人白细胞介素6逆转录病毒表达载体的构建

实验以ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔｌｌｋｓ质粒为载体，构建了人白细胞介素６次级克隆ｐＢＩＬ－６。用限制性内切ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＶ消化ｐＢＩＬ－６，分离并回收了ＩＬ－６ｃＤＮＡ片段，并在其平未端加入了ＢａｍＨＩ接头。实验将带有ＢａｍＨＩ粘性末端的ＩＬ－６全基因片段插入到了逆转录病毒载体ｐＺＬＰＮｅｏＳＶ（Ｘ）１的ＢａｍＨＩ位点上，构建了重组质粒ｐＺＬＰＩＬ－６。经对重组予ＤＮＡ的琼脂糖凝胶电泳、限制住内切酶分析和核酸杂交鉴定，筛选出了含有ＩＬ－６ｃＤＮＡ片段及插入方向正确的ｐＺＬＰＩＬ－６。

提高细菌常规检验速度的探讨

目前,我国兽医临床检验室对细菌的诊断,多采用常规检验方法做检测,其最大优点是准确可靠,并且可以获得活细菌。依此,可以做出传染性疾病的最终诊断,还能做药敏试验,供做临床诊断的依据。

聚合酶链反应检测食品中的沙门氏菌

参考沙门氏菌侵袭性基因invA的序列,设计合成一对引物扩增其中一段序列,建立了特异性检测沙门氏菌的PCR方法。引物两端分别加了Bam HI和EcoR I切点,扩增片段大小为300bp。对收集的50个血清型123株沙门氏菌及7种23株非沙门氏菌进行PCR检测,结果仅沙门氏菌有300bp的扩增产物,显示了很强的特异性,为下一步克隆而设计的两个酶切位点对引物的特异性没有影响。经琼脂糖凝胶电泳,PCR的检出极限是10pg染色体DNA和10~2 cfu的细菌。将扩增产物经slot—blot与辣根过氧化物酶(HRP)直接标记的invA基因探针杂交,经增强型化学发光反应(ECL)及化学发光自显影(CPD)检测,可提高检测的敏感性一个数量级,同时增加了特异性。为推广应用,本文试验了8种模拟食品样品对PCR反应的影响,结果除奶酪外,其余都得到较好扩增。对120份污水及食品样品进行检测,该检测系统检出70份阳性结果,检出率高于常规分离。初步应用显示,PCR检测方法敏感、特异、简便、快速,适合于食品卫生检验和临床标本检验的现场应用。