雌激素调控子宫内膜癌Ishikawa细胞中LRP16基因表达及其意义

目的:探讨子宫内膜癌Ishikawa细胞中雌激素(E2)对LRP16基因表达的调控作用,LRP16基因过表达对Ishikawa细胞增殖及侵袭生长能力的影响以及可能的分子机制.方法:采用Northernblot方法检测细胞中LRP16基因mRNA表达水平.双荧光报告系统检测相对荧光素酶活性.胎盘蓝死活细胞计数方法观察LRP16过表达对Ishikawa细胞增殖的影响,Matrigel包被的Transwell方法观察LRP16过表达对Ishikawa细胞侵袭生长能力的影响.Westernblot方法检测Ishikawa细胞中的蛋白水平.结果:雌二醇诱导了Ishikawa细胞中LRP16基因mRNA水平表达上调;而ICI182780则Ishikawa细胞中LRP16mRNA水平下调.增加ERα表达量促使Ishikawa细胞中LRP16基因上调.pGL3S5与ERα共转染Ishikawa细胞的相对荧光素酶活性较单纯pGL3S5转染组细胞升高30倍.我们没有观察到LRP16基因过表达对Ishikawa细胞的促增殖效应.Transwell结果显示LRP16基因过表达Ishikawa细胞的侵袭率较对照组细胞增加了30%.LRP16基因过表达的Ishikawa细胞中E钙粘合素的mRNA以及蛋白水平较对照组细胞下调了3倍,而没有检测到MMP2,MMP9以及CD44蛋白水平的变化.结论:我结果表明E2通过激活ERα上调子宫内膜癌Ishikawa细胞中LRP16基因mRNA水平,LRP16表达水平依赖于雌激素.LRP16基因表达上调没有促进子宫内膜癌细胞的增殖,但可能通过抑制E钙粘合素表达水平增加了细胞的侵袭能力.

LRP16基因在子宫内膜样腺癌中的表达及意义

目的:探讨LRP16在子宫内膜样腺癌(EEC)中的表达及与临床病理的相关性。方法:用免疫组化法检测76例EEC患者癌组织标本中LRP16和雌激素受体α(ERα)的表达水平。结果:LRP16核阳性率为67.11%(51/76),LRP16浆阳性率为96.05%(73/76),浆核均阳性占64.47%(49/76);ERα阳性占51.32%(39/76),阴性占48.68(37/76)。ERα阴性患者中LRP16核阳性率(86.49%,32/37)明显高于ERα阳性患者(48.71%,19/39)(P<0.01),且LRP16在胞核中表达与EEC患者的手术病理分期无显著相关性(P>0.05)。在胞浆中分布的LRP16与ERα表达无关(P>0.05),但胞浆中的LRP16与EEC的手术病理分期呈明显的负相关(P<0.01),与组织学分级则无显著相关性(P>0.05)。在LRP16核浆均阳性的病例中,ERα阴性患者(81.08%,30/37)的比例明显高于ERα阳性患者(48.72%,19/39)(P<0.01);且LRP16在核浆中均有表达与EEC患者的手术病理分期及组织学分级无显著相关性(P>0·05)。在EEC肿瘤细胞中核、浆分布的LRP16着色强度呈负相关(P<0.05)。结论:LRP16在EEC细胞中均有表达,但其亚细胞分布与ERα状态密切相关,LRP16在胞浆中的表达可能提示预后良好。

