不同剂量^(60)Co-γ射线对TM3细胞的损伤效应

目的:对不同剂量6 0Co-γ射线下TM 3细胞的损伤进行细胞生物学行为、转录层面的分析。方法:TM 3细胞分4组,包括3个6 0Co-γ射线照射组(3、6、9 Gy)及对照组(不照射)。于2 4、4 8、7 2 h观察各组细胞凋亡情况(流式细胞法)、氧化损伤(ELISA)、睾酮合成关键因子(St AR、P450scc、P450c17及3β-HSD)的m R NA表达(实时定量PCR法)。于24、48、72、96、120、144 h,观察细胞增殖情况(MTS法)。结果:第24、72 h,各照射组细胞凋亡率均高于对照组(P<0.008);MTS实验中,第144、120 h,各照射组OD490值均低于对照组(P<0.008);第24,48,72 h,3 Gy组8-OHd G浓度与对照组相比无差异(P>0.008),而9 Gy组高于对照组(P<0.008);在72 h,各照射组St AR、P450scc、3β-HSD m RNA表达均低于对照组(P<0.008),而P450c17的表达在3 Gy组中无显著改变,在6 Gy组中高于对照组,在9 Gy组中低于对照组。结论:6 0Co-γ射线使TM 3细胞凋亡增加、细胞增殖能力下降。6 Gy、9 Gy照射可以导致TM3细胞DNA的氧化损伤。辐照导致TM3细胞中St AR、P450scc、3β-HSD m RNA表达下降。6 Gy的照射使P450c17 m RNA表达上升,9 Gy使之下降。

辐射致雄性小鼠不育症模型的建立及生精细胞损伤的初步分析

目的:构建辐射致雄性小鼠不育症模型,并对模型小鼠的生精细胞损伤进行初步分析。方法:不育症模型构建:65只雄性C57BL/6小鼠随机分为7组,正常对照组(A组)及6组60Coγ照射组,后者包括B组(12 Gy)、C组(6+6 Gy)、D组(10 Gy)、E组(6+4 Gy)、F组(8 Gy)、G组(4+4 Gy)。观察分析小鼠死亡情况(24w)及30、50、70 d受孕率。生精细胞损伤分析:72只雄鼠随机分为4组:正常对照组、6+4 Gy组、4+4 Gy组、6 Gy组。30、50、70 d观察睾丸组织切片(HE染色)并评估其生精功能(Johnsen评分);对PLZF阳性标记的精原干细胞(免疫组化法)计数。结果:A、E、F、G组生存时间较长,B、C组生存时间较短。30、50、70 d,D、E组受孕率均为0%。各照射组Johnsen评分均低于对照组(P<0.05);6+4 Gy组的PLZF阳性细胞计数呈逐渐上升趋势,但均明显低于对照组(P<0.05)。结论:6+4 Gy的60Co-γ射线照射7周龄的C57BL/6雄性小鼠,可以构建不育症模型。模型小鼠的PLZF标记的精原干细胞计数虽然低于对照组,但并非完全消失,提示不育症的原因并非精原干细胞的完全消亡。