不同血管损伤法对小型猪实验性髂动脉内膜增生病变形成的影响

目的：观察实验性内膜损伤后的增生性改变，探索制作适合于介入性治疗的具有高度狭窄病变的动物模型。方法：２１头贵州小型猪分高血脂球囊组、正常血脂球囊组和钽丝支架组，通过球囊扩张和钽丝支架移置法损伤其髂动脉。结果：１２周后病理检查显示：三组管腔狭窄率≥Ⅲ级者分别为４６．９％、２０．８％和４２．９％，前两组间比较，Ｐ＜０．０５；球囊损伤后共有４例发生急性血管闭塞，而钽丝支架组无１例。新生内膜组织主要由增生的平滑肌细胞组成。结论：（１）两种方法均可产生严重程度的内膜增生病变，球囊损伤后易出现急性血管闭塞；（２）病变与人类典型动脉粥样硬化（ＡＳ）构成有明显的差异。

中国小型猪阻塞型睡眠呼吸暂停模型的建立

目的 建立一个稳定、可靠、与临床病理状态接近的阻塞型睡眠呼吸暂停 (OSA)动物模型。方法 中国小型猪 10头 ,分为A、B两组 ,A组采用凝胶外部注射法制作模型 ;B组采用凝胶内部注射法制作模型。手术过程中及结束后 ,用多导睡眠仪检测脑电图、口鼻气流、鼾声、胸式呼吸、腹式呼吸、血氧饱和度。 1周后复查多导睡眠图。 2周后行CT检查 ,3个月后处死动物行病理形态学检查。结果 手术结束后两组动物均出现呼吸暂停或低通气及血氧饱和度下降 ,组间相比呼吸暂停时间、呼吸暂停指数、血氧饱和度无明显差别。 1周后复查 ,两组呼吸暂停时间、呼吸暂停指数均较术后当天明显增加 ,血氧饱和度明显下降 ,P <0 0 5 ,B组上述指标的变化更为明显 ,P <0 0 5。CT检查结果 :A组咽腔有一定程度的狭窄 ;B组咽腔呈明显狭窄状。病理形态学结果 :光镜下可见呈交联状的凝胶 ,表面有一层由排列整齐的胶原纤维和弹性纤维形成的结缔组织薄膜 ,胶原纤维和弹性纤维向凝胶内部生长。结论 凝胶注射法建立的慢性阻塞型睡眠呼吸暂停模型稳定、可靠、重复性好 ,与临床病理状态接近 ,可进行长期的、动态的研究 ,可广泛应用于睡眠呼吸暂停综合征发病机制、病理生理及治疗学等领域的研究 ,相比而言 ,内部注射法更优。

三个品系小型猪Ⅱ型糖尿病模型的比较研究

目的比较三个品系小型猪对高糖高脂饲料诱发Ⅱ型糖尿病模型的敏感性，为我国小型猪在Ⅱ型糖尿病研究中的应用提供基础资料。方法4～5月龄巴马小型猪、五指山小型猪和中国农大小型猪各6头，以4头中国农大小型猪为对照，同步开展高糖高脂饲料喂养试验，试验周期8个月。每月称1次体重，测定血糖、血清胰岛素含量，每2个月进行1次静脉葡萄糖耐量试验（IVGTT），测定脂质代谢相关指标。结果巴马小型猪和五指山小型猪对高糖、高脂饲料比较敏感，在饲喂5～6个月后，开始出现糖代谢异常，表现为显著肥胖、血清胰岛素升高和胰岛素敏感性下降。至实验后8个月，巴马小型猪和五指山小型猪各有1头发展为糖尿病，分别有3头和2头出现糖尿病前期症状。中国农大小型猪对高糖高脂饲料诱发糖尿病相对不敏感，实验期间空腹血糖水平、血清胰岛素含量、胰岛素敏感指数和IvGlTr一直无显著变化，仅在实验后7个月开始表现肥胖，8个月出现胰岛素敏感性减低。三个品系小型猪在高糖高脂饲喂后，血脂相关指标（TG，CHO，HDL-C，LDL-C）普遍升高，以巴马小型猪升高幅度最大。结论巴马小型猪和五指山小型猪对高糖、高脂饲料诱发Ⅱ型糖尿病比较敏感，品系内个体差异较大。中国农大小型猪相对不敏感。这一结果为进一步的Ⅱ型糖尿病相关基因分析和高敏感家系培育研究提供了基础资料。

