不同给药方式下鲤对诺氟沙星的药代动力学研究

通过不同给药方式鲤对诺氟沙星的药代动力学研究，建立相关的吸收、分布与消除等药动学参数及生物 利用度资料。结果以 １０ｍｇ·ｋｇ－１鱼体重单剂量肌注、口灌诺氟沙星的药时数据符合开放性二室模型，以 １０ｍｇ· ｋｇ－１鱼体重药物剂量单次混饲给药的药时数据符合开放性一室模型。肌注给药的主要药代动力学参数为：ＡＵＣ２４．９４８１μｇ·ｈ·ｍＬ－１， Ｃｍａｘ １６．８９９２μｇ·ｍＬ－１，ｔ１／２α０．１２７９ｈ，ｔ１／２β ３．４０３２ｈ；口灌给药的主要药代动力学参数为：ＡＵＣ１５０．６０２９μｇ·ｈ·ｍＬ－１，Ｃｍａｘ５．７９９８μｇ·ｍＬ－１，ｔ１／２α３．４０７１ｈ，ｔ１／２β７７．１２３９ｈ；混饲口灌给药的主要药代动力学 参数为： ＡＵＣ６．８１８３μｇ·ｈ·ｍＬ－１，Ｃｍａｘ１．７２１７μｇ·ｍＬ－１，ｔ１／２ｋａ０．２２６４３ｈ，ｔ１／２ｋｅ２．０２１３ｈ。不同给药方式的主要药 代动力学参数差异显著（Ｐ＜０．０１）。

犬瘟热病毒H、F、N基因试验免疫研究

以构建的真核表达载体pVAXLPH、pVAXLPF和pVAXLPN为基因疫苗，分组进行了免疫小鼠试验，对免疫鼠体内免疫应答水平进行了检测。结果显示：所构建的基因疫苗可以诱导小鼠产生特异性免疫应答反应，pVAXLPH＋pVAXLPF＋pVAXLPN3个基因混合免疫小鼠诱导产生了较强的体液免疫和细胞免疫应答，免疫3次后血清中抗CDV ELISA抗体效价为0．332，而免疫前为0．158；抗CDV中和抗体效价为1：（4～16）；CD4^＋T／CD8^＋T比值为2．05±0．38，而对照组为1．99±0．56；免疫小鼠脾细胞对CDVLP及ConA刺激的增殖反应值分别为0．384和0．356。基因疫苗免疫犬试验中，进行了单用基因疫苗免疫和基因疫苗与CDV弱毒疫苗联合免疫效果的比较研究。结果显示，基因疫苗免疫3次后，血清中抗CDVELISA抗体效价为0．296，抗CDV中和抗体效价为1：（8～32）。基因疫苗免疫2次，再使用弱毒疫苗加强免疫1次，血清中抗CDVELISA抗体效价为0．433，抗CDV中和抗体效价为1：（16～64）。

猎豹与虎猫杯状病毒的分离及其超变区基因比较研究

用F8 1细胞从上海某动物园患口腔溃疡的猎豹和虎的唾液病料中分离获得两株杯状病毒 ,经形态学、理化学、生物学鉴定和病毒核酸超变区基因RT_PCR扩增与序列测定证明两株病毒均为猫杯状病毒 (FCV) ,分别命名为FCV/cheetah/Shanghai/ 0 2 / 2 0 0 2与FCV/tiger/Shanghai/ 0 3/ 2 0 0 2。人工感染猫可引起体温升高 ,口腔溃疡 ,食欲下降等症状。两株病毒的超变区序列 5 2 0bp长片段间的同源性为 99.2 % ,与国内桂林虎分离株 (TFCV9710 )的同源性为 74 .0 % ,与国外分离株的总体同源性为 5 8.1% ,说明不同宿主或同种不同个体间杯状病毒分离株超变区核酸差异十分显著 。

恩诺沙星在鲤体内的药效学及药动力学研究

用恩诺沙星对5种淡水养殖鱼类常见病、多发病致病菌进行抑菌试验,获得了恩诺沙星对细菌出血性败血病、打印病、赤皮病、烂鳃病、肠炎病致病菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为0 02、0 04、0 63、0 31、0 04μg/mL。体内抗菌药效试验结果表明,每日以10mg/kg剂量混饲口灌给药,能有效地杀灭致病菌,提高感染鱼的成活率。并应用高效液相色谱(HPLC)法测定以该剂量给药后不同时间鱼血浆中药物的质量浓度。采用MCPKP药代动力学软件处理药时数据,获得了鲤对恩诺沙星的吸收、分布与排除数据,结果表明,混饲口灌恩诺沙星在鱼体内的药时数据符合开放式一室模型,=0 2015h,t1/2K=主要药代动力学参数:AUC=45 0550μg/(mL·h),Cmax=2 1472μg/mL,t1/2Ka13 6513h。

