白血病相关蛋白16亚细胞定位的研究

目的:研究白血病相关蛋白LRP16基因编码蛋白在真核细胞内的亚定位分布。方法:将LRP16全长基因序列(长型/L型)与LRP16天然缺失体编码序列(短型/S型)融合到绿色荧光蛋白pEGFP真核表达载体的N端,转染鼠成纤维NIH3T3、人乳腺癌MCF-7细胞株,观察绿色荧光的分布;采用细胞免疫荧光染色(CIF)方法和激光共聚焦显微镜进一步鉴定内源性LRP16蛋白在上皮起源性肿瘤乳腺癌MCF-7、宫颈癌Hela,人胚肾293T细胞株的亚细胞分布。结果:绿色荧光融合蛋白LRP16-pEGFPL型在NIH3T3细胞系中以细胞浆型分布为主,在MCF-7中以细胞核型分布为主,绿色荧光融合蛋白LRP16-pEGFPS型在真核细胞内呈核浆均匀分布;CIF染色结果表明内源性LRP16(长型/L型)蛋白在MCF-7、Hela和293T细胞中分别亚定位于细胞核。结论:LRP16是在上皮起源性肿瘤细胞中作为核因子参与其进展,野生型LRP16(长型/L型)前82个氨基酸在决定LRP16亚定位方面发挥关键作用。

无精和严重寡精症中无精子症因子基因的初步研究

目的：研究无精子症因子基因与无精症的关系。方法：利用聚合酶链反应对７４例原发无精和严重寡精患者进行ＹＲＲＭ基因的扩增检查，同时利用男性性别决定的ＳＲＹ基因片段作为内参照系统。结果：在检查的７４例病例中，共有４例的ＹＲＲＭ基因位点没有扩增信号。结论：提示这些个体带有ＹＲＲＭ的缺失异常。

YRRM基因表达的初步研究

发现和确认无精子症因子(azoospermia factor,AZF)基因,是研究特异控制精子发育基因研究领域的热点。随着细胞遗传和分子遗传学的发展,逐步认识到相关的基因位于Y染色体长臂。1993年,英国学者Ma K,首次分离和克隆了一个DNA片段,证实它们是睾丸特异表达,定位于Y染色体长臂,并在无精子病人中发现涉及了该片段的缺失,认为这一基因片段是AZF基因的有力候选基因。

中国维吾尔族和苗族人群线粒体DNA9-bp缺失频率

目的 :了解了中国新疆维吾尔族和湖北恩施地区苗族线粒体DNACOII tRNALys基因间小非编码区Ⅴ串联重复序列 9 bp缺失频率。 方法 :应用PCR及DNA序列分析技术。结果 :研究发现 ,80例新疆维族人中有 2例 (2 5 % )有mtDNA 9 bp缺失 ;4 7例湖北恩施地区苗族人中有 5例 (10 6 % )有mtDNA 9 bp缺失。 结论 :研究结果表明中国少数民族的维族、苗族人群中存在mtDNA 9 bp缺失多态性 。

口腔颌面部恶性肿瘤尿激酶及其受体的基因表达和临床意义

目的：探讨ｕＰＡ及ｕＰＡＲ与口腔颌面部恶性肿瘤浸润、转移的关系。方法：应用ｃＤＮＡ－ｍ ＲＮＡ斑点杂交技术定量检测３０ 例口腔颌面部恶性肿瘤ｕＰＡ和ｕＰＡＲｍ ＲＮＡ表达水平。结果：癌组织ｕＰＡ和ｕＰＡＲｍ ＲＮＡ含量高于相应正常组织（Ｐ＜ ０．０１），伴有淋巴结转移癌组织ｕＰＡ 和ｕＰＡＲ高于无淋巴结转移者（Ｐ＜ ０．０１，Ｐ＜ ０．０５），ｕＰＡ、ｕＰＡＲ表达水平与淋巴结转移关系密切（ｒ＝ ０．４１ Ｐ＜ ０．０１，ｒ＝ ０．３１ Ｐ＜ ０．０５），与Ｔ分期、分化程度及肿瘤类型无明显关系。结论：ｕＰＡ 和ｕＰＡＲ是促进口腔颌面部恶性肿瘤转移的重要因素，其表达水平可作为肿瘤转移的参考指标。

