抑瘤素表达产物诱导大鼠肝干细胞WB-F344体外分化

目的:抑瘤素是一种肝细胞促分化因子,能够诱导胚胎肝细胞分化为具有各种代谢功能的成熟肝脏。构建以抑瘤素为主的肝干细胞体外诱导微环境,观察其诱导大鼠肝脏来源的干细胞WB-F344体外分化。方法:实验于2002-10/2004-07在解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所完成。①实验材料:表达抑瘤素的CHO-OSM-EGFP细胞株由李晓利等构建。WB-F344细胞由姚鹏博士惠赠。②实验方法:将终浓度为20%稳定表达抑瘤素的中国仓鼠卵巢细胞上清中加入浓度为1U/mL胰岛素、1×10-7mol/L地塞米松,与WB-F344细胞共培养。空白对照组中未加入诱导分化成分CHO-OSM-EGFP细胞上清、胰岛素、地塞米松。③实验评估:采用流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡,光学显微镜观察细胞形态,RT-PCR分析白蛋白及甲胎蛋白基因表达。结果:①诱导后的WB-F344细胞较空白对照组G2/M+S期细胞所占比例明显减低,增殖指数下降约2.8倍,G0/G1细胞所占比例明显增加。②实验组WB-F344细胞形态发生明显改变,由最初的多角形变为长梭性,细胞伸出小管状伪足,核质比例下调,形态趋于成熟大鼠肝脏实质细胞。③RT-PCR结果显示,诱导后WB-F344细胞表达白蛋白,不表达甲胎蛋白。诱导前WB-F344细胞表达甲胎蛋白,不表达白蛋白。结论:在以抑瘤素为主的诱导微环境中,WB-F344细胞表现出生长抑制。