猪瘟病毒E2糖蛋白抗原表位的预测、多肽合成及特性研究

目的 :研究CSFVE2蛋白免疫原性肽的生物学特性。方法 :应用计算机分析软件对猪瘟病毒E2糖蛋白的抗原表位进行了预测 ,结合E2基因的变异分析 ,人工合成了两条多肽 (Pep1和Pep2 )序列 ,与抗mE2蛋白的兔血清和抗mE2的 8株单抗进行反应 ,并将两条多肽分别与载体蛋白 (BSA)进行偶联和免疫家兔。结果 :两条多肽均与兔的抗血清及单抗A11反应 ;多肽Pep2与单抗D5和D8反应。多肽Pep1与BSA载体蛋白偶联 (Pep1 BSA) ,免疫家兔后能够产生针对多肽Pep1的抗体。结论 :两条多肽Pep1和Pep2中 。

猪瘟兔化弱毒抗体对不同野毒株体内外中和保护试验的相关性研究

将猪瘟兔化弱毒疫苗阳性血清与猪瘟野毒株HeBZJK1.95、GZGD1.95、HeBHH2.95、BJXC1.95、HeNBY1.96、BJCY1.96、BJSY2.96、BGTX3.96、HeNXH2.98、FJFQ1.99、JL1.94和标准石门株在PK-15单层细胞上进行中和试验,测定了猪瘟病毒抗体在体外对野毒株的中和作用能力.结果表明,阳性血清对HeBZJK1.95、GZGD1.95、B.JSY2.96、JL1.94和石门株的中和效价为1:256,对BGTX3.96株为1:128,对HeBHH2.95、BJCY1.96、HeNXH2.98株为1:64,对BJXC1.95株为1:16,对FJFQ1.99株为1:8,对HeNBY1.96株为1:4.由此表明,对不同毒株血清中和效价不同.另外测定了猪体内免疫抗体与免疫保护力的关系.采用1头份猪瘟兔化弱毒疫苗主动免疫没有母源抗体的猪,免疫后14 d和192 d抗体滴度<1:16,攻击野毒HeNXH2.98株,仔猪能够完全保护.采食初乳的2组仔猪,母源抗体滴度为<1:16～1:64,分别免疫2头份和4头份猪瘟兔化弱毒疫苗,免疫后抗体滴度均下降1～2个滴度(1头母源抗体滴度低的仔猪,免疫4头份后由<1:16达到1:16).攻击野毒HeNXH2.98株后,免疫2头份的仔猪,不管免疫后抗体水平多高(<1:16～1:64),均不完全保护;免疫4头份的仔猪,免疫后抗体滴度较低(1:8)时,不完全保护;抗体滴度≥1:16时,能够完全保护.动物免疫保护试验表明,1头份疫苗免疫抗体水平能起到良好攻毒保护作用,但母源抗体会影响疫苗免疫抗体水平和攻毒保护效果.

中国流行株HIV-1gag-gp120与IL-2/IL-6共表达核酸疫苗质粒的构建和实验免疫研究

以pcDNA3.1(+ )为载体 ,构建了含中国流行株HIV_1gag_gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒 ;并以pIRES 1neo为载体 ,构建了gag_gp12 0与IL_2 /IL_6共表达的 2种核酸疫苗质粒。将核酸疫苗质粒在体外转染BHK_2 1细胞 ,ELISA方法检测到 3种核酸疫苗质粒均表达了目的HIV_1结构蛋白。将核酸疫苗质粒免疫小鼠 ,免疫学指标检测结果表明 ,在本实验条件下 ,未能检测到含有gag_gp12 0的核酸疫苗质粒免疫鼠的细胞免疫和体液免疫功能的明显改变 ;而与IL_2 /IL_6共表达的 2种核酸疫苗质粒使免疫鼠CD4 +、CD8+T细胞数量明显升高 ,ConA和LPS诱导的细胞增殖能力显著增强 ,CTL活性明显提高 。

犬常见皮肤病诊断及防治研究

通过 2 6 75条皮肤病犬临床诊断和病原体检查 ,发现皮肤病中仍以螨病和真菌性皮肤感染率高 ,危害大。研究结果表明 ,皮肤病中疥螨病占 2 5 .46 % ,耳痒螨病占 1 5 .96 % ,蠕形螨病占 2 7.85 % ,真菌性皮肤病占1 6 .86 % ,维生素、微量元素缺乏性皮炎占5 .1 9% ,自咬症占 2 .5 4% ,病毒性皮炎占 1 .31 % ,过敏、湿疹和脓皮症占 4.79%。其中螨和真菌混合感染性皮肤感染率最高 ,发病率高达 43.0 7%。研究还发现 ,蠕形螨病还可通过胎盘感染。研制的癣螨净 886擦剂、887浴液和 888注射液对犬的多种皮肤病治愈率在95 .0 0 %以上 ,886擦剂对人犬共患的皮肤病也有很好的疗效 ,癣螨净 888注射液对螨虫和真菌混合感染的皮肤病有特殊疗效 。

