从疑似猪瘟病料中检出牛病毒性腹泻病毒

根据牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）ＮＡＤＬ株和猪瘟病毒（ＨＣＶ）Ａｌｆｏｒｔ株的核苷酸序列，设计合成了１对ＢＶＤＶ引物和３对ＨＣＶ引物。以从吉林、长春、哲盟３个地区经临床及病理学诊断为猪瘟的病料中提取的ＲＮＡ为模板，采用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），分别以ＢＶＤＶ和ＨＣＶ引物进行扩增。结果，用ＢＶＤＶ引物从哲盟地区的疑似猪瘟病料中扩增出大小约４００ｂｐ的片段，而用３对ＨＣＶ引物在不同的条件下均未从该病料中扩增出相应大小的ＨＣＶ基因片段。此外，用ＨＣＶ的ＰＥ０／ＰＥ４引物从吉林、长春的病料中扩增出了ＨＣＶ的基因片段，但用ＢＶＤＶ引物从这两个地区的病料中均未扩增出ＢＶＤＶ的基因片段。从哲盟疑似猪瘟病料中扩增出的片段经克隆、序列测定及计算机分析证实，该片段的核苷酸序列和氨基酸序列与ＢＶＤＶ的同源性明显高于与ＨＣＶ的同源性。将哲盟病料接种于ＭＤＢＫ传代细胞，出现典型而规律的ＢＶＤＶ样细胞病变。由此证明。

健康牛、羊瘤胃内环境参数

对３６头健康黄牛和３４只健康东北细毛羊的瘤胃内环境参数进行了测定。牛、羊分别为：漂浮沉降试验（５．０９±１．１４）和（５．５９±１．１３）ｍｉｎ，次甲基蓝反应（５．０６±０．６０）和（４．０３±０．９０）ｍｉｎ，ｐＨ值６．８１±０．４１和６．０６±１．５４，总酸度（２０．４９±３．９５）和（２０．９４±４．０１）Ｕ；乙酸（３０．７３±１１．３８）和（３７．１２±１３．０３）ｍｍｏｌ／Ｌ，丙酸（１５．２３±６．０１）和（２８．５４±８．６５）ｍｍｏｌ／Ｌ，丁酸（７．２２±２．６４）和（１７．９１±８．６５）ｍｍｏｌ／Ｌ，乳酸（７．４５±２．０２）和（１０．１９±１．９８）ｍｍｏｌ／Ｌ，挥发性脂酸（５６．３５±１６．４４）和（８３．５７±１９．６２）ｍｍｏｌ／Ｌ；Ｎａ＋（１０２．８４±１５．９１）和（９３．６２±９．５９）ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｋ＋（３．９５±０．６５）和（９．８０±４．４２）ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｃｌ－（１９．６６±４．４９）和（１６．６１±２．３７）ｍｍｏｌ／Ｌ；纤毛虫计数（５３．３８±２９．１５）和（５２．９４±２５．９７）万／ｍＬ，纤毛虫大、中、小比例１∶２．４∶１９．４和１∶３．６∶２８．０，纤毛虫活?

牛病毒性腹泻病毒P125基因重要区的比较与分析

根据牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）ＮＡＤＬ株的序列，以计算机辅助设计，化学合成１对引物（Ｗ１／Ｗ２）；应用ＲＴ－ＰＣＲ对国内不同地区分离的４株ＢＶＤＶ的Ｐ１２５基因外源序列插入区进行了扩增，并将扩增的片段进行克隆和序列测定，同时以ＤＮＡＳＩＳ和ＰＲＯＳＩＳ计算机软件将测定的核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行比较分析。结果证实，国内分离的４株ＢＶＤＶ在这一区域中既没有外源序列的插入，也没有基因重组、基因重排或基因缺失，但存在某些核苷酸和氨基酸的替换，表明病毒的致细胞病变作用除与外源序列的插入、基因重组、基因重排或基因缺失有关外，可能还存在其他机制。核苷酸序列的同源性及系统树分析的结果表明，国内的ＢＶＤＶ毒株存在Ｉａ和Ｉｂ２个基因亚型。

