大肠杆菌耐药基因定位及耐药质粒消除

对采集的 9株野生型大肠杆菌在药敏试验的基础上 ,进行了耐药基因定位。结果表明 ,4个菌株的氨苄青霉素耐药基因位于质粒上 ,不同畜群来源菌株之间耐氨苄青霉素质粒存在差异。用中草药艾叶的乙醇提取物和蒸馏提取物对大肠杆菌庆大霉素耐药性及耐药质粒进行了消除试验 ,结果艾叶乙醇提取物的消除率最高可达 6 9.4 %。

猪肌生成抑制素基因的克隆和序列测定

根据文献报道的猪肌生成抑制素基因 c DNA序列 ,分别从第 1、第 2和第 3外显子中设计引物 ,以大约克猪染色体 DNA为模板 ,分段扩增出含内含子和外显子的序列。将所得各序列回收、克隆到 p GEM-easy T载体中 ,然后进行序列测定。合并所有测得的猪肌生成抑制素基因序列 ,共获得 6 kb连续序列。分析结果表明 ,猪肌生成抑制素基因第 1内含子长 1 80 9bp,第 2外显子长 374 bp,第 2内含子长 1 978bp。所测得的外显子序列与已发表的 c DNA序列同源分析比较 ,没有出现引起氨基酸改变的突变。表明瘦肉型猪 (大约克猪 )肌生成抑制素基因仍很完整 。

生长激素释放因子(GRF)在动物肌肉组织的表达

向大鼠后肢小腿前部注射生长激素释放因子 ( GRF)的表达质粒 pc DNA3 -GRF4 0 μg,于注射后 2 d开始 ,每隔 5d杀 2只取样 ,提取 RNA和 DNA,用 PCR和 RT-PCR检测质粒及其表达。结果表明 ,在 3 0 d时仍为阳性结果。注射部位肌肉组织免疫组化检测结果表明 ,在部分大鼠 ( 1 4/ 2 4 )的肌肉组织中检测到了 GRF分子。给家兔注射 pc DNA3 -GRF质粒 1 0 0μg(第 组注射质粒 ,第 组注射含 1 0 %甘油的质粒 ) ,于注射后 1 d开始采血分离血清 ,用 RIA法测定血清生长激素 ( GH)的水平。结果表明 ,第 组在 5d时 ,GH水平上升2 7.1 %( P <0 .0 5)。本研究结果表明 ,外源 GRF在肌肉组织可获得表达 ,并能提高动物体内的

赤芝中灵芝酸类生物活性成分含量的测定方法

为了研究不同地区栽培赤芝及野生赤芝中灵芝酸类成分含量的差异 ,建立了赤芝中灵芝酸类活性成分含量的反相高效液相色谱 ( RP-HPLC)测定方法。该方法采用 YWG-C1 8色谱柱 ( 2 50 mm× 4 .6 mm ID,1 0μm) ,甲醇 -水 -乙酸 ( 49.5∶ 4 9.5∶ 1 )为流动相 ,流速 1 .0 m L/ min,柱温为室温 ,检测波长 2 50 nm。结果 ,灵芝酸 A( ) ,灵芝酸 C( ) ,灵芝酸 D( ) ,灵芝酸 E( ) 4种成分的线性范围分别为 0 .0 98～ 3.1 38、0 .0 91～2 .91 3、0 .0 89～ 2 .850、0 .0 89～ 2 .850μg,方法灵敏、准确 ,重复性好 ,回收率分别为 93.93%、96 .83%、93.0 1 %、90 .4 0 %。栽培赤芝和野生赤芝子实体中 4种灵芝酸成分的总含量分别为 0 .799～ 3.555、1 .6 1 9～2 .36 0 mg/ g。

端粒酶活性检测方法的改进及dNTP浓度对端粒酶活性的影响

利用重新设计的引物和反应步骤 ,对检测端粒酶活性的 TRAP反应进行了改进。与原有方法相比 ,新方法在PCR扩增过程中不改变端粒酶产物的长度和比例 ,能更准确地反映端粒酶反应产物的性质。利用这个方法 ,考察了d NTP浓度对端粒酶的影响 ,发现不同的脱氧核苷酸对端粒酶活性的影响有差异。

猪肌生成抑制素(MSTN)cDNA的克隆

从猪的肌生成抑制素 ( MSTN)编码序列中设计引物 ,以军牧一号猪肌细胞总 RNA为模板 ,利用 RT-PCR和嵌套 PCR技术 ,扩增出 MSTN c DNA片段。该片段全长 1 2 77bp,包含猪 MSTN基因的全部编码序列。将所得片段与 p MD1 8-T载体连接 ,转化到 JM1 0 9大肠杆菌中 ,成功地筛选到阳性克隆 ,其质粒测序结果与文献报道的一致。经 Eco R 和 Pst 酶解分析 ,c DNA片段与 p MD1 8-T载体之间既有正向插入的克隆 ,也有反向插入的克隆 ,所得到的 MSTN c

