PUMA与心肌细胞凋亡的研究进展

p53上调的凋亡调节物(p53 upregulated modulator of apoptosis,PUMA)是新近发现的一种具有促凋亡作用的p53靶基因.与以往发现的其他p53靶基因比较,PUMA在促凋亡作用中有两个重要的特点:一是PUMA几乎介导p53依赖的所有凋亡信号;二是PUMA不仅介导p53依赖的凋亡信号,而且还可以介导p53非依赖的凋亡信号.也就是说,尽管PUMA是p53靶基因,但是其在p53非依赖细胞凋亡中也发挥重要作用.由此可见,PUMA是一个强大的促凋亡因子.在心肌细胞,PUMA参与缺血/再灌注、内质网应激、阿霉素等多种刺激诱导的细胞凋亡.因此,PUMA在心肌细胞凋亡中发挥重要作用.

串珠素表达下调参与低氧对大鼠心肌微血管内皮细胞增殖的抑制作用

低氧可以抑制内皮细胞增殖,但是其机理目前尚不清楚。串珠素在调节内皮细胞增殖中发挥着重要作用。为了探讨串珠素是否参与低氧对内皮细胞增殖的抑制,将大鼠心肌微血管内皮细胞在低氧或常氧状态下培养12 h后,用实时定量RT-PCR方法检测串珠素mRNA的表达。结果发现:低氧可以明显抑制串珠素mRNA的表达,与常氧状态下串珠素mRNA表达水平比较,差异显著(P<0．05)。与此同时,低氧状态下或用串珠素抗体中和内源性串珠素,内皮细胞的增殖和对成纤维细胞生长因子的反应明显降低,粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)表达和细胞外信号调节激酶1／2(extracellular signal- regulated kinase,ERK1／2)活性明显下降。结果提示,串珠素表达下调可能通过抑制FAK介导的ERK1/2依赖的信号转导途径,参与低氧对大鼠心肌微血管内皮细胞增殖的抑制作用。

改良的心肌微血管内皮细胞分离培养方法

目的:建立一种细胞获得率高并且操作简单的心肌微血管内皮细胞体外培养体系。方法:无菌条件下分离左心室,0.1%胶原酶消化6min后,加0.1%胰蛋白酶继续消化4min,用100μm滤网过滤消化液,离心收集滤液中血管段进行培养。用内皮细胞的重要标记物VIII因子相关抗原鉴定细胞,并通过3H-TdR掺入法观察培养细胞对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的反应性。结果:细胞的获得率为1.2×106细胞/g心肌组织,显微镜观察培养细胞具有内皮细胞生长特性:单层“卵石样”排列特征;VIII因子免疫细胞化学染色呈阳性;证实获得的是内皮细胞。bFGF刺激后3H-TdR掺入率与对照组比较差异显著(P<0.05)。结论:本研究利用改良的酶消化法,缩短了消化时间,提高了细胞获得率,同时培养的内皮细胞对生长因子具有良好反应性,表明该方法是一种比较理想的体外心肌微血管内皮细胞培养体系。

卡巴胆碱对烧伤大鼠肠系膜微循环的影响

目的探讨卡巴胆碱对烧伤大鼠肠系膜微循环的影响。方法采用大鼠烧伤模型,分为对照组、烧伤组和卡巴胆碱治疗组。用活体微循环观测技术观察卡巴胆碱对烧伤大鼠肠系膜微血管管径、血流速度的作用。用激光多普勒血流量仪测肠壁血流量的变化。结果(1)烧伤组大鼠颈动脉平均压和细静脉管径较对照组分别下降19.30%(P<0.01)和9.97%(P<0.05),给予卡巴胆碱治疗后,颈动脉平均压和细静脉管径较烧伤组分别升高17.88%(P<0.05)和29.42%(P<0.001)。(2)烧伤组大鼠肠系膜细静脉血流速度和肠壁血液灌注量较对照组分别下降68.18%和70.66%(P<0.001),卡巴胆碱可明显增加肠系膜细静脉血流速度和肠壁血液灌注量,分别是烧伤组的2.41倍和2.45倍(P<0.001)。(3)烧伤后大鼠毛细血管网开放数较对照组下降55.21%(P<0.001),给予卡巴胆碱治疗后,毛细血管网开放数是烧伤组的1.95倍(P<0.01)。结论卡巴胆碱能使烧伤大鼠肠系膜细静脉舒张,加快肠系膜微血管血流速度,增加肠道的血液灌注量,具有改善肠道微循环的功能。

