IL-18和HIV-1gag-gp120嵌合基因DNA疫苗联合免疫小鼠的免疫应答

目的 :探讨IL 18和HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗联合免疫小鼠的免疫应答。方法 :构建含IL 18的真核表达质粒pVAXIL18,将他与表达HIV 1gag gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒pVAXGE共同肌注免疫BALB/c小鼠 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体滴度。结果 :联合免疫组小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平均显著高于单独免疫组 (P <0 .0 5 ) ,空白质粒对照组 (P <0 .0 1)和PBS对照组 (P <0 .0 1)。结论 :IL 18和HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗联合免疫可诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫 ,且IL 18发挥了免疫佐剂的作用。

中国株HIV-1 gp120核酸疫苗的实验免疫研究

目的 探讨表达中国株HIV 1gp12 0基因的核酸疫苗在小鼠体内的免疫反应。方法 将表达HIV 1gp12 0的核酸疫苗质粒pVAXP经肌肉注射免疫Balb c小鼠 ,检测免疫小鼠脾CD4 +、CD8+T细胞亚群的数量 ,脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体滴度。结果 重组质粒pVAXP免疫组小鼠脾CD4 +、CD8+T细胞亚群的数值均比对照组高 (P <0 .0 5 ) ;免疫组脾特异性CTL杀伤活性与对照组相比差异极显著 (P <0 .0 1) ;血清抗体滴度显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 表达HIV 1gp12 0基因的核酸疫苗质粒pVAXP能诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫。

Ⅰ型人免疫缺陷病毒gag-gp120嵌合基因核酸疫苗的构建与鉴定

目的 :构建含Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (HIV 1) gag gp12 0嵌合基因核酸疫苗的表达质粒。方法 :将gag和 gp12 0连接后的嵌合基因插入到真核表达载体 pVAX1中 ,构建真核表达质粒pVAXGE。用脂质体法将构建的重组质粒转染Hela细胞 72h后 ,取转染的Hela细胞进行RT PCR检测和和Dot ELISA分析。结果 :重组质粒转染细胞的总RNA中 ,可扩增出目的基因的转录产物。Dot ELISA的结果显示 ,目的基因在Hela细胞内得到表达。结论 :成功地构建了表达gag gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒 ,为HIV

HIV-1 Gag蛋白酵母工程菌表达条件的优化

为了探索构建的表达HIV－1核心蛋白Gag酵母工程菌GS115/pPCGAG的最佳表达条件，我们将该酵母工程菌分别在不同条件下进行诱导表达，通过ELJSA检测培养上清中目的蛋白的表达量来分析最佳表达条件，并分析了浓缩上清时最适硫酸铵饱和度。

人免疫缺陷病毒Ⅱ型核心蛋白DNA疫苗的实验免疫研究

目的 检测HIV 2核心蛋白DNA疫苗诱导Balb c小鼠免疫应答的能力。方法 将表达HIV 2核心蛋白DNA疫苗质粒pVAXIgag肌注Balb c小鼠 ,分析CD4 + 、CD8+ T淋巴细胞的数量、脾特异性CTL反应、血清中HIV 2的特异性抗体水平。结果 重组质粒pVAXI gag免疫组与空载体pVAXI及PBS对照组相比较差异显著 ,血清抗体滴度及淋巴细胞杀伤效应为P <0 .0 1,脾T细胞亚群的数量为P <0 .0 5。结论 HIV 2核心蛋白DNA疫苗能诱导Balb

人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)gag基因疫苗的免疫原性

目的 :检测人免疫缺陷病毒 1型 (HIV 1)gag基因疫苗的免疫原性。方法 :分别以ELISA、荧光抗体染色和乳酸脱氢酶释放法 ,检测免疫小鼠血清抗体滴度、脾T细胞亚群的数量和淋巴细胞杀伤效应。结果 :血清抗体滴度、脾T细胞亚群的数量及淋巴细胞杀伤效应 ,重组质粒pVAXGAG免疫组与空载体pVAX1对照组相比较差异显著(分别为P <0 .0 5和P <0 .0 1)。结论 :HIV 1DNA疫苗质粒pVAXGAG在BALB/c小鼠中不仅可诱导特异性体液免疫 ,而且可诱导特异性细胞免疫。

HIV-1结构蛋白gag-gp120与白细胞介素2联合基因免疫

在真核表达载体pVAX1中的CMV启动子下游插入IL-2基因,构建真核表达质粒pVAXIL2。将它与表达I型人免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiencyvirus1,HIV-1)gag-gp120的核酸疫苗质粒pVAXGE共同肌肉注射BALB/c小鼠,免疫3次后,以ELISA法检测免疫小鼠血清中抗HIV-1抗体水平,结果显示联合免疫组小鼠在免疫2周后已有抗体产生,6周后进入高峰。乳酸脱氢酶释放法检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性,结果显示联合免疫组小鼠脾特异性CTL杀伤活性显著高于pVAXGE单独免疫组(P<0.05)和载体质粒pVAX1对照组(P<0.01)。以上结果表明:HIV-1核酸疫苗质粒pVAXGE与真核表达质粒pVAXIL2联合免疫可诱导特异性体液免疫和细胞免疫应答,且免疫应答水平高于pVAXGE单独免疫组,IL-2发挥了免疫佐剂的作用,增强了核酸疫苗的免疫原性。