中草药消除大肠埃希氏菌耐药性及耐药质粒的研究

在系统鉴定和药敏试验的基础上 ,对 9株大肠埃希氏菌多重耐药菌株进行耐药基因定位 ,结果表明有 4株菌株的氨苄青霉素耐药基因位于质粒上。通过对中草药煎煮、水蒸气蒸馏等方法提取其有效成分 ,对耐药大肠埃希氏菌进行耐药性消除试验 ,结果发现大蒜油等对大肠埃希氏菌氨苄青霉素耐药性有消除作用 ;鱼腥草、紫草等对大肠埃希氏菌庆大霉素耐药性及耐药质粒有消除作用 ,消除率分别为 2 .98%和 4.2 0 %。

人参茎叶挥发油中含氧化合物的分离与结构鉴定

Following six compounds have been at first time isolated from the stems and leaves of Ginseng Panax ginseng C.A.Meyer by TLC technique and identified by IR, LC MS and NMR as: (Ⅰ)hexadecanoic acid, (Ⅱ)1,7,7 trimethyl bicyclo 2,3 hexandione, (Ⅲ)(2 E,4E ) decadienal, (Ⅳ) Δ 4(8) ρ menthene 3 one, (Ⅴ)2,6 di tert butyl 4 methylphenol and (Ⅵ)2 methylmethahexadecanoate.

空肠弯曲菌共同抗原重组质粒的基因测序及表达产物的特性分析

将自行构建的表达空弯菌共同抗原的重组质粒用EcoR、I、HindⅢ进行双酶切 ,将获得的外源插入片段克隆到pBluescriptⅡKS(+)质粒 ,并对其插入外源基因片段进行了核苷酸序列分析 ,结果表明该插入子的全长为 1.36 2kb ,含有 34 0个氨基酸的开放阅读框架 ,其A +T含量为 6 7.75 %。将表达重组子的菌体裂解产物进行SDS_PAGE ,并用免疫印迹对表达的抗原用 4A7单抗体探针进行反应 ,结果与 39kD的表达特异蛋白发生特异性免疫反应。用表达菌体的裂解产物免疫小鼠 ,于免疫后出现了对空弯菌CA的特异性免疫应答 ,表明重组表达的CA具有较强的免疫原性。该表达产物可作为空弯菌感染诊断和构建基因工程菌苗的候选抗原。

生长激素释放因子在CHO细胞的表达

在对生长激素释放因子 (GRF)基因改造和化学合成 ,并构建了其真核表达载体 pc DNA3- GRF(1- 32 )的基础上 ,用 L ipofectin将上述载体转染 CHO细胞进行瞬时表达。提取转染细胞总 RNA,用 RT- PCR和 Dot blotting检测 GRF基因的表达情况 ,用 Western blotting检测转染细胞上清液的表达产物 ,均得到了阳性结果。制备大鼠垂体单层细胞 ,测定表达产物的生物学活性 ,结果表达产物可刺激生长激素释放 ,并且比对照组提高 3.8倍。试验结果表明 ,已构建的真核表达载体 pc DNA3- GRF(1- 32 )能表达出有生物学活性的 GRF。

鸡下丘脑组织表达序列标签初步分析

为了鉴定所构建的鸡下丘脑组织 c DNA文库能否用于下丘脑表达谱的建立 ,从 c DNA文库中随机挑取 12个克隆 ,对其表达序列标签 (expressed sequence tags,ESTs)进行了测定和初步分析。经 BL ASTn和 FASTA3.1分析后发现 ,1个 ESTs在 Gen Bank中可以找到鸡的同源序列 ,4个在其他物种中也可以找到同源序列 ,1个在 ESTs database中有同源 ESTs序列 ,还有 6个为未知功能基因。 12个 ESTs序列均已录入 Gen Bank。

反相高效液相色谱法测定赤芝中灵芝酸的含量

目的研究不同地区栽培赤芝及野生赤芝灵芝酸类成分的含量差异.方法应用反相高效液相色谱法分离测定了赤芝中4种化学成分[灵芝酸A(I),灵芝酸C(Ⅱ),灵芝酸D(Ⅲ),灵芝酸E(Ⅳ)],对不同地区2种野生赤芝和不同地区4种栽培赤芝子实体中该4种成分定量分析.色谱柱YWG-G18(250mm×4.6mm,10μm),甲醇-水-乙酸(49.5:49.5:1)为流动相,流速1.0ml@min-1,柱温为室温,检测波长250nm;4种成分的线性范围分别为(0.098～3.138)μg,(0.091～2.913)μg,(0.089～2.850)μg和(0.089～2.850)μg,回收率分别为93.93%,96.83%,93.01%,90.40%.结果栽培赤芝和野生赤芝子实体中4种灵芝酸成分的总含量分别为0.799～3.555mg@g-1和1.619～2.360mg@g-1.结论不同地区栽培赤芝之间和不同地区野生赤芝之间灵芝酸含量差异较大;栽培赤芝中灵芝酸含量不低于野生赤芝中灵芝酸含量.本法可作为控制灵芝生药质量的一种很好方法.

