狂犬病病毒SRV_9克隆株核蛋白基因的克隆、表达与特性分析

根据已发表的狂犬病病毒核蛋白基因序列 ,设计并合成了一对引物。从SAD株驯化的SRV9。蚀斑株中提取病毒RNA ,通过RT_PCR扩增出核蛋白的全长cDNA序列。测序结果显示 ,其序列与国外报道的SAD母源株序列一致。将核蛋白的cDNA克隆至原核表达载体pET_2 8b ( +)中 ,转化大肠杆菌BL2 1 (DE3 )plyss,于 3 0℃ 1mmol/LIPTG条件下诱导表达。大肠杆菌菌体裂解产物经SDS_PAGE分析 ,在分子量约为 5 6kDa处出现一新的蛋白带 ,和预期的目的蛋白分子量相符。Western_blotting检测表明 ,表达产物能与狂犬病病毒阳性血清发生特异性反应 ,出现单一反应带。扫描分析显示 ,表达产物占菌体总蛋白的 2 3 %。包涵体分离、纯化后 ,纯度达 89%。上述结果为核蛋白在狂犬病基因免疫和免疫检测中的进一步应用奠定了基础。

无蛋白培养中杂交瘤细胞的生长与单克隆抗体分泌

目的 建立应用无蛋白培养基大量制备单克隆抗体 (McAb)的生产方法。方法 本实验以 3株猪瘟病毒特异单抗杂交瘤细胞为研究对象 ,通过与常规的有血清培养法比较 ,研究了无蛋白培养基中杂交瘤细胞的生长特性、抗体分泌效率、活性与纯度。结果 无蛋白培养基中单抗的产量与效价比有血清培养的单抗高 2～ 4倍 ,而且单抗的纯度显著提高。结论 无蛋白培养基可完全取代常规的有血清培养基 ,用于生产高滴度、高纯度单克隆抗体。