ARC的生理与病理生理意义

ARC全称是带有caspase富集功能域的凋亡抑制因子(apoptosis repressor with a caspase recruitment domain)。在正常状态下,ARC高度特异地表达是在终末分化组织如心肌、骨骼肌和大脑,而在非终末分化组织不表达或微量表达。在病理状态下,ARC在心肌、骨骼肌和神经系统损伤中发挥重要作用;在非终末分化组织来源的癌细胞系中高度表达,并呈组织差异性,因此ARC是一个新的肿瘤标记物。

心脏特异性高度表达的抗凋亡蛋白——ARC

与凋亡(apoptosis)相关的许多心脏疾病如心肌梗死、心肌病及心衰等严重威胁着人类的健康和生命.寻找有效手段防治这些心脏病是当前医学研究的热点.ARC(带有caspase富集功能域的凋亡抑制因子)是新近发现的唯一在心脏大量且特异表达的抗凋亡蛋白,其全称是带有caspase富集功能域的凋亡抑制因子.ARC可被持续性磷酸化并参与阻断凋亡发生途径的多个层面.因此,ARC是一种强大的抗心肌凋亡蛋白.

串珠素对bFGF诱导的心肌微血管内皮细胞增殖的影响

目的观察串珠素对bFGF诱导的心肌微血管内皮细胞增殖的影响。方法分离并培养SD大鼠心肌微血管内皮细胞,经VIII因子相关抗原抗体鉴定和常规处理后,随机分为对照组、bFGF组、缺氧组、缺氧+bFGF组、PD98059组和串珠素阻断组,以[3H]-TdR掺入法测定内皮细胞增殖反应。结果缺氧+bFGF组内皮细胞[3H]-TdR掺入率较对照组和bFGF组明显升高,是对照组的11.12倍(P<0.05),bFGF组的4.05倍(P<0.05),表明串珠素和bFGF联合作用可以明显刺激内皮细胞增殖,这种联合作用较单独的串珠素或bFGF作用明显;PD98059组内皮细胞[3H]-TdR掺入率较缺氧+bF-GF组下降了93.40%(P<0.05),表明PD98059可以抑制串珠素与bFGF对内皮细胞的增殖作用。结论串珠素可以增强bFGF对心肌微血管内皮细胞的增殖作用,ERK介导了串珠素对bFGF的作用。

卡巴胆碱对Ⅲ度烫伤大鼠心功能的保护作用

目的:探讨卡巴胆碱对Ⅲ度烫伤大鼠心功能的影响及相关机制。方法:实验大鼠分为对照组、Ⅲ度烫伤组和卡巴胆碱治疗组。平行测定各组心功能和一氧化氮(NO)水平。结果:(1)Ⅲ度烫伤组大鼠颈动脉压最小值、最大值和平均值较对照组分别下降22.33%、17.89%和19.30%(P<0.05～0.01),给予卡巴胆碱治疗后,颈动脉压最小值和平均值较Ⅲ度烫伤组明显升高(P<0.05)。(2)Ⅲ度烫伤后大鼠心率和-dp/dt明显下降,与对照组比较差异显著(P<0.05),+dp/dt虽较对照组下降6.20%,但二组之间无统计学意义(P>0.05);给予卡巴胆碱治疗后,+dp/dt和-dp/dt较Ⅲ度烫伤组分别升高19.00%和24.34%,差异有显著性(P<0.05)。(3)Ⅲ度烫伤后大鼠血清NO较对照组下降48.02%(P<0.05),卡巴胆碱治疗后大鼠,血清NO水平升高至30.51±15.13μmol/L,与对照组无显著性差异(P>0.05)。结论:卡巴胆碱具有改善Ⅲ度烫伤大鼠心功能的作用,NO可能参与了这一过程。