miR-146a基因rs2910164 G/C多态性与miR-146a异常表达与胃癌风险相关性的研究

目的探讨miR-146a基因单核苷酸多态位点rs2910164 G/C是否影响miR-146a的表达并改变其对胃癌的易感性。方法选取53例胃癌患者和6株胃癌细胞株(AGS、BGC-823、HGC27、MKN-28、MKN-45和SGC-7901),采用Taqman定量PCR检测miR-146a的表达,构建miR-146a过表达细胞模型,探究miR-146a过表达对胃癌细胞AGS生长的影响,然后对417例胃癌患者和420名无癌对照者进行病例对照研究,检测miR-146a基因rs2910164位点的等位基因和基因型频率,基因分型采用Taqman等位基因判别法;用Taqman对65例已知基因型胃癌患者的成熟和pri-miR-146a转录本进行定量分析。结果miR-146a在53例胃癌和6种胃癌细胞系中表达下调,miR-146a的过表达通过抑制AGS细胞G1/S期转变抑制胃癌细胞生长;病例对照研究结果显示,与GG基因型受试者相比,携带GC/CC基因型的受试者患胃癌的风险显著降低;与GG基因型相比,GC/CC基因型miR-146a G/C SNP显著提高成熟miR-146a水平。结论miR-146a的下调在胃癌发生中发挥重要作用,miR-146a基因rs2910164多态位点可通过影响成熟miR-146a的加工过程而降低胃癌风险。

超保守长链非编码RNA uc.77在肺癌中的表达及其调控作用

目的探讨超保守长链非编码RNA uc.77(uc.77)在肺癌中的表达及其分子机制。方法肺癌组织及癌旁正常组织来自2014—2016年解放军南部战区总医院确诊肺癌并行手术的61例肺癌患者。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肺癌细胞株中uc.77的相对表达水平,同时在61对肺癌组织及其癌旁正常组织中验证其表达趋势,分析uc.77的表达与肺癌患者临床病理特征的关系。转染uc.77 siRNA敲低uc.77的表达,采用细胞计数试剂盒8法和克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期变化。将转染uc.77 siRNA的肺癌H1299细胞注射至BALB/c裸鼠构建荷瘤模型,观察uc.77对肿瘤生长的影响,对肿瘤组织进行HE染色和免疫组化检测,qRT-PCR和Western blot法检测p21 mRNA和蛋白表达水平。结果肺癌细胞系95-D、H1299、A549、H460、H446和16HBE-T中uc.77的表达水平高于正常支气管上皮样细胞16HBE(均P<0.05);61例肺癌组织中uc.77的表达水平高于旁正常组织(P<0.001)。肿瘤体积、有无淋巴结转移、TNM分期与uc.77的表达有关(均P<0.05)。转染uc.77 siRNA 48和72 h后,siRNA-1组H1299、95-D、16HBE-T细胞A值低于各自对照组和siRNA-NC组(均P<0.05)。转染uc.77 siRNA-1后,H1299 siRNA-1组细胞G0/G1期细胞比例[(71.86±3.46)%]高于H1299对照组[(47.62±5.48)%]和H1299 siRNA-NC组[(61.38±5.62)%,均P<0.05];H1299 siRNA-1组细胞S期细胞比例[(14.99±3.61)%]低于H1299对照组[(34.95±7.05)%]和H1299 siRNA-NC组[(23.75±5.87)%,均P<0.05]。H1299 siRNA-1组细胞凋亡率[(4.90±1.80)%]高于H1299对照组[(3.30±0.80)%]和H1299 siRNA-NC组[(2.80±1.20)%,均P<0.05]。H1299 siRNA-1组细胞克隆形成率[(19.20±2.00)%]低于对照组[(32.60±2.00)%]及siRNA-NC组[(34.40±1.00)%,均P<0.05]。H1299 siRNA-1组小鼠肿瘤体积低于H1299对照组和H1299 siRNA-NC组(均P<0.05),H1299 siRNA-1组小鼠肿瘤重量低于H1299-对照组和H1299 siRNA-NC组(均P<0.05)。Ki-67免疫组化结果显示,H1299对照组和H1299 siRNA-NC组肿瘤细胞增长标志物Ki-67呈阳性,而H1299 siRNA-1组呈弱阳性。qRT-PCR检测结果显示,H1299 siRNA-1组细胞中p21的mRNA表达水平(2.57±0.45)高于对照组(1.00±0.00,P=0.001)和H1299 siRNA-NC组(1.52±0.37,P=0.009)。Western blot结果表明,H1299 siRNA-1组细胞p21蛋白表达水平升高。结论超保守长链非编码RNA uc.77在肺癌细胞株和肺癌组织中均表达升高,敲低uc.77的表达可抑制肺癌细胞增殖和肿瘤生长,提示uc.77在肺癌中发挥促癌基因的作用,uc.77可能是肺癌的潜在治疗靶标。