猪瘟病毒E2蛋白抗原单表位基因的融合表达及其免疫活性的研究

利用基因搭桥技术,在KlenowDNA聚合酶作用下,分别合成猪瘟病毒E2蛋白的3个抗原表位基因,并与原核表达载体pGEX-3X进行连接、转化和筛选鉴定,构建了3个重组质粒pGEX-C、pGEX-D和pGEX-E。在IPTG的诱导下,实现了可溶性蛋白的融合表达(GST-C、GST-D、GST-E),以GST亲和层析柱对融合蛋白进行纯化。应用ELISA和Western-blot检测证实:E抗原表位基因表达的融合蛋白GST-E具有免疫学活性,而C和D的抗原表位基因虽然都表达了融合蛋白GST-C和GST-D,但未检测到免疫学活性。免疫攻毒保护试验表明:融合蛋白GST-E具有一定的免疫保护功能,为多表位疫苗的研究奠定了基础。

诺氟沙星在鱼类细菌性疾病中的应用研究

以鲤细菌出血性败血病致病菌强毒力菌株对诺氟沙星 (Norfloxacin)等 7种抑菌药物进行体外敏感性测定 ,其中诺氟沙星高度敏感 ,最小抑菌浓度 <0 2 μg/mL。体内抗菌药效试验结果表明 ,每kg鱼体重注射 1mg诺氟沙星和口服 1 0mg/d诺氟沙星均能有效杀灭致病菌 ,提高感染鱼成活率。诺氟沙星的药动学研究结果表明 ,混饲给药后 0 75h至 2 4h ,血药浓度在 0 2 μg/mL以上。据此确定给药方案 :口服给药剂量为 1 0mg/(kg·d) ,连续给药 5次 ,在生产中应用效果良好。诺氟沙星对鲤急性口灌毒性实验结果LD50>1 0 0 0mg/kg ( 96h) ,肌肉残毒测定结果证明 ,停药 1 44h即无诺氟沙星检出 ,该药安全范围大 ,残余期短。

虎血清中犬副流感病毒的抗体流行病学调查研究

为查明犬副流感病毒 (CPIV)对虎的感染情况 ,应用CPIV细胞培养物为血凝抑制 (HI)抗原 ,对上海、桂林、哈尔滨、宜昌、郑州等地区未曾使用过任何含CPIV疫苗免疫的 38只虎的血清进行HI抗体检测。结果表明 ,有 2 5份血清CPIV的HI抗体效价为 1∶4～ 1∶32 ,有 1 3份抗体效价 <1∶2 ,血清中CPIV的HI抗体阳性率达 65 79%。

人工诱导耐恩氟沙星金黄色葡萄球菌grlA和gyrA基因突变研究

通过恩氟沙星人工多步诱导标准金黄色葡萄球菌 2 80 0 1产生MIC值为 4～≥ 1 2 8μg/ml的耐药变异株 ,选其 3株提取染色体DNA ,对gyrA和grlA基因进行PCR扩增 ,产物与pMD1 8 T载体连接 ,转化至JM1 0 9大肠埃希氏菌感受态细胞 ,筛选阳性克隆 ,测序。序列分析结果表明 ,低水平 (MIC≤ 1 6μg/ml)的耐药突变株只发生grlASer80 (TCC)→Phe (TGC)或grlA ,Ser80 (TCC)→Tyr (TAC)点突变 ,高水平 (MIC≥1 2 8μg/ml)的耐药突变株需要grlASer80 (TCC)→Phe (TGC)和gyrASer84(TCA)→Leu (TTA)等两个位点的突变。三株耐药株均发生grlASer80→Tyr (Phe)点突变 。

犬瘟热的诊断及其预防免疫的研究进展

本文对犬瘟热 ( CD)的诊断、预防免疫和免疫失败的影响因素及犬瘟热病毒( CDV)的宿主范围进行了综述。 CDV不仅感染陆生食肉动物 ,而且也感染水生食肉动物 ,并且其宿主范围还在不断扩大。CDV感染主要采用病毒分离、特异性病毒抗原或特异性核酸检测等方法确诊。疫苗包括灭活的 CDV疫苗、麻疹病毒 ( MV)异源苗及 CDV弱毒活苗。疫苗接种犬的免疫反应主要取决于毒株特性及犬的应答能力 ,只有弱毒活苗能诱导产生持久而坚强的保护力。尽管多年来 CDV弱毒活苗的使用控制了 CD的发生 ,但最近免疫过的犬发生 CD的病例并不少见。分析免疫失败的原因 ,主要是母源抗体干扰、疫苗质量差、其它病毒的免疫抑制以及