实验兔血压调控与亚硝酸盐和金属铜离子参与的降压作用

目的:探讨血管扩张剂亚硝酸盐与小分子硫醇转亚硝基过程对实验兔血压的影响和金属铜离子分解亚硝基硫醇阻断亚硝酸盐的降压作用。方法:实验于2004-01/08在解放军总医院血液生化检验科完成。30只新西兰白兔随机分为3组。①对照组(n=6):从兔耳缘静脉注入pH为7.4的磷酸盐生理盐水缓冲液1.0mL。②亚硝酸钠组又分为12.5,25.0,50.0μmol/kg组(n=6):从兔耳缘静脉注入12.5,25.0,50.0μmol/kg亚硝酸钠溶液(pH7.4的磷酸盐生理盐水缓冲液溶液配制)。③硫酸铜组(n=6):从兔耳缘静脉注入50.0μmol/kg亚硝酸钠溶液,待血压下降至最低点后,从兔另一耳缘静脉注入硫酸铜溶液25μmol/kg。应用高效液相色谱监测亚硝酸盐与还原性巯基在不同pH条件下生成亚硝基硫醇情况;用八导电生理监测仪,观察亚硝酸盐对实验兔血压的调控作用和金属铜离子分解亚硝基硫醇对亚硝酸盐降压作用的影响。结果:30只新西兰白兔全部进入结果分析。①pH值对亚硝酸盐与硫醇物质生成亚硝基硫醇的影响:硫醇物质与亚硝酸盐形成亚硝基硫醇的反应速度随着反应体系pH的下降而加快,当反应体系pH>7.0时,硫醇物质很难与亚硝酸盐反应形成亚硝基硫醇。②亚硝酸钠对实验兔血压的影响:亚硝酸盐可有效降低实验兔血压,12.5,25.0,50.0μmol/kg3个浓度亚硝酸钠注射组血压均较对照组明显降低(t=9.002～9.640,P<0.01),而且25μmol/kg和50μmol/kg亚硝酸钠组血压也明显低于12.5μmol/kg亚硝酸钠组(t=3.878,P<0.05;t=4.866,P<0.01)。③硫酸铜对亚硝酸钠降压作用的影响:注入亚硝酸钠使血压下降达到最低点后,再注入硫酸铜溶液实验兔血压迅上升,与50μmol/kg亚硝酸钠组比较差异有显著性意义(t=-2.225,P<0.05)。结论:静脉注射亚硝酸钠可使实验兔的动脉血压迅速下降,其降压幅度与注入的亚硝酸盐的量成正比,注入硫酸铜溶液可逆转亚硝酸盐所致的实验兔血压下降,这种作用可能通过亚硝盐与硫醇物质之间的转亚硝基形成硝基硫醇密切相关。

异丙酚对神经元缺氧损伤的保护及其作用机制

目的 研究异丙酚对离体大鼠海马神经元缺氧损伤的保护作用及其机制。方法 以原代培养的大鼠海马神经元作为研究对象 ,建立缺氧、H2 O2 和谷氨酸损伤模型 ,用MTT法测定神经元存活率。采用激光扫描共聚焦显微镜动态监测缺氧前后 ,单个海马神经元内Ca2 + 浓度和线粒体膜电位 (△Ψm)的变化。用电子自旋共振技术测定异丙酚对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除作用。结果 6～ 4 8mg·L-1浓度的异丙酚可明显降低神经元缺氧损伤时的细胞死亡率 (P <0 0 1) ,作用程度均呈剂量相关 (r =0 89,P <0 0 5 ) ;2 4～ 4 8mg·L-1浓度的异丙酚可明显降低H2 O2 损伤时的细胞死亡率 (P <0 0 1) ;12～ 4 8mg·L-1浓度的异丙酚可明显降低谷氨酸损伤时的细胞死亡率 (P <0 0 1)。 3～ 4 8mg·L-1异丙酚对缺氧诱发的细胞内钙离子超载有抑制作用(P <0 0 5 ) ;12、4 8mg·L-1异丙酚能减缓缺氧引起的△Ψm降低 (P <0 0 1)。 12、4 8mg·L-1异丙酚对羟基自由基的清除率分别为 17 1%和 2 1 1% ,但对超氧阴离子自由基无清除作用。结论 异丙酚对离体培养的大鼠海马神经元缺氧性损伤具有保护作用 ,其作用机制部分与异丙酚抑制缺氧引起的 [Ca2 + ]i 异常升高。