应用PCR方法对中国旋毛虫虫株的鉴定

收集了中国８个地区不同宿主来源的旋毛虫虫株，提取虫体ＤＮＡ，应用Ｊｅａｎ设计的引物序列和不同的退火温度进行了ＰＣＲ扩增。结果：哈尔滨海伦猪株、长春犬株、沈阳猪株、河南南阳猪株、湖北十堰猪株、西安猪株、云南大理猪株均显示出家畜型旋毛虫特异的６０２ｂｐ目的ＤＮＡ基因片段；而哈尔滨五常犬株未见此片段。在４８℃和５０℃退火温度扩增显示，哈尔滨五常犬株和长春犬株均有３８０ｂｐＤＮＡ基因片段，而其他虫株未有此片段。

用PCR鉴定大肠杆菌O157∶H7

根据大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７的编码ｅａｅ蛋白的ｅａｅＡ基因和大肠杆菌编码Ｈ７抗原的ｆｌｉＣ基因的核甘酸序列，合成了２对寡核苷酸引物，建立了一个检测大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７的ＰＣＲ方法。对１１株已知大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７（ＮＭ；无运动性）株和其他不同属的４２株已知肠道致病菌的检测结果表明，该方法只从大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７（ＮＭ）株的ＤＮＡ中产生预期的扩增产物，而从其他菌株的ＤＮＡ中未扩增出任何ＤＮＡ产物。该方法从基因水平直接确定大肠杆菌的血清型，特异性强，克服了以往血清学方法有非特异性反应的缺陷，为检测和鉴定大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７（ＮＭ）提供了一个新方法。

中国旋毛虫形态度量学分析

对来自中国８个地区的猪、犬源旋毛虫（哈尔滨海伦猪株、哈尔滨五常犬株、长春犬株、沈阳猪株、河南南阳猪株、湖北十堰猪株、西安猪株、云南大理猪株），系统测量了其不同发育阶段，包括包囊、肌幼虫、成虫（、♀）的长度、宽度，包囊形态学指数，肌幼虫和成虫体部大小。旋毛虫各发育阶段之间形态学变化缺乏规律性，表现在包囊大，幼虫和成虫不一定大，反之亦然；各地虫株长宽度间虽然也有差异，但也缺乏一定的规律性。因此，旋毛虫形态学在种株分类研究中不能作为依据。

犬吉氏巴贝斯虫的人工感染及治疗试验

为进一步证实犬吉氏巴贝斯虫（Ｂａｂｅｓｉａｇｉｂｓｏｎｉ）的致病作用，筛选较为理想的治疗药物，将１２只杂种狼犬均分为摘脾组与不摘脾组，进行了吉氏巴贝斯虫人工感染试验。人工感染犬临床症状与自然感染犬无明显差异，表现为体温升高、红细胞减少、Ｈｂ降低及虫血症等，摘脾组较不摘脾组虫血症和症状的出现早１～２ｄ。将此１２只人工感染犬及６７只自然感染犬随机分成４组，分别以贝尼尔（Ｂｅｒｅｎｉｌ）、阿卡普林（Ａ－ｃａｐｒｉｎｕｍ）、蒿甲醚（Ａｒｔｅｍｔｈｅｒｉｎ）和磷酸伯氨喹（Ｐｒｉｍａｑｕｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔｅ）４种药物进行治疗比较试验，结果以蒿甲醚疗效最好，用药后第２天虫体转阴率达７０％，第３天Ｈｂ由２８ｇ／Ｌ上升到６４ｇ／Ｌ，奏效迅速。

应用PCR检测产vero毒素大肠杆菌

根据产ｖｅｒｏ毒素大肠杆菌（ＶＴＥＣ）产生的ｖｅｒｏ毒素１（ＶＴ１）和ｖｅｒｏ毒素２（ＶＴ２）的基因序列，合成了２对寡核苷酸引物，建立了聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增方法。共对４株产ｖｅｒｏ毒素大肠杆菌和其他７个属的４１株肠道致病菌中的ＶＴ基因进行了检测，结果仅从用传统组织培养方法确定为ＶＴ阳性的产ｖｅｒｏ毒素大肠杆菌和痢疾１型志贺氏菌提取的ＤＮＡ中观察到了ＰＣＲ扩增产物，而从其他肠道致病菌提取的模板ＤＮＡ中未扩增出任何ＤＮＡ片段。用这２对引物可以清楚地区分产ＶＴ１、ＶＴ２或ＶＴ１／ＶＴ２的大肠杆菌。ＰＣＲ扩增方法的检测敏感性为３２０ｐｇ全细菌ＤＮＡ，用ｖｔ１引物可以检测出低达３２ｐｇ的全细菌ＤＮＡ。