开胸与微创方法制备小型猪急性心肌梗死模型的对比研究

目的观察开胸结扎冠状动脉法(简称开胸法)与微创冠状动脉内球囊封堵法(简称微创法)制备心肌梗死(MI)模型的差异。方法选用贵州小型猪,分别应用开胸法与微创法,阻断冠状动脉左前降支中段血流,造成心肌梗死,比较观察两种方法建立心肌梗死模型的异同。结果两种方法均可以形成心肌梗死模型,病理检查无显著差异。开胸法造模后出现通气性呼吸功能障碍,心肌酶升高水平与临床患者心肌梗死衍变有差异。微创法应用造影剂可能会有一过性肾功能损伤。结论微创法对实验结果干扰小,与临床条件相近,是一种更好的造模方法。

不同亮度环境下犬荧光留置针静脉穿刺的应用效果研究

目的通过动物实验验证在暗环境下应用荧光静脉留置针进行静脉穿刺的应用效果。方法模拟不同光亮度环境,应用荧光静脉留置针和普通静脉留置针分别对犬静脉进行静脉穿刺,对比穿刺成功率和穿刺时间。结果在晨昏光亮度组和低光亮度组应用2种静脉留置针进行穿刺的成功率和穿刺时间差异均有显著性(P<0.05)。结论在晨昏光亮度和低光亮度的环境下使用荧光静脉留置针进行静脉穿刺具有提高穿刺成功率、缩短穿刺时间的优点。

开胸与微创方法制备小型猪急性心肌梗死模型的对比研究

目的观察开胸结扎冠状动脉法(简称开胸法)与微创冠状动脉内球囊封堵法(简称微创法)制备心肌梗死(MI)模型的差异。方法选用心脏及冠状动脉系统的解剖生理特点与人相似的中国小型猪,分别应用开胸法与微创法,阻断冠状动脉血流,造成心肌梗死。结果两种方法均可以形成心肌梗死模型,病理检查无显著差异。开胸法造模后出现通气性呼吸功能障碍,心肌酶升高水平与临床患者心肌梗死衍变有差异。微创法应用造影剂可能会有一过性肾功能损伤。结论微创法对实验结果干扰小,与临床条件相近,是一种更好的造模方法。

我国特有三个小型猪品系PPARα基因的多态性分析

目的分析我国特有三个小型猪品系巴马小型猪、五指山小型猪,中国农大小型猪过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)基因exon5-intron5这段序列的单核苷酸多态性(SNPs)分布特点,为我国小型猪在糖尿病和代谢性疾病的研究中提供基础资料。方法提取三个品系小型猪血液基因组DNA,以基因组DNA为模板,应用多聚合酶链式反应(PCR)技术在合成的特异性引物引导下扩增,将PCR产物纯化,然后进行测序,再将测序结果在NCBI中进行BLAST比对分析。结果测序结果显示:在PPARα基因exon 5-intron 5中存在12个单核苷酸位点,分别为83G→A,133C→T,134G→T,141C→G,146T→G,150T→G,179C→A,196C→T,205C→T,212C→T,218T→C,219T→C,其中只有83G→A这一单核苷酸突变位点位于编码区内,密码子TCA→TCG,氨基酸为Ser163Ser。结论在三个品系小型猪中PPARα基因多态位点的分布存在差异,表明小型猪的品种不同多态情况不同。

