夏咸柱(中国工程院院士、解放军军事医学科学院军事兽医研究所研究员):加强禽流感防控,严防人间流感大流行

夏成柱院士在题为《加强禽流感防控，严防人间流感大流行》的报告中，首先介绍了流感病毒分型与变异情况，并就动物流感与流感大流行情况作了历史性的回顾。他说，就当前来看，动物流感流行的国家和地区在不断扩大，2014年．印尼有12个省累计暴发260多起H5N1疫情：越南有32个省累计暴发80多起H5N1疫情。此外，朝鲜、柬埔寨、印度等国家在去年都暴发了多起H5N1疫情．其中朝鲜平壤市和黄海北道暴发的疫情造成17万只鸡发病，4万多只鸡死亡：印度发生的4起疫情，造成1．8万只家禽发病，约23万只家禽被销毁。

白喉毒素-(Gly_4 Ser)_2-α促黑素重组蛋白的研究

白喉毒素(DT)是由白喉棒状杆菌所产生的分子量为58 kD的外毒素,它在胰蛋白酶的作用下可降解为A和B两个片段, B片段能与敏感宿主细胞的特异受体结合并能将A片段转位到胞浆,A片段具有核糖体依赖的酶活性,它通过灭活真核细胞的肽链延长因子Ⅱ来阻断细胞蛋白合成.

湖南湘西地区外观健康犬携带狂犬病病毒的调查研究

为了解湖南湘西地区外观健康犬携带狂犬病病毒的情况,我们于2005年9月从湘西狂犬病疫点采集38份扑杀的外观健康的犬脑组织,并于2006年1月在湘西农贸市场采集了168份外观健康的犬脑组织。RT-PCR和直接荧光抗体试验(FAT)检测表明共有5份犬脑标本为阳性,并用乳鼠脑内接种的方法分离得到了5株狂犬病病毒毒株,分子流行病学分析表明这5株病毒均为野毒。在这5份阳性标本,疫点有4份,检出率为10.5%,市场1份,检出率为0.59%。我们的调查结果表明疫点的外观健康犬携带狂犬病病毒的检出率与国内的其它报道接近,而从市场采集的标本的检出率却要低很多。

抗弓形虫药物研究进展

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种呈世界范围分布的人兽共患寄生原虫,给人类生活和畜牧业生产带来极大的危害,然而至今仍没有理想的治疗弓形虫病的药物。近年来,研究人员主要从干扰弓形虫的叶酸代谢、检测抗其他病原微生物和寄生虫药物的抗弓形虫活性,以及针对弓形虫独特的生理结构和生化反应路径进行药物设计,开展抗弓形虫药物的研究,取得了许多重要的成果。随着人们对弓形虫研究的不断深入,对其分子生物学特性会有更加全面的了解,将给新的药物靶标的发现和特效药物的研发提供重要的理论依据。

宠物源人兽共患病防控战略研究

近年来,宠物越来越受到人们的关注,同时带来的人兽共患病问题也接踵而至。本文分析了宠物源人兽共患病的病原情况和防控现状,阐明了我国宠物源人兽共患病防控仍然面临巨大挑战,提出了加速提高宠物医疗技术水平、加快宠物药品的研制与注册等建议,对于防控宠物源人兽共患病有一定的借鉴意义。

实时荧光定量PCR技术研究进展及应用

实时荧光定量PCR(Real-time fluo-rescent quantitative polymerase chain reac-tion,Real-time PCR)技术是20世纪90年代中期发展起来的一种新型核酸定量技术。它利用荧光实时检测PCR反应,具有灵敏度高、特异性强、节约时间等优点。文章就常用的4种方法,即DNA结合染色、水解探针、分子信标和杂交探针的原理和特点进行介绍,同时综述了荧光定量PCR技术在实践中的应用。

