聚乳酸的制备及应用研究进展

聚乳酸(polylactic acid,PLA)是以乳酸为单体经化学合成的新型生物降解性高分子材料。它具有无毒、无刺激性及生物相容性良好的特点,可经生物分解为CO2和H2O,不造成环境污染。目前,已有多种方法制备乳酸和聚乳酸,并广泛应用于生物医学、工业、农业及日常生活等领域。

采用生化和受体分析手段观察中性粒细胞凋亡

细胞凋亡是近年来的研究热点,中性粒细胞(PMN)作为机体防御系统的重要组成部分,其凋亡情况倍受关注。本研究的目的在于:了解PMN的自然调亡;观察凋亡PMN表面肿瘤坏死因子受体(TNFR)的表达;探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对PMN凋亡的影响;并对正常和炎症状态下PMN的凋亡进行比较和分析。

骨钙素RIA试剂盒研制及其临床应用

应用自行研制组装的血清骨钙素（ＢＧＰ）ＲＩＡ试剂盒，对１４４例正常人和１７６例不同骨病患者的血清ＢＧＰ含量进行了测定．结果显示，血中ＢＧＰ含量的升降，反映了不同骨病时成骨细胞的功能状态，表明ＢＧＰ与骨疾病的发生有密切关系．这对研究骨病的发病机理、诊断和疗效分析，提供了一项有意义的指标．

神经酰胺介导粒细胞凋亡机理初探

目的：观察神经酰胺对ＨＬ６０及中性粒细胞（ＰＭＮ）凋亡产生的影响，探讨其在粒细胞发生过程中可能的调节作用。方法：采用ＤＮＡ凝胶电泳，流式细胞术，光镜及ＲＴＰＣＲ等技术对细胞进行凋亡鉴定及相关基因ｂｃｌ２，ｃｍｙｃｍＲＮＡ表达分析。结果：神经酰胺（Ｃ２ｃｅｒａｍｉｄｅ），肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）及长春新碱（Ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）均可不同程度地诱导ＨＬ６０及成熟ＰＭＮ产生凋亡，ＣＰＫ激活剂ＰＭＡ，Ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ无诱凋作用，并对ＴＮＦα，Ｃ２ｃｅｒａｍｉｄｅ及Ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ诱导的凋亡有不同程度的抑制；上述药物刺激后ｂｃｌ２，ｃｍｙｃｍＲＮＡ表达在ＨＬ６０细胞中呈明显下调趋势，ｃｍｙｃｍＲＮＡ表达在ＰＭＮ中也呈轻度下调。结论：神经酰胺可作为ＨＬ６０、ＰＭＮ胞内介质参与凋亡信号的传导，且与ＣＰＫ途径及ｂｃｌ２，ｃｍｙｃ基因表达相关。

瘦素及其抗体对小鼠皮肤创伤的修复作用

为探讨Leptin对小鼠皮肤创伤的保护作用机制,本文采用昆明小鼠40只,在背部各制备4个全层皮肤缺损创面(0.8cm×0.8cm),将创面分成4组,分别用mLeptin、mLeptin-Ab、mLeptin+mLeptin-Ab、生理盐水局部涂抹,测定伤口愈合时间和愈合率,并通过RT-PCR对伤口组织Leptin、Leptin受体(OB-Rb)和EGF-R的表达进行了检测。结果表明:与生理盐水对照组比较,mLeptin组和/或mLeptin-Ab组小鼠皮肤伤口愈合时间明显缩短(P<0.01),EGF-R的表达明显升高(P<0.01);单用mLeptin-Ab组小鼠皮肤伤口愈合率,EGF-R、OB-Rb和Leptin的表达均显著提高(P<0.01)。结论为Leptin和/或mLeptin-Ab均可促进小鼠皮肤伤口愈合;未发现mLeptin-Ab对Leptin的中和作用,单用mLeptin-Ab反而能够促进伤口修复。

瘦素在海人酸诱导小鼠颞叶癫痫海马损伤中的作用

目的探讨瘦素(Leptin)与颞叶癫痫发生、发展过程的关系。方法外源Leptin注射C57BL/6J小鼠后,右侧海马微量注射200 ng海人酸(kainic acid,KA)诱导颞叶癫痫,记录小鼠癫痫评分,1周后观察小鼠海马病理变化,包括Western blot检测Bax的表达水平,尼式染色(Nissl staining)观察海马Hilus区神经元丢失,免疫荧光检测Hilus区星形胶质细胞活化与增殖。结果在200 ng KA诱导的颞叶癫痫模型基础上,10 mg/kg外源Leptin预处理后,癫痫评分增加约52%,Bax表达水平升高约75%(P<0.05),海马Hilus区神经元丢失严重,星形胶质细胞过度活化。结论 Leptin增加了KA诱导的神经元凋亡,加重KA诱导的神经病理过程。