天然富硒牛奶的实验研究

１６头泌乳期相近的健康荷斯坦奶牛，随机分为４组，Ⅰ组不予处理作为对照，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组每天分别按低、中、高（０．５×１０－６，１．０×１０－６，１．５×１０－６）３个剂量水平于精料中添加亚硒酸钠。实验前及投硒后每隔２０ｄ采集血液、乳汁和毛样１次，检测各项指标。实验观察期８０ｄ。结果表明，奶牛日粮中添加不同水平的无机硒盐，能显著提高试验牛血清、乳汁和被毛中的硒含量，其升高幅度与投硒量成正相关；Ⅳ组牛的奶硒含量达到稳定高台期约需６０ｄ，其平均值为０．０９０ｍｇ／Ｌ，比对照组提高约４倍；而奶中乳糖、乳脂、乳蛋白等成分以及钙、磷、铜、锌、铁等矿物元素无明显变化（Ｐ＞０．０５）。在整个实验观察期，试验牛红细胞数、血红蛋白量等血常规指标，血清钙、磷、锌等矿物元素含量，以及ＧＯＴ、ＣＰＫ、ＡＬＰ、ＵＮ等１０余项肝、心、肾功能指标均无显著性改变（Ｐ＞０．０５），临床表现及产奶量亦无明显变化；血清硒、毛硒含量远低于中毒标准的下限，表明本添加剂连续投服８０ｄ对奶牛无毒副作用。Ⅲ、Ⅳ组牛的淋巴细胞转化率、淋巴细胞数以及γ球蛋白含量增加，表明奶牛免疫机能有所增强。

鸡实验性淋巴细胞性白血病的病理学研究

给３５只１日龄伊莎褐蛋母鸡雏腹腔接种淋巴细胞性白血病病毒ＲＡＶ－１株，应用常规病理技术，对接毒后第１５天、１、２、３、４、５、６个月７个批次的实验鸡做了病理学研究。结果：接毒后１５ｄ和１个月，部分实验鸡发生了成髓细胞性白血病，主要表现为骨髓成髓细胞大量增生，或形成成髓细胞性肿瘤结节，肝、心、肾、法氏囊等内脏器官出现成髓细胞聚集；接毒后２～６个月，实验鸡发生了淋巴细胞性白血病，主要表现为法氏囊髓质淋巴细胞发生转化，成淋巴细胞克隆增殖形成成淋巴细胞克隆增殖灶，在肝、心、肾、脾、腺胃等器官中形成成淋巴细胞性肿瘤结节。据此，可对鸡淋巴细胞性白血病做出病理组织学诊断。

中国八地区旋毛虫繁殖力指数测定的比较

目的为旋毛虫种株的鉴定提供依据。方法对采自我国哈尔滨海伦、哈尔滨五常、长春、沈阳、河南南阳、湖北十堰、云南大理、西安的8株旋毛虫幼虫在小白鼠体内的繁殖力指数作了比较研究。原始虫株除哈尔滨五常、长春株采自大外，其余6株均采自猪。虫株用小白鼠传代。结果8个虫株的繁殖力指数（RCI）存在着差别。河南南阳株的RCI最大（227．50），其次分别为湖北十堰株（226．00）、西安株（225．OQ）、沈阳株（73．66）、哈尔滨海伦株（72．50）、云南大理株（71．50）、哈尔滨五常株（20．00）、最小的长春株（19．00）。并用F检验作了两两比较。结论不同的地理分布区域和不同宿主来源的旋毛虫虫株存在着一定的差别。猪、犬旋毛虫株繁殖力指数差异极显著（P＜0．01）。