卵巢上皮肿瘤中LRP16蛋白表达的意义及其与ER、PR、E-cadherin的关系

目的:探讨LRP16在上皮性卵巢肿瘤中的定位,分析浆液性卵巢癌中LRP16与雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)、E-钙黏着蛋白(E-cadherin)表达间的相关性及临床意义。方法:免疫组化染色法检测5例浆液性交界性卵巢癌、6例子宫内膜样腺癌、5例透明细胞癌、46例浆液性卵巢癌中LRP16、ER、PR和E-cadherin的表达。结果:LRP16在癌细胞胞浆和胞核内均有分布,但在浆液性交界性卵巢癌细胞核内的表达(0.0%)明显低于浆液性卵巢癌中(58.7%)(校正χ2=4.103,P=0.04),而浆内表达的差异则无统计学意义(分别为20.0%、52.2%);LRP16在核内的表达强度与浆液性卵巢癌临床分期的高低存在统计学意义的正相关性(r=0.348,P<0.05);子宫内膜样腺癌、透明细胞癌、浆液性卵巢癌三种类型间核内阳性率(分别为66.7%、60.0%、58.7%)和胞浆内阳性率(分别为50.0%、40.0%、52.2%)的差异均无统计学意义(P>0.05);LRP16与ER、PR以及E-cadherin的表达均无明显相关性(P>0.05)。结论:核内LRP16的表达可能与浆液性卵巢癌的病理进程有关,对卵巢癌的临床诊断和病情进展的预测可能具有一定的指导意义。

反义hTERT对人肺巨细胞癌细胞系端粒酶活性的抑制作用

背景与目的:近几年的研究表明,端粒酶在肿瘤的发生中扮演着重要角色。人端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetrascriptase,hTERT)是端粒酶活化的惟一限制性组分。本研究探讨hTERT全长cDNA反义序列转染对人肺巨细胞癌细胞系PLA-801D恶性表型的逆转作用。方法:应用基因重组技术构建包含hTERTcDNA全长序列的反义hTERT真核表达载体pcDNA3.1(-)-hTERT,用脂质体转染人肺巨细胞癌细胞系PLA-801D,通过生长曲线比较转染反义hTERT后PLA-801D细胞的增殖能力,应用逆转录-聚合酶链反应方法检测hTERTmRNA的表达水平,并应用端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附法检测端粒酶活性。结果:成功地构建了pcDNA3.1(-)-hTERT的反义真核表达载体,并转入到PLA-801D细胞中。转染反义hTERT的细胞较未转染及转染空质粒细胞的生长增殖能力显著降低(P<0.05);转染组细胞中野生型hTERTmRNA的表达被抑制,其相对表达量仅为对照组细胞的15.7%,转染组细胞中端粒酶活性较对照细胞下降了约82.4%。结论:hTERTcDNA的全长反义序列可以抑制PLA-801D细胞hTERTmRNA的表达水平和端粒酶活性,限制PLA-801D细胞的生长。

三氧化二砷对Hela细胞hTERTmRNA表达的调节和对端粒酶活性的影响

目的 :观察三氧化二砷 (As2 O3 )对人宫颈癌细胞 (Hela细胞 )端粒酶活性及端粒酶逆转录酶 (hTERTmR NA)表达的影响。方法 :以 2 μmol/L的As2 O3 作用于人宫颈癌Hela细胞 ,在不同时间点用MTT法检测Hela细胞活力的变化 ,用流式细胞仪检测细胞周期的变化 ,用RT PCR法检测hTERTmRNA表达的变化 ,用TRAP ELISA法检测端粒酶活性的变化。结果 :随着As2 O3 作用时间的延长 ,Hela细胞的活力逐渐降低 ,G0 /G1期细胞所占比例升高 ,S期细胞所占比例减少 ,hTERTmRNA表达水平逐渐降低 ,端粒酶活性逐渐下降。结论 :As2 O3 可引起Hela细胞周期阻滞 ,hTERTmRNA的表达水平下调 ,端粒酶活性降低。

SKOV3卵巢癌细胞中雌激素对LRP16的调控作用及其影响

目的:研究雌激素受体ER阳性的卵巢癌细胞系中,E2对LRP16的调控作用以及LRP16对细胞增殖的影响。方法:Northern Blot、Western Blot方法分别检测RNA、蛋白表达水平;生长曲线测定过表达或抑表达LRP16对SKOV3细胞生长特性的影响。结果:雌激素敏感的BG-1细胞系中,E2正调控LRP16的表达;而不同浓度雌激素处理雌激素不敏感SKOV3细胞,LRP16蛋白的表达下降,而ICI182780对其作用相反;LRP16对SKOV3细胞的生长、增殖有微弱的调节作用。结论:在雌激素不敏感的SKOV3细胞系中,E2对LRP16的调节作用及LRP16发挥的生长调节作用与雌激素敏感的BG-1卵巢癌细胞系及乳腺癌体外研究结果不同。提示雌激素不敏感浆液性卵巢癌中E2对LRP16的调控可能存在新的机制,可能用来解释部分卵巢癌对内分泌治疗敏感性不同的原因。