不同方法制备脂质体^(125)I-IL-8包封率的比较

本文用四种不同的方法制备脂质体 ,同时包裹12 5I -IL - 8。对不同方法制备的脂质体包裹12 5I -IL - 8的包封率进行对比。结果表明 :机械分散法、钙融合法、反相蒸发法制备的脂质体对12 5I -IL - 8的包封率依次增大。而用反相蒸发法和钙融合法联合制备的脂质体对12 5I -IL -

磷脂酶A_2阻断剂对缺血-再灌注损伤诱导细胞凋亡和坏死的影响

目的：探讨磷脂酶Ａ２ 活性对缺血 再灌注损伤过程中主要免疫细胞凋亡和坏死的影响。方法：采用ＤＮＡ 凝胶电泳、电镜、光镜以及流式细胞分析（ＦＡＣＳ）等方法测定了大鼠肠缺血 再灌注损伤后外周血中性粒细胞、脾脏细胞和胸腺细胞细胞凋亡和坏死情况及外源性磷脂酶Ａ２ 阻断剂对其的影响。结果：大鼠经小肠前动脉夹闭６０分钟、再灌注２７０ 分钟后，上述细胞出现程度不同的凋亡或坏死，ＤＮＡ电泳出现“梯形”或弥散状“拖尾”。缺血后再灌注前使用磷脂酶Ａ２ 阻断剂４ 溴苯甲酰乙烷（ｐ ＢＰＢ）、氯喹、血小板活化因子（ＰＡＦ）受体阻断剂ＳＲ２７４１７（５ ｍ ｇ／ｋｇ）后，对中性粒细胞的ＤＮＡ降解、坏死有显著的抑制作用，而对胸腺和脾细胞ＤＮＡ 降解、细胞凋亡没有明显的影响。结论：肠缺血 再灌注损伤可诱导外周血中性粒细胞、脾脏细胞和胸腺细胞细胞凋亡和坏死，在整体实验中阻断磷脂酶Ａ２

大鼠窒息心脏骤停期间脑皮质β肾上腺素能受体和血中NO的变化

目的研究心脏停搏期间脑皮质β肾上腺素能受体(β受体)的变化,检测心脏停搏前后血液NO浓度变化,探讨其意义。方法采用放射性配基结合分析方法,检测大鼠在窒息心脏停搏期间脑皮质β受体的变化。采用化学发光法,检测动物心脏停搏前后血中NO浓度的变化。将动物随机分为正常对照(A),手术对照(B),窒息10min(C)、20min(D)和30min(E)5组,每组6只。结果β受体数量D和E组分别与A、B、C组比较,差异极其显著(P<0.01)。各组间受体亲和力无明显变化。C组血中NO浓度与A、B组比较,差异极其显著(P<0.01)。结论在窒息心脏骤停早期,脑皮质β受体数量无明显变化,随着心脏停搏时间延长,其数量明显增加。心脏停搏以后,与心脏停搏前比较,血中NO浓度明显升高。

重组人瘦素表达及其免疫活性鉴定

为探讨人瘦素(leptin)在大肠杆菌中重组表达的途径,本研究用PCR方法扩增人leptin的编码区(CDS),使产物与pGEM-T easy载体相连,转染DH5α。测序后,选出阳性克隆质粒扩增。将酶切后的leptin片段与pET-28a(+)载体连接,获得leptin的表达质粒。将重组表达质粒转入BL21(DE3),测序结果显示leptinCDS没有突变产生,用IPTG诱导人重组(rh)leptin蛋白表达。表达产物进行SDS-PAGE电泳及免疫学分析。结果显示,包涵体在22 kDa蛋白处有明显的新增蛋白带,其含量超过总蛋白的50%;经Western-blot证实为重组的人(rh)leptin。本实验表明:rh-leptin在BL 21(DE3)/pET-28a(+)体系中能高效表达,表达产物具有免疫活性。