应用PCR－SSCP银染法检测结肠癌组织中p53基因突变

应用ＰＣＲ－单链构象多态分析（ＳＳＣＰ）银染技术分析了２１例结肠癌和正常结肠粘膜组织ｐ５３基因第五～第八外显子。发现了９例（４３％）的结肠癌组织出现了反映ｐ５３基因突变的异常条带。结果显示ｐ５３基因的突变与结肠癌的发生和发展有关。应用非同位素的银染方法，能简单、快速检测基因多态性，并避免同位素的危害。

检测人巨细胞病毒的免疫-PCR方法的建立

目的：依据免疫－ＰＣＲ基本原理，建立检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）活动性感染的免疫－ＰＣＲ方法。方法：我们建立的免疫－ＰＣＲ方法与酶联免疫ＥＬＩＳＡ不同之处是，用ＰＣＲ扩增生物素化线性ｐＢＶ２２０ＤＮＡ代替ＥＬＩＳＡ的酶催化底物，经琼脂糖凝胶电泳溴化乙锭染色观察分析扩增产物特异条带，判断结果。结果：用本法检测ＨＣＭＶ的敏感性高于ＥＬＩＳＡ法１０３～１０５倍，可检测到５个感染ＨＣＭＶ细胞；而检测ＨＳＶ－１、ＶＺＶ、ＢＫＶ均呈阴性反应，显示良好特异性。结论：建立的免疫－ＰＣＲ方法具有高度敏感性，可用于检测微量ＨＣＭＶ抗原。

雌激素及其拮抗剂对胃癌细胞系SGC-7901中尿激酶及其受体基因表达的影响

目的：探讨雌激素与其桔抗剂对肿瘤细胞ｕＰＡ及ｕＰＡＲ基因表达的调控作用。方法：用雌二醇及其桔抗剂三苯氧胺（他莫昔芬）处理体外培养的胃癌细胞系ＳＧＣ－７９０１。以ｃＤＮＡ—ｍＲＮＡ斑点杂交分析受处理的肿瘤细胞ｕＰＡ及ｕＰＡＲｍＲＮＡ表达水平。结果：胃癌细胞经雌二醇处理，ｕＰＡ及ｕＰＡＲｍＲＮＡ表达均增高，分别是对照组的２．９和２．１倍；而雌二醇加三苯氧胺联合处理胃癌细胞，ｕＰＡ及ｕＰＡＲｍＲＮＡ表达有回降，分别比雌二醇处理组下降４３．４％、５３．４％。结论：提示雌激素参与胃癌细胞ｕＰＡ及ｕＰＡＲｍＲＮＡ表达调控。

检测人巨细胞病毒抗原的原位免疫PCR技术

目的 :建立用于诊断HCMV活动性感染的原位免疫PCR方法。方法 :HCMVAD16 9株感染的人胚肺成纤维细胞或先天畸形胎儿肾组织石蜡切片 ,依次加入抗HCMV单抗、生物素化二抗、链霉亲合素以及作为指示元件的生物素化DNA ,随后进行原位PCR扩增 ,经酶显色反应判断结果。结果 :应用本法检测HCMV感染的细胞可于感染后 8h清晰检出阳性信号 ;检测先天畸形胎儿肾组织HCMV感染 ,阳性率显著高于免疫组化法。结论 :本方法具有敏感性高、特异性好及精确组织定位等特点 。

检测人巨细胞病毒的免疫PCR技术的建立

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)是一种广泛传播的病毒,初次感染后,病毒潜伏存在于体内,但可被激活出现复发感染。诊断HCMV近期活动性感染,主要依靠实验室检测。传统的病毒分离、血清中抗CMV-IgM及CMV抗原等的检测,敏感性差,易漏诊;核酸杂交、PCR等方法虽然敏感性高,但既可检出复制的病毒DNA,也可检出潜伏。

无精子症患者YRRM基因的研究

目的探索无精子症因子基因的候选基因之一ＹＲＲＭ基因在无精子症患者中的异常，了解中国人群的ＹＲＲＭ基因的形式。方法利用特异扩增ＹＲＲＭ基因的引物，进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）。用睾丸提取的总ＲＮＡ进行反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）。对部分ＹＲＲＭ基因的片段进行ＤＮＡ序列分析。结果７４例无精子症患者中，４例未扩增出ＹＲＲＭ基因片段（５．４４％），ＲＴ－ＰＣＲ显示仅睾丸出现５００ｂｐ的ＤＮＡ条带，序列分析结果表明中国汉族人群的ＹＲＲＭ的核酸序列同ＹＲＲＭ１型。结论ＹＲＲＭ基因的异常与无精子症密切相关，ＹＲＲＭ基因为睾丸特异表达，中国人群ＹＲＲＭ的形式为ＹＲＲＭ１型，其ＤＮＡ序列组成完全同ＹＲＲＭ１型。

