三磷酸腺苷、二磷酸腺苷和一磷酸腺苷的毛细管电泳分析研究

研究了三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)和一磷酸腺苷(AMP)的毛细管电泳行为,考察了运行缓冲液的pH值、磷酸盐浓度、分离电压、分离温度等因素对这三种化合物的迁移时间和分离效果的影响。结果发现,这些因素对上述三种化合物的分离有显著的影响,在优化的分离条件下,三种物质在10min内可得到分离。方法的检出限为0.125mg/mL,线性范围为0.125～2.00mg/mL,相关系数为0.991～0.997。

流式细胞术检测细胞凋亡比较研究

从三方面探讨检测细胞凋亡流式细胞术的方法。选用大鼠皮质神经元细胞,同时使用碘化丙锭(PI)An-nexin V/PI.JC-1法检测细胞凋亡率。结果显示三种方法的凋亡率分别是:2.60%,6.52%和18.56%,两两之间有显著性差异(P<0.01)。JC-1法最敏感,AV/PI次之,PI单染法不适合检测早期细胞凋亡。

高效液相色谱法测定鼻炎灵喷雾剂中马来酸氯苯那敏、盐酸麻黄碱、乳酸环丙沙星的含量

目的 采用反相高效液相色谱法 ,对鼻炎灵喷雾剂中马来酸氯苯那敏、盐酸麻黄碱、乳酸环丙沙星等组分进行了分离 ,建立含量测定方法。方法 用呋喃西林为内标 ,采用ZorbaxSB C18柱分离 ,0 .0 2 5mol·L-1磷酸盐缓冲液 甲醇 (6 5∶35 )为流动相 ,检测波长 2 5 8nm。结果 标准曲线范围分别为马来酸氯苯那敏 0 .15～ 1.5 3mg·mL-1,r =0 .9998。盐酸麻黄素为 0 .71～ 7.15mg·mL-1,r=0 .9999;乳酸环丙沙星为 0 .0 3～ 0 .2 9mg·mL-1,r=0 .9999。最低检测浓度分别为 1.0 4,4.89,0 .39μg·mL-1。方法的回收率分别为 99.6 8% (n =5 ) ,99.88% (n =10 ) ,98.72 (n =8)。日内RSD分别为 0 .2 5 %～ 0 .6 8% ,0 .79%～ 1.81% ,0 .95 %～ 1.84%。日间RSD分别为 0 .87%～ 3.81% ,1.49%～ 3.78% ,2 .2 8%～ 3.0 2 %。结论 此方法快速、准确。

双嘧达莫缓释微丸体内血药浓度及体外溶出度的相关性研究

目的 测定自制双嘧达莫缓释微丸的血药浓度 ,通过双嘧达莫缓释微丸的体外溶出度实验 ,利用统计学方法研究其体内外参数的相关性并提供质控方法。方法 采用改进的HPLC测定血浆药物浓度 ,释放度实验按中国药典 2 0 0 0年版附录中有关转篮法规定进行 ,以美国HansonResearch全自动溶出测定仪进行操作。结果 以药物累积吸收百分率Y与相应时刻的体外累积释放百分数X建立的一元线性回归方程为 :Y =1 0 .90 0 6 +1 .1 792X (r =0 .90 3 6) (P <0 .0 1 )。

咖啡因及其9种类似物的胶束电动毛细管色谱分析研究

以十二烷基硫酸钠 (SDS)胶束为准固定相 ,考察了咖啡因及其 9种类似物在胶束电动毛细管色谱 (MECC)分离模式下的分离行为。研究了运行缓冲液的 pH值、磷酸盐浓度、SDS浓度、甲醇体积分数、分离电压、分离温度等因素对这 10种化合物的迁移时间和分离效果的影响。结果发现 ,这些因素对上述 10种化合物的分离有显著的影响 ,尤以pH值为最。它不仅影响化合物的迁移时间和分离效率 ,还改变其出峰顺序 ,这与碱性条件下化合物仲胺基上氢的电离有关。优化后的分离条件 :运行缓冲液为 2 0mmol/L磷酸盐 2 0mmol/LSDS(pH 11 0 ) ,分离电压为2 5kV ,分离温度为 2 5℃。方法的检出限为 0 70mg/L ,线性范围为 1 4 0mg/L～ 4 5 5mg/L。