鸡糖皮质激素受体阻断模型的建立

采用药物缓释法，给雏鸡皮下注射糖皮质激素（ＧＣ）拮抗剂ＲＵ４８６（５０ｍｇ／ｋｇ），经放射蛋白分析法测得血浆ＲＵ４８６含量可达（２３７．２±８．７４）ｎｍｏｌ／Ｌ，并在该水平上维持３０ｈ；血浆总ＧＣ浓度为（１３８．３±１１．４５）ｎｍｏｌ／Ｌ，较对照雏鸡虽有所升高，但始终低于有效期内血浆ＲＵ４８６水平。在此期间，雏鸡外周血淋巴细胞糖皮质激素受体（ＧＲ）阻断率达６１．５８％±３．４２％，血浆磷脂酶Ａ２未见变化，外周血淋巴细胞程序性死亡减少。从而成功地建立了雏鸡ＧＲ阻断模型，并可维持２４ｈ。给模型雏鸡注射外源性皮质酮，结果显示。

PCR鉴定牛肉方法的建立及初步应用

依据牛１．７０９卫星ＤＮＡ序列设计了１对引物，建立了ＰＣＲ鉴定生、熟牛肉的方法。应用本方法特异地扩增出预期的牛２１８ｂｐＤＮＡ片段，其检测敏感度对生牛肉达３３．６ｆｇＤＮＡ，对熟牛肉和高压牛肉为０．３２ｐｇ。运用该引物均可扩增出水牛、牦牛、奶牛、黄牛肉单一的相同大小的ＤＮＡ条带，而对马、山羊、绵羊、骆驼、鹿、猪等１５种动物肉的ＤＮＡ扩增则呈阴性。扩增片段经ＨａｅⅢ酶切分析确认，所得１２９、７９、１０ｂｐ片段与微机分析结果一致。利用本法对１０３份生、熟牛肉及其制品进行鉴定，检出率为１００％。对各种样品检测，均可在６ｈ内完成。

减蛋综合征病毒末端片段的克隆及细胞内DNA重组

采用９～１０日龄非免疫鸭胚增殖的减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）ＡＡ－２毒株，经差速离心法浓缩纯化后，提取病毒基因组ＤＮＡ。采用碱变性法除去病毒基因组共价结合的末端蛋白（ＴＰ）。用限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ水解纯化的ＥＤＳＶ基因组ＤＮＡ。经低熔点琼脂糖凝胶电泳后，回收Ｃ、Ｄ、Ｅ片段。克隆到ｐＵＣ１９载体的ＨｉｎｄⅢ和ＳｍａⅠ双酶切位点及ＨｉｎｄⅢ位点上，经蓝白斑筛选和单、双酶切鉴定，获得了ｐＵＨＣ、ｐＵＨＤ、ｐＵＨＥ重组质粒，其中ｐＵＨＣ含有末端片段。将ＥＤＳＶＳａｌⅠ水解产生并回收的大片段与ｐＵＨＣ在９５℃水浴中变性，６５℃复性后，用钙离子介导法，共转染５０％～７０％的单层鸭胚成纤维细胞，转染后３６ｈ开始产生细胞病变（ＣＰＥ）。４８ｈ后将病变细胞反复冻融，经尿囊腔接种９～１０日龄鸭胚，回收的尿囊液能凝集鸡红细胞，这种血凝性能被ＥＤＳＶ高免血清抑制，电镜下观察到腺病毒样颗粒。

锯茸止血中药方剂的研制

根据鹿茸的组织结构、生长规律和生理特点，选用白芨、炒蒲黄、紫珠、大黄炭、枯矾、血余炭、冰片等７味中药组成外用锯茸止血方剂。通过药物刺激性试验、抑菌试验、实验动物止血试验以及锯茸止血应用试验，结果表明，该锯茸止血中药方剂外用无刺激性；对大肠杆菌、绿脓杆菌、链球菌、金黄色葡萄球菌的抑制浓度分别为１∶１２８、１∶６４、１∶３２、１∶６４；与目前鹿场常用的锯茸止血药物白藓皮消炎粉、七厘散、腐植酸钠比较，在收取毛桃、二杠茸、三杈茸、怪角茸等不同茸形锯茸试验，止血时间缩短１／２～１／３；锯茸创面感染少，愈合快，对再生茸产量没有明显影响（Ｐ＞０．０５）。