LRP16基因通过雌激素受体α介导抑制Ishikawa细胞中E-钙黏着素的转录活性

目的:既往研究表明LRP16基因过表达通过下调E-钙黏着素促进子宫内膜癌Ishikawa细胞的侵袭生长,本研究目的在于探讨LRP16基因下调E-钙黏着素的分子途径。方法:用免疫组化方法检测LRP16基因过表达的Ishikawa细胞中E-钙黏着素的表达;用共转染与荧光素酶实验检测LRP16基因对E-钙黏着素启动子转录活性的影响;用染色质免疫共沉淀实验检测雌激素受体α(ERα)与LRP16蛋白在E-钙黏着素启动子区的招募状况。结果:E-钙黏着素在LRP16过表达的Ishikawa细胞中的表达水平明显下调;LRP16抑制了E-钙黏着素启动子的转录活性,该效应呈现对雌激素(E2)存在的依赖性特征;LRP16本身没有与E-钙黏着素启动子区结合,但明显抑制了ERα与E-钙黏着素启动子区的结合。结论:LRP16通过抑制ERα对E-钙黏着素基因的转录激活活性,下调E-钙黏着素在Ishikawa细胞中的表达水平。

LRP16基因的多克隆抗体制备及表达的探索

目的:制备人LRP16蛋白多克隆抗体并利用该抗体检测LRP16蛋白表达及亚细胞定位。方法:利用已构建的pRSET-C载体和LRP16基因组成的连接产物转化BL-21缺陷型大肠杆菌。诱导该基因原核表达,快速蛋白免疫法获取相应的多克隆抗体,利用免疫组化法观察LRP16基因产物在人多种组织中的表达差异。结果:成功获得高效的LRP16抗体,利用该抗体初步证实LRP16基因编码产物的在不同雌激素受体水平的组织分布特点。结论:制备的LRP16抗体及其全长基因可用于LRP16基因的生理功能及病理学研究,初步发现LRP16基因的表达与雌激素受体呈正相关。

反义hTERT对人肺巨细胞癌细胞系p53表达的影响

目的:本研究以端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetrascriptase,hTERT)基因的全长序列构建反义hTERT的真核表达载体,以此来转染肿瘤细胞PLA 801D,观察反义hTERT对其细胞周期分布及对p53表达的影响。方法:构建了包含hTERT全长基因序列的反义hTERT基因真核表达载体pcDNA3. 1(-) -hTERT,并稳定转染人肺巨细胞癌细胞系PLA 801D,观察基因转染前后,流式细胞术检测PLA 801D细胞的周期分布,用半定量RT- PCR检测p53mRNA的表达水平,免疫组化检测突变型p53蛋白阳性表达率的差异。结果:全长的反义hTERT基因可显著地抑制p53mRNA的表达,使细胞周期的分布出现G0 /G1期阻滞,突变型p53蛋白阳性率显著下降。结论:反义的hTERT基因可有效的抑制p53mRNA及突变型蛋白的表达水平,引起细胞周期阻滞,使细胞的恶性增殖减缓。

FHL2与Id蛋白相互作用的表位分析

目的:鉴定FHL2与Id家族蛋白成员之间的相互作用及分子表位。方法:GST-pulldown方法检测。结果:FHL2与Id家族的4个成员蛋白均存在直接的相互作用关系,FHL2蛋白中的第二个LIM结构域在FHL2/Id相互作用中是必需的,Id蛋白N端结构区域在介导FHL2/Id相互作用中是必需的。结论:FHL2是一个新识别的Id蛋白广谱相互作用因子,FHL2可能参与Id介导的多种生物学效应以及肿瘤发生与进展。