猕猴异体子宫移植技术的应用研究

目的探讨猕猴异体子宫移植活体捐赠手术技巧应用,为下一步人体子宫移植临床试验提供实验数据。方法选用性成熟、月经规律的雌性猕猴2只,根据血型和体重选取供体1例和受体1例,将切除的供体子宫及髂血管给予器官保存液冷保存、灌注后原位移植到受体盆腔,供体的髂内动脉、髂外静脉与受体的髂外动、静脉使用端-侧吻合法间断吻合,术中根据移植血管的搏动、子宫的色泽判断移植是否成功,术后给予他克莫司、环孢霉素、泼尼松三联免疫抑制剂预防移植免疫排斥。结果受体猕猴移植双侧髂血管吻合成功,可触及移植血管搏动,移植子宫恢复血流灌注后子宫颜色由灰白逐渐转为暗红。受体动物于子宫移植术后28d死亡,评估死亡原因可能为慢性衰竭。结论猕猴是适用于异体子宫移植研究的大型动物模型,使用髂内动脉与受体的髂外动脉进行端-侧吻合法吻合是可行的,三联免疫抑制剂可有效预防移植免疫排斥。

中国3种特有小型猪品系脂联素受体1基因外显子5的多态性分析

目的探讨我国三个特有的小型猪品系-中国农大小型猪，五指山小型猪，广西巴马小型猪脂联素受体1基因多态性分布，为这些小型猪在代谢性疾病和2型糖尿病研究中的应用提供基础资料。方法提取三个品系小型猪血液基因组DNA，针对脂联素受体1基因外显子5～内含子5的部分序列进行PCR扩增，对产物进行鉴定和测序，分析基因多态性。结果在所扩增的片段中共检测出5个sNPs——sNP1：G138A，发生在所有的小型猪品系中，并导致第45位的氨基酸由甘氨酸（Gly）转变为谷氨酸（Glu）；SNP2：G185A，所有的纯合突变均发生在五指山小型猪品系中（4／6，66．67％），而所有的杂合突变则发生在中国农大小型猪品系中（3／10，30％）；SNP3：G200A，全部发生在中国农大小型猪品系中，且均为杂合突变（3／10，30％）；SNP4：C295T，发生在广西巴马小型猪品系中的突变既有杂合突变（1／6，16．67％）也有纯合突变（2／6，33．33％），发生在中国农大小型猪品系中的突变全为杂合突变（2／10，20％）；SNP5：T337G，只出现在中国农大小型猪品系中，且为杂合突变（1／10，10％）。结论SNP1，在所有测定的小型猪品系中检出，这可能是所测小型猪共有的特性。SNP2，可能是小型猪品系之间的差异。SNP3和SNP4，可能是小型猪品系之间的差异，也可能是个体的差异。SNP5，可能是个体差异。

三个品系小型猪PPAR-γ基因外显子1的多态性分析

目的分析三个品系小型猪即巴马小型猪、五指山小型猪，中国农大小型猪过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）基因外显子1单核苷酸多态性（SNPs）分布特点，为我国小型猪在糖尿病和代谢性疾病的研究中提供基础资料。方法提取三个品系小型猪血液基因组DNA，以基因组DNA为模板，应用多聚合酶链式反应（PCR）技术在合成的特异性引物引导下扩增，将PCR产物纯化，然后进行测序，再将测序结果在NCBI中进行BLAST比对分析。结果在PPAR-γ基因外显子1中存在一个单核苷酸突变，密码子ATG—GTG，这一单核苷酸的突变导致该基因第59位氨基酸由甲硫氨酸（Met）变为缬氨酸（Val）。三个品系小型猪PPAR．7基因多态情况为：广西巴马猪4／6例发生突变，突变率为66．6％，其中2例纯合突变和2例杂合突变；五指山猪6／6例发生突变，突变率为100％，均为纯合突变；中国农大猪4／10例发生突变，突变率为40％，均为杂合突变。结论PPAR-γ基因突变情况在三个品系小型猪中存在差异，表明小型猪的品种不同多态情况不同。

