O型口蹄疫病毒VP1基因的克隆及其在重组杆状病毒中的表达

利用杆状病毒表达系统进行了口蹄疫病毒VP1基因在Sf9细胞中的表达研究。首先克隆了VP1基因片段,将pMD18-VP1质粒及杆状病毒转座载体质粒pFastBac分别用BamH及Hind酶切后,用T4DNA连接酶连接,构建了重组质粒pFastBac-VP1;再将该重组质粒转化DH10Bac感受态细菌,在菌体内进行重组,并经三重抗性与蓝白斑筛选,得到杆状病毒重组质粒Bacmid-VP1;将Bacmid-VP1转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒,并进行表达水平的检测。经SDS-PAGE和Western-blotting检测,结果表明,VP1蛋白在重组杆状病毒中获得表达。