利什曼原虫研究进展

利什曼原虫能够引发利什曼原虫病,其黏附于巨噬细胞,黏附后随巨噬细胞的吞噬活动进入细胞内并大量增殖,使感染者肝脾肿大,然而由于感染途径、剂量和种株的不同,利什曼原虫的致病性也存在差异。利什曼原虫的检测方法有许多,常见有ELISA、PCRI、FAT等。PCR技术不光应用于诊断利什曼原虫病,还被广泛应用于利什曼原虫的种属鉴定及不同种利什曼原虫体内基因的表达和克隆等方面。另外,原位杂交方法也可检测利什曼原虫,但应用原位杂交方法对利什曼原虫进行的研究还较少。利什曼原虫体内存在一种高度保守性蛋白(LACK),国外学者认为LACK是研究利什曼原虫疫苗的一个很好的候选抗原。

犬瘟热研究进展

犬瘟热是由犬瘟热病毒引起的一种高发传染病,宿主范围包括大部分食肉目动物。犬瘟热病毒可以感染不同器官和组织的上皮细胞、间质细胞、神经内分泌细胞及造血干细胞,引发全身型或神经型的临床过程,并在中枢神经系统和淋巴组织中形成持续感染,免疫抑制和脱髓鞘性脑脊髓炎是代表性的病症,而淋巴细胞介导的细胞毒性作用的缺乏则与病毒在中枢神经系统的持续感染有关。犬瘟热发病机制与病理学的研究对于犬瘟热的免疫预防和临床诊治有重要的意义。

微血管内皮细胞功能的研究进展

文章回顾了微血管内皮细胞功能的研究概况。微血管内皮细胞是位于循环血液与组织液之间的单层扁平上皮细胞,不但构成了微血管通透性的主要物理屏障,保证微血管内、外正常的物质交换,而且是一种多功能的分泌细胞,通过合成并释放多种舒张因子和收缩因子以维持正常的血管紧张度;通过合成、释放多种促凝血因子和抗凝血因子,维持血液的正常状态和动态平衡。还通过其屏障和分泌功能,影响着炎症反应的发生、发展,并通过多种途径参与调节机体的免疫应答。微血管内皮细胞结构的完整性被破坏,分泌功能失调,势必导致相应组织器官的功能障碍而引发多种病理过程,从而会引发内皮细胞机能障碍和休克、感染、肿瘤、创伤、水肿、急性炎症等多种疾病。

布鲁菌分子分型方法应用研究进展

布鲁菌属细菌是布病的病原菌。当前,用于布鲁菌属细菌分型的方法有多种,而布鲁菌分子分型方法在布病的分子流行病学调查、病原菌的快速分型鉴定、病原菌的溯源分析和菌株之间差异关系的分析过程中被广泛应用并具有十分重要的作用。本文就常用的布鲁菌的核酸探针技术(DNA probes)、聚合酶链式反应(PCR)、实时定量PCR(Real-time PCR)、16SrDNA鉴定、PCR限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)、单核苷酸多态性分析(SNP)、脉冲场凝胶电泳(PFGE)、多位点序列分型(MLST)、多位点串联重复序列分析(VNTR/MLVA)等分子分型方法的应用研究进展予以综述。

小反刍兽疫研究进展

小反刍兽疫病毒(PPRV)是副黏病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbolivirus)的成员,主要感染山羊、绵羊等小反刍动物,引起一种高度接触性病毒性传染病。小反刍兽疫为一种重大的外来性疾病,2007年在中国西藏自治区日土县首次发生。自2013年末以来中国新疆、青海、甘肃、宁夏、内蒙、湖南、辽宁等地频繁暴发小反兽疫疫情,给中国的畜牧业带来了巨大的损失,引起极大的重视。为更好的分析小反刍兽疫的病原特性及采取有效的防控措施,文章对小反刍兽疫的病原学及疫苗研究进展进行论述。

