凋亡蛋白融合基因在大肠杆菌中的表达及抗体制备

在获得凋亡蛋白融合基因重组质粒pMD18_T_EGF_PⅡ_Apoptin的基础上 ,成功地构建了重组表达质粒pET_2 8a_EGF_PⅡ_Apoptin ,将阳性重组质粒转化表达受体菌BL2 1(DE3)感受态细胞中 ,经IPTG诱导表达 ,进行表达产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS_PAGE)检测 ,结果表明 ,表达蛋白带位于 33kD处 ,凋亡蛋白融合基因获得高效表达 ,薄层扫描分析表明表达蛋白占菌体蛋白的 4 0 %。表达蛋白经透析袋电洗脱法纯化后 ,对獭兔进行常规免疫 ,应用ELISA检测到较高的多克隆抗体效价 ,表明此蛋白具有良好的抗原性。Westernblot结果显示 ,利用纯化包涵体制备的兔抗血清可以很好地和所表达的蛋白带特异性结合。

人喉癌细胞端粒酶催化亚基cDNA片段的扩增与克隆

目的 :测定人喉鳞状上皮癌 hep- 2细胞的端粒酶活性水平并获得 hep- 2细胞中 h TERT c DNA片段的克隆。方法 :采用 TRAP- ELISA法测定酶活性水平 ,RT- PCR技术扩增获得目的片段。利用酶切法、PCR法和序列分析法对所获克隆进行检测。结果 :hep- 2细胞具有较高的端粒酶活性水平 ,获得含h TERT c DNA片段的克隆。结论 :利用 RT- PCR法能够从具有较高端粒酶活性水平的 hep- 2细胞中扩增获得 h TERT c

抗脂肪细胞特异膜蛋白单链抗体基因的克隆及序列分析

从分泌抗 4 0ku脂肪细胞特异膜蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取纯化mRNA ,经RT PCR扩增抗体轻、重链可变区基因 ,然后与Linker连接组装成单链抗体基因 (scFv)。结果 ,成功地构建了scFv基因 ,其排列方式为VH linker VL。经序列分析表明 ,scFv基因全长 74 1bp ,VH基因全长 36 9bp ,VL基因全长 32 7bp。

抗猪脂肪细胞膜蛋白抗体的制备与鉴定

以蔗糖密度梯度离心提取猪皮下脂肪细胞和其他组织细胞膜蛋白,经SDS-PAGE分析。

端粒(酶)同癌症与衰老关系的研究进展

端粒是真核生物染色体的天然末端，具有稳定染色体结构，避免遗传信息在复制过程中丢失的作用。端粒酶是端粒复制所必须的一种特殊的ＤＮＡ聚合酶，在大多数的正常人体细胞中没有活性。在近年来的研究中，人们发现“衰老者的端粒缩短”，而且在约８５％的肿瘤细胞中检测到了端粒酶活性。这些事实提示人们：端粒、端粒酶同癌症与衰老之间存在相关性。

端粒酶活性检测的研究进展

端粒、端粒酶具有特殊的结构和功能 ,因为其与肿瘤的密切关系已经引起人们的高度关注并成为当今分子生物学的研究热点之一。有资料证实 ,端粒酶的激活与恶性肿瘤的形成有密切关系[1,2 ] 。有些专家认为 ,端粒酶活性表达的多少可以做为恶性肿瘤发展程度的衡量指标 ,对于恶性肿瘤的早期诊断具有十分重要的意义。正因为如此 ,端粒酶活性的检测就显得尤为重要了。