AP-2α抑制胃癌细胞BGC-823增殖并诱导凋亡的作用机制研究

目的研究核转录因子AP-2α抑制胃癌细胞株BGC-823增殖活性及诱导凋亡的作用和机制。方法收集临床胃癌及其癌旁组织标本30对,免疫印迹及荧光定量法检测AP-2α及Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)基因mRNA含量;生物软件预测AP-2α蛋白与KLF4基因启动子上的转录因子结合位点并进行验证。分别转染pc DH1-AP-2α及pshRNAKLF4到BGC-823细胞,转染后48 h,确定细胞转染效率,免疫印迹法检测胞内AP-2α、KLF4、P53及BCL-2蛋白表达;噻唑蓝(4,5-dimethyl-2-thiazolyl-2,5-diphenyl-2-Htetrazolium bromide,MTT)检测基因干预后各组细胞增殖活性;流式法检测各组细胞凋亡情况。结果所有检测的30对组织标本中,肿瘤中AP-2α表达和KLF4基因mRNA含量均明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P <0. 01,vs癌旁);生物软件预测显示,AP-2α在KLF4基因启动子上存在9个碱基"5'-GCCGCCGGC-3'"的理论结合位点,位点位于转录起始位点前52碱基处,荧光素酶活性检测证实AP-2α可以结合于预测位点并对下游基因的转录进行正调控;细胞转染后48 h,GFP计数显示,细胞瞬时转染效率约为85%,免疫印迹检测数据表明,AP-2α过表达导致KLF4和P53蛋白表达上调,BCL-2蛋白表达下调,而KLF4基因沉默则能够明显减弱AP-2α对KLF4或者P53蛋白表达的影响;细胞转染后24～72 h,pc DH1-AP-2α转染能够明显抑制BGC-823细胞对数期增殖活性,pshRNA-KLF4转染则能够明显减弱AP-2α基因过表达对细胞增殖活性的抑制作用; pc DH1-AP-2α转染细胞后48 h,能够明显导致BGC-823细胞产生凋亡,pshRNA-KLF4转染则能够明显减弱AP-2α过表达产生的诱导细胞凋亡的能力。结论核转录因子AP-2α通过KLF4基因的转录调控对BGC-823细胞的增殖和凋亡产生影响。