载基因壳聚糖纳米粒的制备及免疫增强作用的初步研究

目的:制备壳聚糖载基因纳米粒,并对其体外转染效率及其在小鼠体内的免疫增强效果进行初步研究。方法:以构建的口蹄疫DNA疫苗为模型药物,采用复凝聚法制备纳米粒;用透射电镜观察形态;用纳米粒度分析仪测定粒径、多分散度和zeta电位;凝胶阻滞分析测定基因在纳米粒中的位置;用体外基因转染实验评价纳米粒的转染活性。用载基因壳聚糖纳米粒免疫雌性Balb/c小鼠,检测免疫小鼠的细胞免疫和体液免疫水平。结果:所制备的载基因纳米粒形态规则、大多成球形,平均粒径约为150nm,多分散度<0.26,zeta电位约为21mV;凝胶分析结果表明质粒DNA与壳聚糖分子间可以通过电性结合作用而完全结合,基因几乎全部被包裹在纳米粒内部;体外基因转染实验表明壳聚糖作为一种新型的非病毒基因递送载体能够高效传递DNA进入BHK-21细胞,基因能够在该细胞中高效表达;小鼠免疫实验表明纳米粒不仅能诱导机体产生较高的细胞免疫水平,而且体液免疫水平也显著提高。结论:壳聚糖纳米粒能将基因递送到细胞内并且能够表达,小鼠免疫实验显示其具有良好的免疫增强效果。

虎源H5N1亚型高致病性禽流感病毒人工感染家猫的病理学研究

经SPF鸡胚增殖的虎源高致病性禽流感病毒A/Tiger/Harbin/01/2002(H5N1)株,其对MDCK细胞的TCID50为10-7.36/0.05 mL,经气管接种途径人工感染家猫,对感染致死的家猫和对照组家猫心、肝、脾、肺、肾、脑等脏器进行组织病理学观察和免疫组织化学染色,同时采集咽拭子和各脏器乳剂上清液进行RT-PCR检测,对耐过家猫与对照组家猫进行HI抗体测定。结果表明:剖检感染的死亡家猫以肺脏的损害最为明显,肺叶上有大片暗红色实变灶,呈多病灶融合性肺损伤。组织学光镜观察,病毒对家猫的损害主要见于肺脏,呈融合性炎性病变,浸润的主要为单核细胞,肺泡腔内可见较多量巨噬细胞浸润及少量蛋白样浆液渗出。免疫组织化学染色发现在支气管上皮细胞、少数肺泡上皮细胞和单核细胞胞浆中可见到该病毒的抗原阳性染色颗粒。RT-PCR检测结果在咽拭子以及肺、肾、心、脑组织中均扩出与理论值一致的464bp核酸条带,耐过家猫血清H5N1亚型流感病毒HI抗体效价为1∶32。

重组痘苗病毒载体研究进展

通过同源重组将外源基因插入到痘苗病毒基因组内,以痘苗病毒为载体使外源基因在动物细胞内表达以获得目的蛋白,从而达到免疫接种的目的。痘苗病毒有宿主范围广、允许插入外源基因片段长、可通过多种途径进行接种、能诱导体液和细胞免疫反应及易于增殖生产等优点,在疫苗研制中得到了广泛的应用。以痘苗病毒作为载体表达狂犬病病毒糖蛋白研制成的狂犬病疫苗已经在野生动物狂犬病控制中发挥了巨大的作用,用痘苗病毒研制的艾滋病病毒疫苗也已经进入了临床试验。

内蒙古布鲁氏菌临床分离株多位点序列分型研究

目的探讨临床分离布鲁氏菌的种群结构和遗传进化特征。方法布鲁氏菌标准参考菌株羊种16M,牛种544A和猪种1 330S作为对照菌株,采用多位点序列分型(Multiple locus sequence typing,MLST)方法对内蒙古地区分离的116株羊种布鲁氏菌进行分析,确定待测菌株的序列型(STs),用软件BioNumerics(Version 5.0)构建菌株的最小生成树。结果116株羊种布鲁氏菌全部为ST8型,9个MLST位点的变异完全相同,分离株种群结构单一;羊种菌的生物型与ST型无明显关联,ST8型菌系该地区的主要流行菌种,并与内蒙古地区先前分离羊种布鲁氏菌进化程度相同,且有密切的亲缘关系。结论羊种布鲁氏菌的序列分型(ST)与常规生物分型存在差异,ST8型菌可能具有较强的环境适应性和致病性。MLST是一种较好的羊布鲁氏菌种群和进化关系研究方法,但更适合于具有较大时间跨度和地理分布菌株间的流行病学调查。