表达HIV-1 gag-gp120嵌合基因的DNA疫苗在小鼠体内的免疫应答

目的 :检测表达HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗在小鼠体内的免疫应答效果。方法 :将真核表达质粒pVAXGE肌肉注射BALB C小鼠 ,观察免疫小鼠脾T淋巴细胞亚群的数量、特异性CTL杀伤率及小鼠免疫后不同时间点血清中IgG抗体滴度。结果 :重组质粒pVAXGE免疫组小鼠脾淋巴细胞进行了增殖 ,脾特异性CTL杀伤率显著高于对照组 (P <0 0 1) ;小鼠免疫后于第 8周血清抗体达到最高。结论 :表达HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗质粒可诱导BALB

共表达HIV-1中国流行株gp120与IL-18重组鸡痘病毒的构建及其免疫原性观察

为筛选我国的HIV_1疫苗候选株 ,以鸡痘病毒 2 82E4中国疫苗株为载体 ,构建了共表达中国流行株HIV_1外膜蛋白gp12 0和IL_18的重组鸡痘病毒 ,并将该重组鸡痘病毒免疫BALB c小鼠 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平。结果显示 ,HIV_1外膜蛋白gp12 0和IL_18不但可在重组鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞中表达 ,而且可在重组鸡痘病毒感染的哺乳动物细胞中表达。重组病毒具有良好的免疫原性 ,可诱导小鼠产生特异性抗体和脾特异性CTL反应 ,且IL_18发挥了免疫佐剂的作用。本研究结果为制备安全、有效的HIV_1基因工程活载体疫苗奠定了基础。

HIV-1核心蛋白Gag与IL-6共表达重组鸡痘病毒的构建及其免疫原性研究

分别将IL-6和HIV-1 gag基因插入到鸡痘病毒表达载体质粒pUTAL串联启动子和复合启动子(ATI-P7.5)下游,构建了重组鸡痘病毒表达质粒pUTA-GAG-IL6。经同源重组和Western blot检测,获得重组鸡痘病毒,并将该重组病毒免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠血清抗体水平和特异性CTL杀伤活性。结果获得的重组鸡痘病毒可同时表达HIV-1核心蛋白和IL-6,并在感染细胞内形成病毒样粒子。重组病毒具有良好的免疫原性,可诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫。

共表达中国株HIV-1gp120与hIL-6的重组鸡痘病毒研究

目的 构建共表达中国株HIV 1gp12 0与人白细胞介素 6 (IL 6 )的重组鸡痘病毒。方法分别将HIV 1gp12 0基因和hIL 6基因插入到鸡痘病毒表达载体pUTAL复合启动子ATI P7.5和P7.5串联启动子下游 ,构建重组鸡痘病毒表达质粒pUTA GP IL6。利用脂质体法将重组质粒和鸡痘病毒2 82E4株共转染鸡胚成纤维细胞。经BUdR加压筛选 3次后 ,重组病毒分别用PCR、间接免疫荧光试验和Westernblot进行鉴定 ,并进行小鼠免疫研究。结果 重组病毒基因组中可扩增出 1.4kb大小片段 ,重组病毒感染细胞表面有绿色荧光物质 ,表达产物的Westernblot分析表明重组病毒可表达gp12 0和hIL 6蛋白。重组病毒可刺激小鼠产生特异性体液免疫应答。结论 成功构建了共表达中国株HIV 1gp12 0与hIL 6的重组鸡痘病毒 ,为研制HIV 1基因工程活载体疫苗提供有益的资料。

共表达HIV-1 gag-gp120与IL-6重组鸡痘病毒和核酸疫苗的联合免疫研究

目的 探讨共表达HIV 1gag gp12 0与IL 6重组鸡痘病毒和核酸疫苗联合免疫小鼠的免疫应答。方法 以重组鸡痘病毒首免 ,以表达相同抗原的核酸疫苗质粒追加免疫 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平。结果 联合免疫组脾特异性CTL杀伤活性比重组鸡痘病毒单独免疫组、核酸疫苗单独免疫组、鸡痘病毒疫苗株对照组和空白质粒对照组高 ,血清抗体水平显著高于空白质粒对照组和鸡痘病毒疫苗株对照组 ,但与重组鸡痘病毒单独免疫组、核酸疫苗单独免疫组之间差异无显著性。

共表达HIV-1 gag-gp120与白细胞介素6重组鸡痘病毒的筛选

目的构建共表达中国株HIV1gaggp120与白细胞介素6(IL6)的重组鸡痘病毒(FPV)。方法分别将HIV1gaggp120基因和IL6基因插入到FPV表达质粒pUTAL复合启动子和单一启动子下游,构建重组FPV表达质粒pUTAGEIL6。利用脂质体法将重组质粒和FPV282E4株共转染鸡胚成纤维细胞,经BUdR加压筛选,重组病毒分别用SDSPAGE和WesternBolt进行鉴定,观察病毒样粒子的形成和重组病毒在哺乳动物细胞中的表达,并分析其免疫原性。结果阳性重组病毒基因组点膜处有显色斑点,WesternBolt结果显示重组病毒表达了gaggp120嵌合蛋白和IL6,在病毒感染细胞中有反转录病毒样粒子形成,且重组病毒可在哺乳动物细胞中表达目的蛋白。小鼠免疫指标检测表明该重组病毒具有很好的免疫原性。结论成功构建了共表达中国株HIV1gaggp120与IL6的重组FPV,为HIV-1基因工程活载体疫苗和巨分子颗粒化疫苗的制备奠定了基础。