别隐品碱对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流的影响

目的:观察中药伏生紫堇块茎夏天无中提取的生物碱别隐品碱对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流的影响。方法:实验于2003-11/2005-09在解放军总医院老年心血管病研究所病理生理实验室完成。采用酶解法制备SD大鼠心室肌单细胞,采用全细胞膜片钳记录大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流。①保持电位-80mV,施予-40mV,20ms的预刺激失活钠通道,紧接着给予+50mV,300ms的去极化脉冲,记录外向钾电流。记录正常电流后,与细胞池灌流含别隐品碱的细胞外液,药物终浓度分别为3,10,30,100μmol/L,待药物浓度在细胞池稳定后记录电流的改变,观察瞬时外向钾电流对别隐品碱浓度依赖性。②保持电位-80mV,施予-40mV,20ms的预刺激,紧接着给予-40～+60mV,300ms的去极化脉冲,记录外向钾电流。记录正常电流后,与细胞池灌流含别隐品碱的细胞外液,药物终浓度为10μmol/L,待药物浓度在细胞池稳定后记录电流的改变。分别测量各膜电位下的瞬时外向钾电流,以各脉冲下电流幅值对相应膜电位作图得各电流Ⅰ-Ⅴ曲线。③保持电位-80mV,施予-40mV,20ms的预刺激,紧接着给予-40～+60mV,500ms的去极化脉冲,记录外向钾电流。记录正常电流后,与细胞池灌流含别隐品碱的细胞外液,药物终浓度为10μmol/L,待药物浓度在细胞池稳定后记录电流的改变。将各电位下电流换算成电导,以标准化电导对各膜电位作图得稳态激活曲线。④保持电位-80mV,施予-40mV,20ms的预刺激,紧接着给予-100～+20mV,1000ms的去极化脉冲,在每一条件脉冲后紧跟一固定去极化至+50mV,50ms的测试脉冲,记录瞬时外向钾电流。记录正常电流后,与细胞池灌流含别隐品碱的细胞外液,药物终浓度为10μmol/L,待药物浓度在细胞池稳定后记录电流的改变。以标准化电流对各膜电位作图得稳态失活曲线。结果:①去极化+50mV时,别隐品碱10μmol/L使瞬时外向钾电流从给药前的(21.3±4.6)pA/pF降至(16.4±3.3)pA/pF(P<0.01,n=19)。别隐品碱3～100μmol/L浓度依赖性地阻滞瞬时外向钾电流,IC50为12.7μmol/L(95%可信范围:9.7～15.5μmol/L)。②别隐品碱10μmol/L使各膜电位瞬时外向钾电流幅值降低,降低幅度Ⅰ-Ⅴ曲线上移,虽然各电压下降低幅度有所不同,但差异无显著性。③别隐品碱10μmol/L使激活曲线右移,V1/2从(-1.5±1.8)mV移至(8.9±2.6)mV(P<0.01,n=16),k值基本无变化,给药前为(13.9±2.2)mV,用别隐品碱后为(13.04±1.87)mV。④别隐品碱10μmol/L使曲线左移,V1/2从(-29.37±3.01)mV移至(-35.32±4.01)mV(P<0.05,n=16),给药前k值为(11.25±2.76)mV,用别隐品碱后为(9.94±1.48)mV,虽有差异但不显著(P>0.05,n=16)。结论:别隐品碱具有抑制心室肌细胞瞬时外向钾电流的作用。