犬冠状病毒基因疫苗表达载体的构建及其免疫原性研究

以pVAX1为载体首次构建了犬冠状病毒病基因的3种真核表达质粒。首先将犬冠状病毒大熊猫株(CCV DXMV)纤突蛋白(S)、膜蛋白(M)和核蛋白(N)基因进行了克隆和序列测定。将测序后的质粒pTS、pTM和pTN分别双酶切,回收目的基因片段并将其定向克隆到真核表达质粒pVAX1中得到重组质粒pVAXS、pVAXM和pVAXN。将这3种真核表达质粒通过脂质体介导法转染MDCK细胞,通过RT-PCR法进行转录水平的检测,并用间接ELISA法检测目的蛋白的表达情况。结果在pVAXS、pVAXM、pVAXN转染MDCK细胞36 h后就可检测到目的基因的转录;在转染72 h后可检测到3种目的蛋白的表达。动物免疫试验表明,3种真核表达载体能有效地诱导机体产生细胞免疫与体液免疫应答,这为CCV基因疫苗的研究奠定了良好的基础。

A型流感病毒跨种传播和致病性相关蛋白研究进展

A型流感病毒是重要的人和动物病原体,每年都会在人群中引发季节性流感流行,偶尔还会引发全球流感大流行,对公共卫生安全构成严重威胁。研究发现,A型流感病毒的跨种传播与该病毒的多个蛋白有关,其中血凝素是该病毒宿主范围的主要限制因素,但聚合酶蛋白和非结构蛋白1(NS1)的作用也不容忽视。A型流感病毒通过不断地适应各类宿主和长期地进化,每年都能够产生大量致病性未知且具有潜在流行性的新毒株,人们经过长期地研究发现,A型流感病毒的致病性主要受该病毒的聚合酶蛋白、血凝素蛋白和非结构蛋白1(NS1)上某些特定氨基酸的影响。论文从以上几方面对A型流感病毒跨种传播和致病性分子机制的研究进展进行综述。

植物乳杆菌melA基因的克隆及其作为食品级筛选标记的初步研究

以L.plantarum1.557的基因组DNA为模板,通过PCR技术成功克隆α-半乳糖苷酶基因(melA基因),与报道的melA基因序列同源性达到99%以上。再以大肠杆菌-乳酸菌穿梭表达载体pMG36e为基本骨架,将melA基因插入该载体,构建melA基因标记的穿梭表达载体pMG36e-melA。重组表达质粒pMG36e-melA经Sac I和Sph I双酶切和PCR鉴定与预期片段大小相符。结果表明已初步构建了以melA基因为食品级筛选标记的重组载体。

抗口蹄疫病毒策略研究进展

口蹄疫是偶蹄动物的一种烈性传染病,可使世界范围内的畜牧业遭受严重的经济损失。该病的防控方法主要包括扑杀、销毁病畜及其同群动物,对疫区内其它易感畜群和受威胁区的易感动物立即紧急接种对应型号的口蹄疫疫苗,除此之外,还需要有一些新的紧急抗病毒策略来弥补疫苗的不足,从而为易感动物及未感染动物提供及时的保护,作者着重综述了抗口蹄疫病毒策略的研究进展,主要包括IFN的应用、反义技术的应用、RNA干扰技术的应用三方面内容。

piggyBac转座子应用研究进展

piggyBac转座子是来源于鳞翅目昆虫粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)的DNA型转座子。目前piggyBac转座子已成为在昆虫中应用最广泛的转座子之一。近年来国内外研究者更将其应用领域拓宽到了鱼类,寄生虫和哺乳动物等转基因研究中。随着对piggyBac转座子功能和分布的深入认识,piggyBac转座子将更多应用于基因功能研究,基因治疗,转座子介导的细胞系基因诱变及基因工程蛋白表达等基础研究和应用研究中。