FHL2调控Id2功能活性的研究

目的:探讨FHL2对Id2蛋白功能的调控效应。方法:将E47、5xE-Box-Luc、pRL-SV40、Id2以及FHL2表达载体分别共转染MCF-7、293T以及SH-SY5Y细胞,双荧光素酶报告基因方法检测不同转染组细胞中的相对荧光素酶活性。结果:三个细胞系中E47均显著上调了报告基因的表达,Id2抑制了E47的转录激活活性,而FHL2通过与Id2相互作用显著消弱了Id2对E47功能的抑制效应。结论:通过相互作用FHL2抑制了Id2蛋白的功能活性,FHL2是一个新的Id2蛋白功能抑制子。

LRP16融合蛋白载体的构建及其原核表达

目的观察和鉴定LRP16在大肠杆菌中的表达,并分离、纯化其蛋白产物。方法应用DNA重组技术,用RT-PCR方法从正常人血液中扩增出LRP16基因全长及其抗原表位区,构建重组表达质粒pRSET-C-LRP16,IPTG诱导表达并纯化融合蛋白采用SDS-PAGE凝胶电泳进行鉴定。结果成功构建LRP16基因融合蛋白载体,SDS-PAGE显示pRSET-C-LRP16表达于原核细胞,蛋白经电泳分离,切胶后获得纯化的LRP16蛋白。结论制备的高纯度的LRP16蛋白,可在大肠杆菌中稳定表达。

膀胱癌的早期无创诊断新方法研究进展

膀胱癌是泌尿生殖系统的高发肿瘤 ,它的早期诊断对临床有重要意义。本文综述膀胱癌的早期无创诊断新方法 ,并与传统的尿脱落细胞学及膀胱镜检查相比较。

镁对去甲肾上腺素致心肌损伤的保护作用

临床上通常采用去甲肾上腺素(NE)治疗心衰,但超过生理剂量时可造成心肌细胞能量储备耗竭,以至坏死,本文对镁阻抗NE致心肌损伤的保护作用与机制进行了研究.

细支气管肺泡癌患者EGFR基因突变的研究

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)基因酪氨酸激酶域体细胞在细支气管肺泡癌(BAC)患者中突变的相关因素。方法分析和检测本院37例细支气管肺泡癌石蜡包埋标本EGFR基因突变状况,采用PCR技术进行EGFR基因18、19、20和21外显子突变分析。结果37例BAC患者中有18例(48.6%)酪氨酸激酶域存在体细胞突变,其中3例(8.1%)为18外显子替代突变,5例(13.5%)为19外显子突变,7例(18.9%)为20外显子替代突变,8例(21.6%)为21外显子替代突变。结论EGFR基因与BAC密切相关。

卵巢上皮肿瘤中ERα PR及E-Cadherin的表达及意义

目的探讨卵巢上皮肿瘤各亚型中雌激素受体α(ERα)及靶蛋白孕激素受体(PR)、E-钙黏着蛋白(E-cad-herin)间表达的相关性及临床意义。方法对解放军总医院2001年1月至2006年1月经病理检查证实的67例卵巢癌标本[5例浆液性交界性腺癌、46例浆液性腺癌(SAC)、6例子宫内膜样腺癌(MAC)、5例透明细胞癌(CCA)及5例其它恶性肿瘤亚型],采用免疫组化SP法检测其ERα、PR、E-cadherin的表达情况,结合临床病理特征分析3种蛋白间表达的关系。结果(1)浆液性交界性卵巢癌、SAC、MAC、CCA中ERα表达阳性率分别为:40.0%、76.08%、66.67%、0;PR表达阳性率分别为:60.00%、82.61%、66.67%、0;E-cadherin表达阳性率分别为:100.00%、95.65%、100.00%、100.00%;SAC与CCA间ERα、PR的表达阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。(2)E-cadherin的表达与SAC临床分期存在相关性(r=0.3610,P<0.05)。(3)SAC中,各临床病理特征(临床分期、病理学分级、年龄、淋巴转移)进行内部比较ERα、PR、E-cadherin的表达阳性率无明显差异。(4)浆液性卵巢癌中ERα、PR、E-cadherin的表达未检测出相关性(P>0.05)。结论ERα可能成为临床区分CCA和SAC的一项重要特征;E-cadherin可能在SAC的癌变过程中起重要作用,对临床诊断及预后评估具有一定的指导意义。