间接ELISA测定GRF方法的建立

建立了间接 ELISA定量测定生长激素释放因子 ( GRF)的方法。其基本程序为 ,抗原包被、5%牛血清白蛋白和 5%猪血清封闭、一抗反应 (山羊抗人 GRF1～ 2 9抗体 )、二抗反应 (生物素化兔抗山羊 Ig G)、链霉卵白素 -HRP反应、DAB显色。最佳工作条件为 ,一抗 1∶ 1 6 0 0、二抗 1∶ 32 0 0、链霉卵白素 -HRP0 .5mg/L。在上述条件下 ,绘制了标准曲线 ( 2～ 4 0 ng) ,并测定了中国仓鼠肾细胞 ( CHO)表达

分子生物学技术在动物营养学中的应用与发展前景

分子生物学理论与技术的发展和应用已渗透到生命科学的各各领域,动物营养学的发展需要在分子水平上分析及解释营养素对动物机体的生理、病理变化调控,如生长发育、新陈代谢、遗传变异、免疫与疾病等。本文综述了分子生物学在动物营养学中的应用:利用分子生物学技术改造或生产动物性营养物质;从基因水平上研究如何提高动物生产性能及肉用性能:如肉质与瘦肉率等;在分子水平上研究营养与基因表达、调控的关系,以从根本上阐明营养对机体的作用机制;利用基因工程技术开发饲料资源。

空肠弯曲菌共同抗原基因文库的建立与基因克隆

从鸡源空肠弯曲菌中提取共同抗原成分 ,用 SDS-PAGE和 Western blot进行分析。结果表明 ,抗空肠弯曲菌共同抗原的单克隆抗体 4 A7可与共同抗原中 62 0 0 0的蛋白带发生特异免疫反应。为获得编码这种蛋白的特异基因 ,从空肠弯曲菌中提取和纯化染色体基因组 DNA,用 Eco R 和 Hind 双酶切 ,从酶切产物的琼脂糖电泳中回收 1～ 2 kb的 DNA片段 ,与用相同酶切的 p Bluescript KS( +)质粒进行重组连接 ,共挑选出 4 2 0个插入外源片段大小较为适中的重组子 ,从而初步建立了可能含有编码空肠弯曲菌共同抗原 62 0 0 0蛋白成分基因片段的重组质粒基因文库。从该文库中用双酶切获取扩增的插入外源基因片段 ,与双酶切的p ET2 8a( +)质粒进行连接 ,转化受体菌后 ,以 IPTG诱导表达 ,用 4 A7单抗作探针进行免疫筛选 ,共筛选出 6个可与该单抗发生特异反应的阳性克隆。

辽宁和内蒙古绒山羊血液蛋白质和酶多态性的研究及其与生产性能的关系

利用不连续系统聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定了辽宁绒山羊 (12 6只 )、内蒙古绒山羊二狼山品系 (48只 )、内蒙古绒山羊阿尔巴斯品系 (48只 )的血红蛋白 (Hb)、血清白蛋白 (Alb)、酯酶 (Es )、碱性磷酸酶 (Alp )和淀粉酶 (Am )的多态性 ;发现血红蛋白和血清白蛋白表现为单态 ,而另三种酶表现为多态。结果表明 :血清酯酶共有三种基因型 ,即EsAA、EsAB、EsBB ,受两个共显性基因ESA 和ESB 控制 ;碱性磷酸酶共有二种基因型 ,即Apf和Apo型 ,受两个基因Apf 和Apo控制 ;淀粉酶共有三种基因型 ,即AmAA、AmAB、AmBB ,受两个共显性等位基因AmA 和AmB 控制。各品系间Es、Alp、Am的基因频率有很大差异。AmAB型个体产绒量明高于AmAA和AmBB型个体 ;Apf型个体产绒量高于Apo型个体 。

抗meso-四(α,α,α,α-O-苯乙酰苯)卟啉抗体的酶学性质研究

利用小分子ｍｅｓｏ－四(α,α,α,α－Ｏ－苯乙酰苯)卟啉作为全抗原免疫小鼠,通过细胞融合等技术制备了单克隆抗体(ＭｃＡｂ)１Ｆ２,利用高效液相色谱(ＨＰＬＣ)、基质辅助激光解吸飞行时间质谱(ＭＡＬＤＩ/ＴＯＦＭＳ)证明纯化得到的单抗是很纯的．ＭｃＡｂ１Ｆ２的保留时间是２．６３ ｍｉｎ,亚型为ＩｇＧ２ａ,相对分子量为１５６ ６７８．８．ＭｃＡｂ １Ｆ２－卟啉复合物形成时,卟啉Ｓｏｒｅｔ带最大吸收峰从４０８ｎｍ红移到４１６ｎｍ,并有增色效应,说明ＭｃＡｂ１Ｆ２－卟啉是刚性且紧密结合．抗体酶稳定性很高,但比活力只有４．６８７ ５ Ｕ/ｍｇ,为天然酶ＨＲＰ的１．８９９%．抗体酶的Ｋｍ＝２０．２９ ｍｍｏｌ/Ｌ,ｋｃａｔ＝３９６．８２ ｍｉｎ－１,ｋｃａｔ/Ｋｍ＝１．９５５ ７×１０４Ｌ·ｍｏｌ－１·ｍｉｎ－１．