目的分析间充质干细胞培养上清(MSCs-CM)对高糖诱导的乳鼠心肌细胞损伤的影响以及可能的作用机制。方法分离培养SD乳鼠原代心肌细胞,随机分为3组,正常组(N组)、高糖组(HG组)、高糖+间充质干细胞培养上清组(HG+MSCs-CM组),干预后于倒置...目的分析间充质干细胞培养上清(MSCs-CM)对高糖诱导的乳鼠心肌细胞损伤的影响以及可能的作用机制。方法分离培养SD乳鼠原代心肌细胞,随机分为3组,正常组(N组)、高糖组(HG组)、高糖+间充质干细胞培养上清组(HG+MSCs-CM组),干预后于倒置相差显微镜下观察心肌细胞形态及搏动情况,并计算表面积。HG+MSCs-CM组再次分为不同浓度组(0.25 m L、0.5 m L、1m L、2 m L)。采用定量实时聚合酶链反应(Q-PCR)检测各组心肌细胞中E3泛素连接酶MG53 m RNA表达水平。采用蛋白印记法检测各组心肌细胞中MG53及胰岛素受体底物蛋白1(IRS1)蛋白表达水平。结果培养72 h后HG组心肌细胞与N组相比表面积增大,搏动频率减弱;HG+MSCs-CM组与HG组相比心肌细胞表面积减小,搏动频率增强,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。干预48 h后,HG组MG53m RNA相对表达水平与N组相比显著升高,HG+MSCs-CM组较HG组显著降低,差异有统计学意义(P均<0.05)。干预72 h后,MG53蛋白相对表达水平:HG组与N组相比明显增高,HG+MSCs-CM组与HG组相比明显降低,(0.87±0.04)vs.(0.36±0.04),(0.43±0.05)vs.(0.87±0.04),差异具有统计学意义(P均<0.05)。IRS1蛋白相对表达水平:HG组与N组相比明显降低,HG+MSCs-CM组与HG组相比明显增高,(0.25±0.03)vs.(0.68±0.06),(0.55±0.03)vs.(0.25±0.03),差异具有统计学意义(P均<0.05)。MG53蛋白相对表达水平:HG+MSCs-CM 2 m L组与HG+MSCs-CM 0.25 m L组相比减低,(0.60±0.03)vs.(1.13±0.14);IRS1蛋白相对表达水平:HG+MSCs-CM 2 m L组与HG+MSCs-CM 0.25m L组相比明显增高,(0.15±0.02)vs.(0.05±0.02),差异具有统计学意义(P均<0.05)。MG53蛋白相对表达水平与IRS1相对表达水平呈负相关(r=-0.75,P=0.021)。结论间充质干细胞培养上清缓解高糖诱导的乳鼠心肌细胞损伤,可能机制为抑制高糖诱导的MG53的高表达,进一步上调IRS1的表达影响胰岛素信号通路。展开更多
文摘目的分析间充质干细胞培养上清(MSCs-CM)对高糖诱导的乳鼠心肌细胞损伤的影响以及可能的作用机制。方法分离培养SD乳鼠原代心肌细胞,随机分为3组,正常组(N组)、高糖组(HG组)、高糖+间充质干细胞培养上清组(HG+MSCs-CM组),干预后于倒置相差显微镜下观察心肌细胞形态及搏动情况,并计算表面积。HG+MSCs-CM组再次分为不同浓度组(0.25 m L、0.5 m L、1m L、2 m L)。采用定量实时聚合酶链反应(Q-PCR)检测各组心肌细胞中E3泛素连接酶MG53 m RNA表达水平。采用蛋白印记法检测各组心肌细胞中MG53及胰岛素受体底物蛋白1(IRS1)蛋白表达水平。结果培养72 h后HG组心肌细胞与N组相比表面积增大,搏动频率减弱;HG+MSCs-CM组与HG组相比心肌细胞表面积减小,搏动频率增强,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。干预48 h后,HG组MG53m RNA相对表达水平与N组相比显著升高,HG+MSCs-CM组较HG组显著降低,差异有统计学意义(P均<0.05)。干预72 h后,MG53蛋白相对表达水平:HG组与N组相比明显增高,HG+MSCs-CM组与HG组相比明显降低,(0.87±0.04)vs.(0.36±0.04),(0.43±0.05)vs.(0.87±0.04),差异具有统计学意义(P均<0.05)。IRS1蛋白相对表达水平:HG组与N组相比明显降低,HG+MSCs-CM组与HG组相比明显增高,(0.25±0.03)vs.(0.68±0.06),(0.55±0.03)vs.(0.25±0.03),差异具有统计学意义(P均<0.05)。MG53蛋白相对表达水平:HG+MSCs-CM 2 m L组与HG+MSCs-CM 0.25 m L组相比减低,(0.60±0.03)vs.(1.13±0.14);IRS1蛋白相对表达水平:HG+MSCs-CM 2 m L组与HG+MSCs-CM 0.25m L组相比明显增高,(0.15±0.02)vs.(0.05±0.02),差异具有统计学意义(P均<0.05)。MG53蛋白相对表达水平与IRS1相对表达水平呈负相关(r=-0.75,P=0.021)。结论间充质干细胞培养上清缓解高糖诱导的乳鼠心肌细胞损伤,可能机制为抑制高糖诱导的MG53的高表达,进一步上调IRS1的表达影响胰岛素信号通路。