钙超载和血小板激活因子对肺组织释放降钙素墓因相关肽的影响

在肠缺血／再灌注（I／R）损伤的大鼠模型中，用放射免疫法分析血浆和离体肺灌洗液中降钙素基因相关肽（CGRP）。结果发现I／R损伤后血浆CGRP水平较自身伤前增高161．3％（P＜0．01），伤前预先用血小板激活因子受体阻断剂（SR27417A），血浆CGRP仍然高于自身伤前117．8％（P＜0．01）。而假手术组没有明显变化。另外，I／R损伤组大鼠离休肺灌洗液同正常对照相比，CGRP还下降17．4％，而SR27417A用药组离体肺CGRP比正常对照增高97．9％。在进一步离体实验中发现，钙离子载体A23187和血小板激活因子（PAF）促进离体大鼠肺组织释放CGRP，磷脂酶A2阻断剂4-溴苯甲酰溴甲烷（p-BPB）可以阻断A23187的这种作用，而SR27417A仅能阻断PAF的上述效应。用SR27417A预先灌流离体肺组织可将灌洗液中CGRP浓度提高144．6％，而后再用A23187灌流同一肺组织则比单纯用A23187灌流时低114．6％，比正常对照还低14．8％。同样，SR27417A预灌流后再用PAF灌流，则肺组织CGRP释放较单纯用PAF时低13．7％，但比正常对照仍高55．6％。以上结果提示：（1）I／R损伤后血浆中CGRP浓度显著升高而肺灌洗液中CGRP的变化不明显；（2）体外肺组织释放CGRP可能同胞内钙离子增加和磷脂酶A2激活及PAF合成增加相关；

雄性大鼠血浆、消化道粘膜层胃动素含量测定

本文采用作者建立的放射免疫测定法，测定了１６只大白鼠消化道不同部位粘膜中胃动素Ｍｏｔｉｌｉｎ（ＭＴＬ）含量和血浆ＭＴＬ含量。结果表明：贲门粘膜中ＭＴＬ含量最高，并依次为胃体、幽门、十二指肠、小肠。经统计学处理，贲门与胃白组，幽门与十二指肠组，十二指肠与小肠组均呈显著性差异。

肝癌患者血清瘦素表达及其临床意义

目的探讨肝癌患者血清瘦素(Leptin)的变化及其意义。方法研究分肝癌组(104例)﹑肝癌术后组(86例)及正常对照组(100例),采用全自动生化分析仪检测各组血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、碱性磷酸酶(ALP)及总胆红素(STB)等生化指标并用放射免疫法检测Leptin及甲胎蛋白(AFP)。结果与正常对照组相比,肝癌组血清TG、TC、ALP、STB、Leptin、AFP及肝癌术后组TG、Leptin、AFP含量均显著升高(P<0.05),同时与肝癌组相比,肝癌术后组Leptin、AFP含量明显降低(P<0.05),TC、TG、ALP、STB含量无明显改变。Leptin与TC、TG呈正相关,而与AFP、ALP、STB无相关性。结论Leptin参与肝癌的发生发展,其作用机制可能与促进肝癌组织新生血管形成有关。

高脂饮食诱导的肥胖对颞叶癫痫小鼠海马损伤的影响

目的探讨肥胖对颞叶癫痫发生、发展的影响。方法高脂饲料喂养C57BL/6J小鼠建立肥胖小鼠模型,建模成功后单侧海马微量注射200 ng海人酸(kainic acid,KA)诱导颞叶癫痫,记录小鼠癫痫评分,测定血清肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)浓度,Western blot检测海马S-100β的表达。海人酸注射5周后,观察小鼠海马病理结构改变。结果海人酸注射后,肥胖小鼠的癫痫行为评分较野生型鼠显著增高;海人酸注射24 h后,与野生型鼠相比,肥胖小鼠海马血清CK-MB浓度和海马S-100β表达升高;海人酸注射后,病理切片显示肥胖鼠海马CA3区神经元丢失和星形胶质细胞活化较野生型鼠更严重,肥胖鼠星形胶质细胞形态发生明显变化。结论肥胖可能加重了小鼠对海人酸诱导颞叶癫痫的损伤。