不同体位肺保护通气方式对肺内/外源性急性呼吸窘迫综合征犬肾上腺髓质素的影响

目的观察在仰卧位和俯卧位条件下小潮气量+呼气末正压(PEEP)通气对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)模型犬肺不同部位(肺上区肺尖叶、肺下区腹侧肺心叶和肺下区背侧肺膈叶)支气管肺泡灌洗液(BALF)中肾上腺髓质素(ADM)的作用,以评价不同体位肺保护通气方式对肺内/外源性ARDS(ARDSp/ARDSexp)的抗炎作用机制。方法健康雄性杂种犬24只,随机分为ARDSp仰卧位通气组、俯卧位通气组以及ARDSexp仰卧位通气组、俯卧位通气组,每组6只。静脉注射油酸制备ARDSexp动物模型;气管内注入十六烷磺基丁二酸钠盐制备ARDSp动物模型。动态观察不同卧位条件下小潮气量+PEEP对ARDS模型犬氧合指数和肺不同部位BALF中ADM的变化。结果肺损伤后ARDS犬氧合指数明显下降;ARDSp模型犬肺尖叶和肺心叶BALF中ADM水平明显高于ARDSexp模型;俯卧位条件下肺保护性通气对ARDS模型犬具有更好的治疗效果,氧合指数改善更为明显,ADM释放受到抑制。结论ARDSexp和ARDSp对肺不同部位ADM释放的影响具有明显差异;俯卧位+小潮气量+PEEP通气模式对ARDSexp和ARDSp均具有良好的治疗效果。

我国特有三个小型猪品系胰岛素受体底物1基因外显子1的多态性分析

目的探讨我国三个特有的小型猪品系——中国农大小型猪,五指山小型猪,广西巴马小型猪--胰岛素受体底物1基因多态性分布,为这些小型猪在代谢性疾病和2型糖尿病研究中的应用提供基础资料。方法提取三个品系小型猪血液基因组DNA,针对胰岛素受体底物1基因外显子1的部分序列进行PCR扩增,对产物进行鉴定和测序,分析基因多态性。结果在所扩增的片段中共检测出2个SNPs,均发生在中国农大小型猪中,其中第2870位置上的C到G的颠换引起了第956位上的丙氨酸(Ala)转变为甘氨酸(Gly),没有发现人最常见的SNP——Gly972Arg。结论两处SNPs均发生在中国农大小型猪中,这可能是因为小型猪品系之间存在遗传差异所导致的。

小型猪胰淀素基因的多态性分析

目的探讨我国3个特有的小型猪品系,巴马小型猪,五指山小型猪,中国农大小型猪胰淀素（IAPP）基因多态性分布,为我国小型猪在2型糖尿病及代谢性疾病研究中的应用提供基础资料。方法提取3个品系小型猪血液基因组DNA,针对IAPP基因外显子3~内含子3的部分序列进行PCR扩增,产物鉴定、测序,统计分析基因多态。结果在所扩增的片段中共检测出2个SNPs位点,SNPs1：43G→A,位于外显子上,未引起的氨基酸的改变,突变发生在五指山猪（G/A杂合突变为16.7%,A纯合突变为83.3%）和中国农大猪（G/A杂合突变60%,A纯合突变为20%两个品系中。SNPs2：214C→T,位于内含子上,发生在五指山猪（T/C杂合突变为16.7%,T纯合突变为83.3%）和中国农大猪（T/C杂合突变为20%,T纯合突变为60%）两个品系中。结论在IAPP基因外显子3-内含子3的部分扩增序列中发现了2个SNPs位点,在3个品系小型猪中的分布不同。

