HIV-1中国流行株gp120基因在痘苗病毒中的表达及其与核酸疫苗的实验免疫研究

将HIV 1中国流行株 gp12 0基因在痘苗病毒中进行表达 ,以期获得重组痘苗病毒 ,与核酸疫苗混合免疫 ,评价免疫效果 ,为艾滋病疫苗开发研制打下基础。将HIV 1中国流行株 gp12 0基因片段插入到 pJ38载体启动子下游 ,经同源重组和血凝素阴性空斑筛选重组痘苗病毒 ,SDS PAGE、Westernblot检测目的蛋白。以重组病毒和核酸疫苗免疫BALB/c小鼠 ,进行淋巴细胞转化实验、CTL、CD4 +、CD8+T细胞数目及血清抗体等细胞免疫和体液免疫指标检测。结果获得的重组痘苗病毒vJ38gp12 0能够表达Gp12 0蛋白并诱导机体产生细胞免疫和体液免疫 ,具有良好的免疫原性 ,其免疫效果以 2rVV DNA混合方式为最好。重组痘苗病毒vJ38gp12

HIV-1中国流行株gag-hIL-2重组痘苗病毒与pIRES-gag-hIL-2核酸疫苗联合免疫的实验研究

目的 将HIV 1中国流行株B亚型gag和hIL 2基因在天坛株痘苗病毒中进行共表达 ,与核酸疫苗联合免疫 ,评价免疫效果 ,为新型艾滋病疫苗开发研制奠定基础。方法 将HIV 1中国流行株gag hIL 2基因片段插入到痘苗病毒载体pJ38启动子下游 ,经同源重组和血凝素阴性空斑筛选重组痘苗病毒 ,SDS PAGE、Westernblot检测目的蛋白。以重组病毒和核酸疫苗免疫BALB c小鼠 ,进行淋巴细胞转化实验及血清抗体的细胞免疫和体液免疫指标检测。结果 获得了重组痘苗病毒vJ38gag IL 2 ,具有更好的免疫原性 ,3rVV效果好于 2rVV ,以 2rVV DNA混合免疫效果最好。结论 重组痘苗病毒vJ38gag IL

人白细胞介素18和新城疫病毒HN基因嵌合表达载体的构建与表达

目的:构建人白细胞介素18(IL - 18)与新城疫病毒(NDV) HN基因嵌合表达质粒。方法:选用适当的限制性核酸内切酶将NDV的HN基因连接至真核表达质粒p VAX1IL - 18中IL - 18基因的尾部,同时替换掉IL - 18基因的终止子,构建表达IL - 18HN嵌合基因的p VAX1IL - 18HN质粒,经酶切鉴定正确后,通过脂质体介导转染He L a细胞,应用Western blotting及血凝试验检测其表达情况。结果:酶切鉴定证实正确地构建了p VAX1IL - 18HN嵌合表达质粒,Western blotting和血凝试验检测结果表明,嵌合后的IL - 18和HN基因均能够表达,且表达的HN蛋白具有较高的血凝活性。结论:IL - 18和HN基因嵌合后不影响二者的表达,而且表达的HN蛋白具有血凝活性。

提高bFGF基因表达水平的策略及其表达产物的纯化工艺

目的 :通过在同一个表达载体pLX1上调整SD序列和ATG之间距离 ,以提高bFGF目的蛋白表达量。方法 :以Klenow和MungBeanNuclease通过增加 2个及减少 2个碱基调整SD序列和ATG之间距离 ,SDS PAGE和Westernblot检测目的蛋白表达量 ,以高压液相疏水层析、凝胶过滤及肝素亲和层析纯化目的蛋白、MTT法进行活性测定。结果 :获得了重组质粒pLX2 ,pLX3 ,诱导后与表达质粒pLX1( 7.78% )相比 ,表达量分别为 8.0 3 % ,9.9% ,经纯化后获得的bFGF纯度达 98% ,ED50 为 2 .2 9ng/ml。结论 :调整SD序列和ATG之间距离可以增加目的基因的剂量 。