不同方法制备猪脱细胞真皮基质及创面移植的实验研究

目的 比较两种方法制备的猪脱细胞真皮基质分别与自体刃厚皮复合移植修复大鼠全层皮肤缺损的效果。方法 使用 Dispase /Triton X 10 0 (中性蛋白酶 /曲拉通 )和高渗盐水 /十二烷基硫酸钠 (SDS)两种方法去除猪表皮及真皮中的细胞成分 ,分别得到猪脱细胞真皮基质 和 。 6 3只 SD大鼠背部全层皮肤缺损分别使用猪脱细胞真皮基质 +自体刃厚皮及猪脱细胞真皮基质 +自体刃厚皮覆盖 ,术后观察移植物成活率和植皮区收缩率 ,同时取移植物进行组织学观察 ,并与单纯自体刃厚皮移植相比较。结果 两种方法制备的猪脱细胞真皮基质分别与自体刃厚皮复合移植的移植物成活率和植皮区收缩率差异无显著性 ,组织学观察显示复合皮上皮化良好 ,胶原纤维排列有序 ,基底膜结构完整。两复合皮组术后第 6周移植物成活率与自体刃厚皮组比较差异均无显著性 ,术后第 4周开始两复合皮组移植物收缩率明显降低。结论 两种方法制备的异种脱细胞真皮基质与自体皮复合移植都能很好地修复全层皮肤缺损 ,改善创面愈合质量。

生长激素对烧伤猪蛋白质氧化率及非蛋白呼吸商的影响

目的探讨烧伤后应用生长激素治疗对蛋白质、脂肪、糖三大营养物质代谢的影响。方法将16只背部35%总体表面积度烧伤小型猪随机分为生长激素治疗组和对照组,伤前及伤后24、48、96h和7、12d用代谢车测定蛋白质氧化率及非蛋白呼吸商(NPRQ)的变化。结果小型猪烧伤后蛋白质氧化率缓慢升高,NPRQ明显降低,生长激素治疗组NPRQ的降低幅度明显高于非生长激素治疗组,但两组蛋白质氧化率比较差异无显著性。结论烧伤后应用生长激素对机体物质代谢的调节方式主要为内源性脂肪分解增强,对蛋白质的分解无明显影响,但加重了糖的利用障碍。

高渗溶液在烧伤治疗中的应用

严重烧伤病人的临床救治工作所面临的第一道难关就是休克.烧伤休克是由于体液渗出所致的渐进性血容量减少所致,这种减少有一个时间过程,随烧伤面积、深度和机体状况不同而有长短,大面积烧伤病人伤后1h就有发生休克的可能.因此烧伤后及时快速补液,就成为防治休克的最主要措施.近年来随着休克复苏水平的提高,休克的发生率日趋降低,直接死于休克者显著减少,但这并不意味着休克问题已经解决.烧伤后48h之内为休克期,休克期复苏不良,则低灌注给组织造成缺血乏氧,各脏器功能发生不同程度的损害,至感染期出现内脏并发症的机率就显著增加,甚至发展为多脏器功能不全综合征(MODS)而危及伤病员生命.因此,休克复苏效果的好坏,直接影响到烧伤全程治疗的转归.

卡巴胆碱对肠部分缺血-再灌注损伤所致全身炎症反应和多器官功能障碍的影响

目的观察肠道内给予卡巴胆碱对肠部分缺血-再灌注(I/R)损伤诱发全身炎症反应和多器官功能障碍的影响及其机制.方法大耳白兔75只,随机分为肠部分I/R组(n=25)、卡巴胆碱治疗组(n=25)和假手术组(n=25).阻断肠系膜上动脉(SMA)血流50%,并维持4 h,造成肠部分I/R损伤.卡巴胆碱治疗组于SMA阻断后1 h经肠道内注入质量分数为3%的卡巴胆碱溶液(3 μg/kg);假手术组处理同肠部分I/R组,但不阻断SMA.各组于SMA阻断前及阻断后2、4、6、8、24、48和72 h取动脉血,采用放射免疫法测定血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,同时观察脏器功能及病理形态学改变.结果肠部分I/R损伤后,血浆丙氨酸转氨酶(ALT)、血肌酐(SCr)、肌酸激酶同工酶(CKMB)、TNF-α水平均显著升高(P均<0.05);心、肝、肺等脏器显示严重病理损害.肠道缺血期给予卡巴胆碱后,血浆内ALT、SCr、CK-MB和TNF-α水平显著降低(P均<0.05),术后24～72 h心、肺、肝、小肠病理学损伤明显减轻.结论肠道内给予卡巴胆碱能减轻肠部分I/R损伤引起的机体炎症反应和病理损害,改善和保护脏器功能.