小型猪葡萄糖转运子4外显子4a的基因多态性分析

目的分析我国特有的3个小型猪品系巴马小型猪、中国农大小型猪、五指山小型猪葡萄糖转运子4基因外显子4a的单核苷酸多态性(SNPs)分布特点,为我国小型猪在糖尿病和代谢性疾病研究中提供基础资料。方法以3个品系小型猪基因组DNA为模板,应用特异性引物进行PCR扩增,扩增产物纯化测序,进行BLAST比对分析。结果在小型猪GLUT-4基因外显子4a上有2个SNP位点:SNP1:GCT→GCC(Ala133 Ala),3个品系均发生了变化,均为纯合突变,其突变率为(22/22,100%)。SNP2:GGC→GGT(Gly146 Gly),巴马小型猪突变率为(6/6,100%),均为纯合突变;五指山小型猪突变率为(6/6,100%),均为纯合突变;中国农大小型猪突变率为(10/10,100%),其中包括6例纯合突变(6/10,60%)和4例杂合突变(4/10,40%)。结论SNPs1,在所有测定的小型猪品系中检出,这可能是所测小型猪的共有特征。SNPs2可能是小型猪品系之间的差异。

我国小型猪品系胰岛素受体底物1基因外显子1的多态性分析

目的探讨我国特有的三个小型猪品系—中国农大小型猪、五指山小型猪、广西巴马小型猪胰岛素受体底物1基因多态性分布,为这些小型猪在代谢性疾病和2型糖尿病研究中的应用提供基础资料。方法提取三个品系小型猪血液基因组DNA,针对胰岛素受体底物1基因外显子1的部分序列进行PCR扩增,对产物进行鉴定和测序,分析基因多态性。结果在所扩增的片段中共检测出2个SNPs,第2853位,T转换为C;第2870位,C颠换为G,导致第956位的氨基酸由丙氨酸(Ala)变为甘氨酸(Gly)。结论本实验检测出的两个SNPs均发生在中国农大小型猪中,所检测的五指山小型猪和广西巴马小型猪未发现SNPs,这可能是因为小型猪品系之间存在遗传差异所致。

我国特有的三个小型猪品系PGC-1基因外显子8的多态性分析

目的分析我国特有的三个小型猪品系:巴马小型猪、中国农大小型猪、五指山小型猪过氧化物酶体增殖物激活受体γ协同激活子1基因第8外显子的单核苷酸多态性(SNPs)分布特点,为我国小型猪在糖尿病和代谢性疾病研究中提供基础资料。方法以三个品系小型猪基因组DNA为模板,应用特异性引物进行PCR扩增,扩增产物纯化测序,进行BLAST比对分析。结果测序结果表明在小型猪PGC-1基因外显子8有5个单核苷酸多态性位点为:Ala354Val(450C→T),Gly363Gly(478C→T),Arg369Arg(494C→A),Leu570Leu(913G→A),Ser551Ser(1039A→G),其中,只有45O位C→T的杂合突变导致了编码氨基酸的改变。结论小型猪品种不同PGC-1基因外显子8的多态性分布有很大差异。

我国特有三个小型猪品系PGC-1基因外显子8的多态性分析

目的分析我国特有的三个小型猪品系巴马小型猪、中国农大小型猪、五指山小型猪过氧化物酶体增殖物激活受体γ协同激活子1基因第8外显子的单核苷酸多态性(SNPs)分布特点,为我国小型猪在糖尿病和代谢性疾病研究中提供基础资料。方法以三个品系小型猪基因组DNA为模板,应用特异性引物进行PCR扩增,扩增产物纯化测序,进行BLAST比对分析。结果测序结果表明在小型猪PGC-1基因外显子8有5个单核苷酸多态性位点为:Ala354Val(450C→T),Gly363Gly(478C→T),Arg369Arg(494C→A),Leu570Leu(913G→A),Ser551Ser(1039A→G),其中,只有45O位C→T的杂合突变导致了编码氨基酸的改变。结论小型猪品种不同PGC-1基因外显子8的多态性分布有很大差异。