的表达并结合BCG感染,采用免疫荧光染色、流式细胞术、ELISA和Western blot等技术检测自噬相关指标,阐明GLS1对BCG诱导的巨噬细胞自噬的调控作用,并初步探讨其机制。结果:(1)BCG感染巨噬细胞显著增加了LC3B和GLS1的蛋白表达量(P<0.01),促进了谷氨酰胺分解;(2)敲减GLS1显著增加了巨噬细胞内谷氨酰胺的含量(P<0.05),同时显著降低了巨噬细胞的自噬率以及自噬相关因子LC3B(P<0.01)、beclin-1(P<0.01)和ATG12(P<0.05)的蛋白表达量;(3)剥夺培养液中的谷氨酰胺处理细胞后,敲减GLS1对BCG感染的巨噬细胞中自噬相关因子LC3B、ATG5和ATG12的表达以及自噬流的发生无显著影响。结论:在BCG感染巨噬细胞RAW264.7过程中,敲减GLS1后可通过增加巨噬细胞内的谷氨酰胺含量抑制细胞自噬。

Dickkopf(DKK1)对人白血病细胞凋亡的调控机制研究

目的探讨Dickkopf(DKK1)对人类白血病细胞株U937细胞的凋亡调控机制。方法用DCFH-DA荧光探针法检测活性氧(ROS)水平;用JC-1染色法检测线粒体跨膜电位(ΔΧm)水平;Annex in V/PI双标法检测凋亡率;Western-blot检测凋亡相关蛋白水平。结果 Dickkopf(DKK1)处理后的人白血病细胞活性氧水平显著升高且NAC可以阻断DKK1对活性氧水平的升高;线粒体膜电位水平显著下降;并且上调了促凋亡蛋白BAX的表达,下调了抗凋亡蛋白Mcl-1、Bcl-2的蛋白表达水平。结论 Dickkopf(DKK1)通过升高活性氧水平并降低线粒体膜电位水平从而诱导人白血病细胞的凋亡。