大鼠脑缺血再灌注损伤后不同时间血清SOD和MDA的变化

目的:测定大鼠脑缺血再灌注损伤后不同时间血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量变化,探讨其随损伤时间的变化规律及在脑损伤发病机制中的作用。方法:建立大鼠脑缺血再灌注损伤动物模型,测定损伤后不同时间大鼠血清中的SOD活力和MDA含量变化,并与假手术对照组进行比较。结果:与假手术组各时点比较,SOD和MDA在再灌注1 h即出现明显变化,随着时间推移与假手术组的差异进一步明显,再灌注36 h达到变化的峰值,随后二者与假手术组的差异呈逐渐减小的趋势,再灌注128 h后差异明显减小,但仍恢复不到假手术组的水平。且二者存在负性相关:SOD活力先降低后升高,MDA含量先升高后降低。结论:SOD和MDA血清学水平变化可以较好地代表脑神经细胞的损伤修复情况,可能一种新的量化指标在临床发展普及,在缺血缺氧性脑损伤疾病的早期发现和治疗评估中发挥作用。

维拉帕米对血清诱导的兔视网膜色素上皮细胞增殖调节作用的研究

目的 :研究维拉帕米 (Verapamrl,Ver)对兔视网膜色素上皮 (RPE)细胞增殖的抑制作用。 方法 :用流式细胞仪 (FCM )检测Ver对兔RPE细胞增殖周期的影响。 结果 :Ver能明显抑制血清诱导的兔RPE细胞的增殖 ,可使细胞更多地滞留在G1期 ,阻止细胞由G1期进入S期 ,并具有浓度依赖性和时间依赖性。 结论 :Ver能明显抑制血清诱导的兔RPE细胞增殖 ,可望成为新的防治增殖性玻璃体视网膜病 (PVR)的药物之一。

大鼠口服利福平海藻酸钠微球的体内药动学研究

目的为解决抗结核治疗的药物依从性低的问题,研制具有缓释效果的利福平海藻酸钠微球,比较研究大鼠口服后的体内药动学变化特点。方法采用静电液滴法制备利福平海藻酸钠微球,将利福平粉剂和利福平微球分别喂服两组大鼠后,采用高效液相色谱法测定不同时间点的血药浓度,以3p87处理全血药物浓度数据,计算药物动力学参数。参数用Excel进行统计分析。结果测定方法线性关系良好,日内、日间RSD均<7%,能满足测定要求。口服利福平海藻酸钠微球和普通利福平药粉比较,Cmax较小(P<0.05),Tmax较大(P<0.01),AUC较大(P<0.01),利福平海藻酸钠微球消除慢,并能保持约36h的有效杀菌浓度。结论测定方法准确、精密度高,是一可靠的测定血清利福平浓度的方法;口服利福平海藻酸钠微球具有显著的缓释效果。

凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析

采用流式细胞术与特异荧光探针JC 1相结合,在单细胞水平对X射线和化疗药物处理后的食管癌EC6细胞线粒体膜电位的变化进行了分析,凋亡细胞的线粒体膜电位下降,红色荧光减弱,随着剂量的增加,凋亡细胞的比例增大。