原发男性不育患者精蛋白基因的初步研究

为了解男性不育患者精子发育中组蛋白到精蛋白的转换机理、转换障碍与不育的关系，从８７例原发不育患者和９例正常可育者精液标本中，提取生殖细胞核碱性蛋白，进行醋酸尿素凝胶电泳。结果显示８例精蛋白异常，异常率９．１９％，全部涉及精蛋白２组分的缺乏。异常与正常个体相比，精蛋白占核碱性蛋白比例由５５．９１±７．４％下降为４．１８±２．２３％，说明精蛋白的异常，尤其是精蛋白２的缺乏，可能导致精蛋白的功能缺陷，是造成原发男性不育原因之一。对精蛋白异常不育和正常可育的２０名ＤＮＡ标本（８例精蛋白异常不育个体，８例精蛋白正常不育个体，４例正常可育）．以Ｐ２的基因探针进行了ＤＮＡ杂交，用特异扩增Ｐ１、Ｐ２、ＴＰ２编码区的引物对全部ＤＮＡ标本进行了ＰＣＲ扩增和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析，结果未见突变、插入和缺失等异常。初步说明精蛋白异常者在这三个编码区内ＤＮＡ的结构异常可能性极小。由此提示，进一步的深入研究工作，应注重编码区旁侧调控序列以及考察转录、翻译及翻译后加工各个环节的影响。

AZF基因的研究

ＡＺＦ基因的研究赵亚力谷志远作者单位：１００８５３北京，解放军总医院分子生物学研究室人们一直致力于发现和确认控制精子生成或称为无精子症因子（Ａｚｏｏｓｐｅｒｍｉａｆａｃｔｏｒ，ＡＺＦ）的基因。随着对精子发育的细胞遗传学和分子生物学等领域的深入研究，逐...

分析实体瘤相关基因DNA拷贝数改变的比较基因组杂交研究进展

分析实体瘤相关基因ＤＮＡ拷贝数改变的比较基因组杂交研究进展赵亚力，谷志远比较基因组杂交（ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｇｅｎｏｍｉｃｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＣＧＨ）主要应用于肿瘤分子细胞遗传学分析的一种新的有软的方法。通过ＣＧＨ，能够了解肿瘤标本中某些相...

原位PCR技术检测石蜡包埋脑组织中人巨细胞病毒DNA

应用原位聚合酶链反应（ＩＳＰＣＲ）技术检测了２５例尸检畸形胎儿石蜡包埋脑组织中人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ，并与普通ＰＣＲ及原位杂交（ＩＳＨ）进行了比较。ＩＳＰＣＲ、ＰＣＲ及ＩＳＨ检测阳性率分别为４４％，３６％及２０％。与ＩＳＨ相比较，ＩＳＰＣＲ不仅检出阳性率高，而且信号强度增强。研究结果提示，ＩＳ－ＰＣＲ是诊断ＨＣＭＶ感染的快速、敏感、特异的实用方法。

应用通用引物聚合酶链反应技术检测结肠癌组织中人乳头瘤病毒DNA

应用人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）通用引物介导的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１５例结肠癌石蜡包埋病理组织切片中ＨＰＶＤＮＡ，其中１０例呈阳性扩增（阳性率为６６．７％）。１２例正常结肠组织经上述ＰＣＲ检测均呈阴性反应。阳性扩增产物经核酸斑点杂交进行ＨＰＶ型别分析，ＨＰＶ１６型占４例（４０．０％），１８型１例（１０．０％），１６／１８型５例（５０．０％），未检出其他ＨＰＶ型别。表明ＨＰＶ可能对结肠癌的发生具有病原相关性。

YRRM基因表达的组织特异性

人类的精子发育是一复杂而漫长过程，从原始的精原细胞发育为成熟的精子至少经过３次有丝分裂和２次减数分裂，整个过程约持续６５天。对于直接导致不育的无精子症，多年来一些学者从分子遗传学判断其必有分子基础，即某个或某几个特异控制精子发育的基因发生了结构异常或...