三氯生对离体鹅尾臀腺和人乳腺癌细胞脂肪酸合成酶的抑制作用

背景与目的:研究表明,人乳腺癌早期和病程中癌细胞脂肪酸合成酶(fattyacidsynthase,FAS)呈高效表达。抑制FAS可引起癌细胞凋亡。本研究采用酶促反应动力学实验观察三氯生对离体鹅尾臀腺FAS的影响,建立实验方法,研究三氯生对人乳腺癌SKBr3细胞FAS的抑制作用。方法:运用超速离心和SuperdexPG200层析技术分离纯化鹅尾臀腺FAS,用超速离心技术部分纯化人乳腺癌SKBr3细胞FAS。不同浓度三氯生与FAS相互作用不同时间后,加入底物,用分光光度法观察三氯生对FAS的抑制作用。结果:在鹅尾臀腺组,FAS被纯化为SDS-PAGE电泳单条区带(分子量250kDa),三种浓度三氯生(12.5、25.0、100.0μmol/L)与FAS在催化作用前相互作用0、5和10min,对FAS的抑制率分别为26.40%、28.30%和43.93%(12.5μmol/L);46.22%、50.28%和97.05%(25μmol/L);98.11%、97.75%和97.37%(100μmol/L)。在人乳腺癌SKBr3细胞组FAS被部分纯化,25、50、100和200μmol/L三氯生分别与FAS在催化前相互作用5min,对FAS活性的抑制率分别为20.00%、26.67%、60.00%和100.00%。结论:三氯生对离体鹅尾臀腺FAS和人乳腺癌SKBr3细胞FAS均具有抑制作用;作用强度既依赖于抑制剂浓度,又依赖于抑制剂与酶相互作用时间。