尿中咖啡因代谢产物的测定及其在肝功能评价中的应用

建立了高效液相色谱分析尿中咖啡因及其7种代谢产物的方法。测定了饮用咖啡后尿样中13X/CA和17U/CA的比率,以此评价乙肝表面抗原呈阳性患者的P450酶活性。

一种新的检测细胞凋亡的多参数流式细胞分析方法

建立了一种新的检测细胞凋亡的多参数流式细胞分析方法。HL6 0白血病细胞株经化疗药物足叶乙甙处理后 ,加AnnexinV (AV) -FITC/PI孵育双染 ,用多参数流式细胞术检测细胞凋亡。结果显示 ,凋亡细胞的百分比随诱导时间的延长而逐渐增多。表明AV -FITC/PT双染法既能对细胞膜表面特异蛋白染色 ,又同时检测细胞膜完整性。多参数流式细胞术是一种快速。

磨损颗粒数量对人工关节假体-骨界面巨噬细胞激活影响的实验研究

目的：探讨磨损颗粒数量对人工关节假体骨界面巨噬细胞（MФ）激活的影响。方法：以正常人髋关节滑膜细胞系为模型，借助激光扫描共聚焦显微镜（CLSM），动态监测分别加入 1.0 mg/ml 和 1.5 mg/ml（W/V）Ti 合金和 CoCr 合金颗粒悬液后巨噬细胞样细胞（MCs）内游离Ca2+浓度（[Ca2+]i）的变化。结果：滴加不同浓度的两种颗粒悬液后 1 h 内，MCs 内[Ca2+]i可出现 1～6 次脉冲样升高，其脉冲次数、间隔时间、波动幅度等均与颗粒种类及浓度无关（P>0.05），唯Ti 合金颗粒低浓度组出现[Ca2+]i脉冲的潜伏期较高浓度组长（P<0.05）。空白对照组及成纤维细胞样细胞（FCs）不出现类似反应。结论：假体骨界面 MФ 激活本身与磨损颗粒数量无关，但活化 MФ 的数量可能与颗粒数量有关，这是关系到界面是否发生骨溶解及其程度的重要中间环节。

早期细胞凋亡的流式细胞术分析

目的 :探讨多参数流式细胞术分析肿瘤细胞早期凋亡的方法。方法 :采用AnnexinVFITC/PI双染法及JC 1染色法标记食管癌EC6细胞 ,通过多参数流式细胞术分析X射线、顺铂诱导产生的细胞凋亡情况及线粒体膜电位的变化。结果 :随着剂量的增加 ,凋亡细胞的百分率逐渐增加 ,线粒体膜电位下降 ,去极化细胞增多 ,并且有明显的剂量依赖性。结论 :多参数流式细胞术具有广阔的应用前景 ,短时间内能够获得大量统计学意义上可靠的数据 ,为探讨细胞凋亡机制、寻找治疗靶点提供了有益线索。

两种荧光显微成像系统采集细胞器探针荧光图像的对比研究

目的 :应用荧光显微数码成像系统和共聚焦荧光显微成像系统采集细胞器探针图像的对比研究。方法 :传代培养内皮细胞 ,将四种细胞器探针与细胞共同孵育不同时间。采用荧光显微镜、计算机及高分辨率数码CCD组成的荧光显微数码成像系统采集四种细胞器探针的荧光图像。同时应用激光共聚焦显微镜采集图像进行对比。结果 :两种系统均可采集到细胞器荧光探针的图像 ;荧光显微数码成像系统采集的图像的特点为分辨率高 ,速度快 ,对细胞器的损伤小。结论 :荧光显微数码成像系统在细胞器探针的荧光检测定位研究中准确可靠。

利用荧光探针Fluo-4检测胸腺细胞内钙离子浓度变化

利用荧光显微数码成像系统测量荧光探针Fluo-4荧光强度的改变,建立动态检测细胞内钙离子浓度的方法。用荧光探针Fluo-4/AM标记原代培养小鼠胸腺细胞,以KCL刺激胸腺细胞去极化,并打开细胞膜上电压依赖性钙通道,细胞内荧光强度会发生改变。利用荧光显微数码成像系统动态监测Fluo-4荧光强度的改变可分析计算钙离子浓度。本方法灵敏度高,能实时监测细胞内钙离子浓度的变化。