孕妇血清钙、25-羟维生素D_3及骨钙素的变化

母体妊娠期间为供给胎儿钙质需要,应该及时给予补充,否则将会给母体健康和胎儿正常发育带来损害影响。我们对49例正常妊娠妇女,观察在不同季节、不同妊娠周期体内血清钙、25-羟维生素 D_3(25-羟维 D_3)及骨钙素的含量变化,并就其在围产期的临床意义进行了讨论,报告如下。材料和方法 (一)对象:1.49例妊娠妇女,年龄24～31岁,均系本院门诊妇产科就诊者。

白介素8酶联免疫分析方法及其初步应用

建立高灵敏度和特异性的白介素 8(IL - 8)ELISA法。用人工重组的IL - 8多次免疫兔 ,获取高效价抗体。纯化抗体经生物素标记 ,同辣根过氧化酶 (HRP)标记的亲和素可特异结合。采用纯化的抗体包被 96孔板 ,形成固相抗体。加入不同浓度标准品后 ,反应 1.5h ,洗净后再加入生物素标记抗体 ,以酶标记亲和素作为探针 ,经酶底物显色反应可获得良好的ELISA标准曲线。该方法测定范围为 0 .2 - 10 .8ng/mL ,最低测出值为0 .0 2ng/mL ,批内和批间CV小于 8%和 10 %。用该法测得 18名正常人血浆中IL - 8水平为 0 .15± 0 .0 6ng/mL。 18份高低不同浓度IL - 8水平的血清样品经本法和RIA测定其均值为 0 .5 4± 0 .35ng/mL和 0 .6 3±0 .5 9ng/mL ,相关性强 (r =0 .819,t=5 .89)。在U93 7细胞系体外培养液中 ,LPS刺激 2 4h和 4 8h可测出IL - 8水平明显上升 ;而经TNF -α刺激 2 4h和 4 8h后同对照没有明显变化。该方法操作简便 ,具有较强灵敏度和特异性 ,可满足人血清和细胞培养液中IL - 8水平的检测。

肺疾病患者血浆、尿中6-K-PGF_(1α)和TXB_2测定的临床意义

本文对63例不同肺部疾病患者,血浆和尿中6-K-PGF_(1α)及 TXB_2浓度变化进行了测定,并对其在肺部发病中的作用和意义作了讨论。结果显示:17例正常人对照组血浆6-K-PGF_(1α)浓度为178.7±12.0pg/ml((?)±SE,下同)TXB_2为120.9±8.1pg/ml。尿中6-K-PGF_(1α)浓度为517.3±22.9pg/min,TXB_2为213.7±11.4pg/min。不同病因所致肺疾病病理损伤以及功能障碍,均可刺激肺内这两种物质不同程度生成增加,尤以 TXB_2增加为甚。经与对照组作统计学比较分析,均显示有极显著性差异(P<0.01)。尿中以病例组 TXB_2浓度升高较对照组明显,也具有统计学分析意义(P<0.01),6-K-PGF_(1α)的浓度变化不显著(P>0.05)。

瘦素对肠缺血/再灌注损伤大鼠肝脏功能的影响及其机制

目的:探讨瘦素(leptin)对大鼠肠缺血/再灌注(I/R)损伤时肝脏的保护作用及其机制。方法:99只Wistar大鼠随机分成11组:假手术组,肠缺血45min再灌注15min、30min、1h、3h、6h的肠I/R损伤组和相应时间点的leptin治疗组,每组9只大鼠。肠I/R损伤组和leptin治疗组建立大鼠肠I/R损伤模型;leptin治疗组于再灌注的同时腹腔注射leptin0.2mg/kg。假手术组术后1h处死,其余各组大鼠于相应时间点处死,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT),肝组织中白细胞介素-6(IL-6)、IL-10和超氧化物歧化酶(SOD)水平的动态变化。结果:肠I/R组血清ALT随着时间变化逐渐升高,肝组织中的IL-6水平于再灌注3h显著升高,而IL-10水平基本处于平稳的波动状态,SOD活性于再灌注早期呈略微下降趋势,1h后逐步回升至假手术组水平;leptin治疗后血清ALT水平基本稳定在较低水平,再灌注3h后,肝组织IL-6水平较损伤组明显降低,同时SOD活性显著提高,IL-10水平于再灌注15min时突然增高,随即恢复到假手术组水平。结论:leptin对大鼠肠I/R造成的肝脏功能损伤具有改善作用,可能与其调节肝组织中的细胞因子释放、提高肝脏的抗氧化损伤能力有关。