一种获得高纯度睾丸支持细胞的分离方法

背景:研究证实睾丸支持细胞具有免疫抑制功能,可以被用于在睾丸以外的部位为移植细胞提供免疫豁免环境。最近的研究还表明支持细胞分泌的多种活性物质对其他细胞有促进作用。但至今其分离纯化方法还不完整,且细胞纯度不太理想。目的:探讨一种获取高纯度睾丸支持细胞的方法。方法:迅速分离出生后20d雄性SD大鼠睾丸生精小管,采用酶消化法将细胞悬液接种于多聚赖氨酸包被的培养板内培养7d后,采用Tris-HCL低渗缓冲液处理生精细胞和成纤维细胞,采用FasL免疫组织化学、Hoechst33342复染鉴定睾丸支持细胞的纯度。结果与结论:支持细胞贴壁性比较强,培养24h后,大多数细胞开始贴壁,细胞形状呈圆形或椭圆形,培养液中漂浮着较多生精细胞。培养48h后,胞质逐渐增多,折光性减弱。三四天后支持细胞胞质铺展,细胞间隙变小。4～6d后胞质完全铺开,细胞相互连接,铺展成膜状单层。此时,质核比为(7～9)∶1,细胞为多边形,其形态和胞质面积不再改变;睾丸支持细胞的纯度为(95.64±2.76)%。结果证明该方法是一种相对简便易行且经济﹑稳定﹑有效的睾丸支持细胞分离方法。

大鼠原位肾脏移植模型的建立

背景:目前已有多种大鼠肾移植模型建模方式,但在移植时间、移植效果等方面都存在各种问题。目的:探讨建立稳定、可靠的大鼠原位肾脏移植模型的方法。方法:以SD大鼠为供体Wistar大鼠为受体行原位肾移植术。供体肾动脉、肾静脉在自制橡胶垫片上分别与受体的肾动脉、肾静脉端端吻合,供体输尿管膀胱瓣与受体膀胱吻合。将实验动物随机分为2组,对照组移植后每日腹腔内输注1mLD-hanks液;环孢素A组移植后每日皮下注射环孢素A15mg/kg。记录大鼠生存时间并于移植后第3,5,10天测定血肌酐值,移植后第10天,光镜下观察移植肾病理改变。结果与结论:大鼠原位肾脏移植成功率为85%。移植后第5,10天环孢素A组血清肌酐值显著低于对照组(P<0.05)。环孢素A组大鼠肾移植后存活天数明显长于对照组(P<0.05),移植肾病理可见排斥明显减轻。提示该模型稳定性强、重复性好,具有较高的成功率。