LRH-A_3提高母猪繁殖力效应

５０头二产母猪（约×长）被随机均分为５组，Ⅰ组为空白对照组，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ４个试验组分别于配种当天（０ｄ）及配种后５，１０和０＋１０ｄ每头每次肌注ＬＲＨ－Ａ３（促黄体激素释放激素，促排３号）１５０μｇ，并在注药后当天及５，１０，２０，３０和４０ｄ耳静脉采血，分离血浆；各组取２头分别于注药前及注药后０．５，１，２和４ｈ采血，分离血清，测定其内分泌变化。结果，各试验组ＬＨ峰均在注药后２ｈ，Ⅱ组峰值显著高于其他各组（Ｐ＜０．０５）；配后１０～３０ｄ，各试验组Ｐ４含量显著高于对照组；配后３０ｄ妊娠猪Ｅ１Ｓ含量达峰值，且与产仔数呈正相关（ｒ＝０．４０３２，ｎ＝４６，Ｐ＜０．０１）；产仔数及受胎率以Ⅴ组为最佳。

应激对动物免疫功能影响的研究

应激是机体为应付威胁自身平衡和稳定的各种刺激因素所作出的非特异性防御反应,可产生广泛而复杂的生物学效应。适当的应激反应对机体适应各种刺激因素的作用、维护自身平衡和稳定是有益的,但过强或长期的应激则会给机体带来严重危害。例如严重应激时糖皮质激素分泌过多可引起机体免疫功能严重抑制致使机体抗病能力下降,诱发各类传染病,导致疫苗免疫失败等。一、应激对免疫功能的作用机制Style 认为应激是一种全身性适应反应,主要通过垂体-肾上腺系统的反应来实现。新近研究结果表明,参与应激反应的途径远不止垂体-肾上腺系统。

东北地区4株猪、犬旋毛虫间及与国际标准虫株间的杂交试验

为了给中国旋毛虫虫株的分类提供依据，将分离自中国东北地区的４株猪、犬源旋毛虫虫株（猪２，犬２）分别接种于小鼠，按常规分离出肌幼虫，纯化后，设８个杂交试验组，将每２个虫株的雌、雄幼虫体各５条混合，以食管灌注法接种于小鼠，４２ｄ后扑杀，消化、集虫、计数回收肌幼虫数。同法进行了哈尔滨猪株、犬株与国际标准虫株Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌａｓｐｉｒａｌｉｓ（Ｔ．ｓ）、Ｔ．ｎａｔｉｖａ（Ｔ．ｎａ）之间的杂交试验。结果：猪株间、犬株间杂交结果与对照无差异（Ｐ＞０．０５），而猪、犬株间杂交结果与对照差异极显著（Ｐ＜０．０１）；哈尔滨猪株与Ｔ．ｓ、犬株与Ｔ．ｎａ杂交结果与对照无差异（Ｐ＞０．０５），而猪株与Ｔ．ｎａ、犬株与Ｔ．ｓ杂交结果与Ｔ．ｓ对照差异极显著（Ｐ＜０．０１），表明哈尔滨猪源旋毛虫为Ｔ．ｓ，犬源旋毛虫为Ｔ．ｎａ。

小球隐孢子虫诱导的小鼠肠粘膜免疫应答

给３周龄昆明小鼠接种小球隐孢子虫（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｐａｒｖｕｍ）卵囊后，在测定其卵囊排出情况的同时，分别用间接ＥＬＩＳＡ和免疫组化染色法对不同时期小肠液中特异性ＩｇＡ及肠粘膜固有层中ＩｇＡ分泌型浆细胞进行定性和定量测定。结果显示，卵囊排出呈间歇型，小肠粘膜固有层中ＩｇＡ分泌型浆细胞消长趋势与小肠液中ＩｇＡ消长趋势相一致，并且它们上升的趋势与卵囊排出下降的趋势相一致，表明在抗隐孢子虫感染中，粘膜免疫起着重要作用。

鸡贫血病毒国内分离株的酶切图谱多态性分析

用套式PCR 扩增了鸡贫血病毒(CAV)长度为687 bp 的特异片段,以Hae Ⅲ、Hinf Ⅰ、Hpa Ⅱ分别酶切,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了其限制性酶切片段的多态性。对几株国内外分离株的分析表明,TK5803和山东分离株SJ1、SJ2 应属于Todd 的限制性内切酶酶切图谱多态性分析法(RFLP)分类中的第2 组;吉林JL1 株和哈尔滨CL1 株相同,但与其他任何毒株均不相同,大连DL1 株也不同于任何现有毒株,因而都不能归属于Todd 划分的7 个小组;荷兰弱毒株与目前发现的所有毒株均不同,具有其特征性的酶切图谱。