血管内皮生长因子全长抗体在毕赤酵母中的表达与活性鉴定

目的:构建血管内皮生长因子(VEGF)全长抗体表达载体pPICZαA-VH-CH-VL-CL,评价其在毕赤酵母中的表达产物与抗原的结合特性,及其抑制细胞增殖的活性。方法:利用基因合成分别获得VEGF抗体CL和CH序列,分别构建pPICZαA-CH和pPICZαA-CL重组质粒,再利用同尾酶特性构建双启动子表达盒的重组pPICZαA-CH-CL载体,用Westen印迹对其进行表达鉴定后将VH和VL序列插入该载体,获得VEGF的全长抗体表达载体pPICZαA-VH-CH-VL-CL;通过膜筛和ELISA进行菌株筛选,并对VEGF抗体表达阳性菌株进行小量表达和纯化,采用CCK-8法对其抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的活性进行初步评价。结果:获得表达轻、重链的VEGF抗体表达载体,ELISA实验证明pPICZαA-VH-CH-VL-CL具有一定的VEGF抗原结合特性;体外增殖实验表明,该抗体可以以剂量依赖性抑制HUVEC增殖。结论:在毕赤酵母中表达、纯化了具有一定功能活性的VEGF全长抗体,为后续比较研究酵母糖基化改造对VEGF抗体的药效学和药代学的影响提供了基础。

高危型人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA检测在宫颈癌筛查中的意义

目的 比较高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV） E6/E7 mRNA与HR-HPV DNA检测（HC-2、Cervista）方法在宫颈病变中的诊断性能,探讨其在宫颈病变筛查中的作用及意义.方法 选取201 1年10月至2012年12月就诊于解放军总医院妇产科172例妇女,分别做宫颈脱落细胞的液基细胞学检查（TCT）、HC-2、Cervista、HR-HPV E6/E7 mRNA检测,阴道镜检查及宫颈活体组织检查,以组织学证实的高级别宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅱ或更高（Ⅱ＋）为研究终点.结果 HR-HPV E6/E7mRNA阳性率在未见上皮内病变或恶性（NILM）中为37.9％,在意义不明的非典型鳞状细胞（ASCUS）和低度鳞状上皮内病变（LSIL）中为67.9％（36/53）,在非典型鳞状细胞不能排除高度鳞状上皮内病变（ASC-H＋）中为88.5％ （54/61）.HR-HPV E6/E7 mRNA阳性率在CIN I-中为38.6％,在CINⅡ～Ⅲ为77.4％,在SCC中为92.5％.在CINⅡ＋人群中HR-HPV E6/E7 mRNA检测特异度明显高于HC-2、Cervista（61.4％和54.3％,55.7％,P＜0.05）,并具有更高的阳性预测值（75.9％、74.8％及74.6％）.比较HR-HPV E6/E7 mRNA、HC-2和Cervista的ROC曲线,HR-HPV E6/E7 mRNA曲线下面积最大,诊断效能最佳.结论 HR-HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈病变筛查中比HC-2和Cervista检测具有更高特异性,为预测宫颈病变进展及宫颈癌筛查分流提供了新思路.