卡巴胆碱对肠缺血-再灌注大鼠外周血白细胞凋亡及细胞因子表达的影响

目的 观察拟胆碱药卡巴胆碱对肠缺血再灌注大鼠外周血淋巴细胞和中性粒细胞凋亡及细胞因子 m RNA表达的影响 ,探讨拟胆碱药的抗炎作用机制。方法 36只大鼠随机分为手术对照组、肠缺血 1h组、肠缺血 1h后再灌注 1h和 2 h组、卡巴胆碱 +肠缺血 1h组及卡巴胆碱 +肠缺血 1h后再灌注 2 h组。复制大鼠肠缺血再灌注模型 ;肠缺血前 10 m in经肠袋给予卡巴胆碱。检测不同时间点大鼠外周血白细胞计数及分类、淋巴细胞和中性粒细胞凋亡率及白细胞中细胞因子 m RNA表达水平。结果 肠缺血 1h,大鼠外周血白细胞计数减少 ,淋巴细胞比例增加 ,中性粒细胞比例减少 ,再灌注后上述指标均呈反向变化 ;卡巴胆碱可抑制肠缺血引起的外周血淋巴细胞凋亡率的增加 ,但增加中性粒细胞的凋亡率。外周血白细胞中致炎细胞因子肿瘤坏死因子 α(TNFα)和抗炎细胞因子白细胞介素 10 (IL 10 )表达在肠缺血 1h时均增加 ,但再灌注后 2h,IL 10、IL 4和 γ干扰素 (IFNγ)表达则明显减少 ,与 TNFα表达明显增加的趋势相反 ;卡巴胆碱可改善这一变化。结论 卡巴胆碱能减少肠缺血时淋巴细胞的凋亡 ,调节肠缺血再灌注时外周血白细胞中致炎和抗炎细胞因子表达失衡 ,在防治失控炎症反应、脓毒症和多器官功能障碍综合征中具有潜在临床应用价值。

丙酮酸乙酯对烫伤延迟复苏大鼠细胞免疫功能的影响

目的观察丙酮酸乙酯(EP)对烫伤延迟复苏大鼠细胞免疫功能的影响,并探讨其作用机制.方法采用大鼠30%总体表面积Ⅲ度烫伤模型,103只大鼠随机分为正常对照组(n=7)、假烫伤组(n=32)、烫伤组(n=32,伤后6 h腹腔内注入40 ml/kg生理盐水)和EP(3.23 mg/ml)干预组(n=32,伤后6 h腹腔内注入40 ml/kg EP液),分别于伤后1、3、5和7 d活杀,检测脾淋巴细胞增殖能力、白细胞介素-2(IL-2)生成及白细胞介素-2受体(IL-2R)表达.结果烫伤延迟复苏后1～7 d,脾淋巴细胞丝裂原刺激的增殖反应明显受抑制(P均<0.05).烫伤后1～5 d IL-2生成明显减少(P均<0.05),且烫伤后1和3 d IL-2R的表达显著降低(P均<0.05).EP干预能够明显恢复烫伤后1～7 d脾淋巴细胞的增殖能力(P均<0.05),伤后1、3和5 d,IL-2的生成显著增加,但对IL-2R的表达无影响(P均>0.05).结论 EP能显著增加脾淋巴细胞的增殖能力和IL-2的产生,从而有效改善烫伤延迟复苏后细胞免疫功能障碍.

移植超薄表皮片中成熟细胞逆向分化为表皮干细胞的现象

目的:观察移植超薄表皮片中成熟表皮细胞的分化及分布状态,以及其向表皮干细胞逆分化现象在创面修复过程中的存在。方法:采用荧光标记和免疫组织化学方法,检测解放军空军总医院2004-11/2005-05经环切术切取的成人的包皮12例,用中性蛋白酶消化获得表皮片,反复冲洗使基底层干细胞脱落。在一部分行苏木精-伊红、免疫组织化学染色的同时,另一部分皮片用DAPI标记后移植于由北京协和动物中心提供的12只裸鼠全层皮肤缺损的创面,于第4和7天取材制作冰冻切片,行免疫组化染色,荧光显微镜观察创面修复过程中表皮细胞角蛋白19、角蛋白14、角蛋白10的分布情况与表达特征。结果:①苏木精-伊红染色可见未标记移植的表皮片示有正常的层次结构,但标记移植的皮片组织学观察显示细胞层次有松弛、紊乱的迹象。②免疫组化染色及荧光显微镜示未标记移植前的皮片颗粒层以下几乎未见角蛋白19阳性细胞而有少量角蛋白14阳性细胞和大量角蛋白10阳性细胞,而标记移植的皮片有孤立成团同时发蓝-红双荧光的角蛋白19阳性细胞,且角蛋白14阳性细胞明显增多。③这些现象在移植后的第4天最为显著。结论:在超薄表皮片移植中显示有成熟表皮细胞向表皮干细胞方向的逆分化,起到了维持皮片活力和参与创面修复的作用。