色谱法研究胃肠外营养中脂肪酸乳剂对大鼠多不饱和脂肪酸代谢的影响

运用色谱法测定了红细胞膜磷脂脂肪酸的组成。首先用双向薄层色谱分析法分离和提纯膜中的类脂，然后运用毛细管气相色谱法分析其中的组分。类脂中加入Ｇ_（１７：０）作内标，硫酸－甲醇液进行甲酯化处理后，上样测试。在３５０ｍｇ／Ｌ到８００ｍｇ／Ｌ的范围内线性关系良好，相关系数均大于０．９９。方法具有稳定性好、灵敏度高、重复性好、操作相对简便的特点，在研究胃肠外营养中脂肪酸乳剂对大鼠多不饱和脂肪酸代谢的影响中，取得了较好的效果。

气相色谱-质谱法检测人血浆中的盐酸丙哌维林及其氮氧化物

目的 建立简便、灵敏的GC MS定量分析方法 ,以测定人血浆中的盐酸丙哌维林 (P4)及其主要代谢产物丙哌维林氮氧化物 (P4NO)。方法 血浆经碱化 (pH9) ,氯仿提取。以地西泮为内标 ,GC MS选择离子检测。结果 盐酸丙哌维林浓度在 6 .2 5～ 40 0ng·ml- 1 内具有良好的线性关系 ,最低检出浓度约为 3.13ng·ml- 1 。血浆中丙哌维林的回收率为 81.7%～ 87.5 % ,日内RSD <7.7% ,日间RSD <10 .4%。结论 本法适用于盐酸丙哌维林的生物利用度研究和血药浓度监测。

激光共聚焦显微镜的原理和应用

激光共聚焦显微镜的原理和应用李楠王黎明杨军关键词激光；显微镜；原理和作用中国图书资料分类法分类号Ｒ３１８．５１激光共聚焦显微镜是８０年代发展起来的一项划时代意义的高科技新产品，它是在荧光显微镜成像基础上加装了激光扫描装置，利用计算机进行图象处理，使用...

甲强龙对小鼠肾小管间质成纤维细胞间通讯的影响

利用共聚焦激光扫描显微镜的荧光漂白功能，通过荧光漂白后荧光回复现象观察了体外培养的正常小鼠肾小管间质成纤维细胞缝隙连接的通讯功能以及甲强龙的影响。结果发现体外培养的正常小鼠肾小管间质成纤维细胞间存在着缝隙连接，具有胞间通讯的功能。甲强龙对正常小鼠肾小管间质成纤维细胞缝隙连接介导的细胞间通讯具有明显的抑制作用。

胆碱能受体激动剂对豚鼠离体前庭毛细胞内钙离子浓度的影响

目的：通过观察胆碱能受体激动剂对离体前庭毛细胞内钙离子浓度的影响，探讨前庭毛细胞膜所存在的胆碱能受体及其分型、受体的脱敏现象。方法：用胶原酶消化后机械分离法，分离豚鼠壶腹嵴前庭毛细胞（VHC)， 钙敏荧光探针 Fluo-3 荧光染色，用激光扫描共聚焦显微镜记录VHC细胞内游离钙离子浓度（[Ca2+]i）的动态变化。结果：①胆碱能M和N型受体激动剂乙酰胆碱(ACh)、氨甲酰胆碱(CCh)均可引起离体VHC内[Ca2+]i的升高；N型受体激动剂溴化乙酰胆碱(Ach-Br)仅在高浓度（10 mmol/L）时引起部分（4/5）离体VHC内[Ca2+]i升高，在低浓度(1mmol/L)时影响不明显；②ACh、CCh 引起 VHC内[Ca2+]i升高在同一细胞不能重复出现，存在脱敏现象；而不同类型的受体激动剂先后作用时无脱敏现象；③阿托品对ACh、CCh引起的VHC内[Ca2+]i的升高有抑制作用；加入 0.1 mmol/L 阿托品可使 1 mmol/L ACh 或 CCh 引起的 VHC 内[Ca2+]i升高的峰值明显减小(t检验均有极显著差异，P<0.01)。结论：豚鼠前庭毛细胞膜上存在 M 型和 N 型两种受体，M 型受体激动剂引起 VHC 内[Ca2+]i的升高较 N 型明显。阿托品对 M 型受体激动剂引起的[Ca2+]i 升高有抑制作用；前庭毛细胞膜上的胆碱能受体对同一类型的激动剂有脱敏现象。

双重荧光染色监测听毛细胞游离钙

豚鼠耳蜗分离外毛细胞经fluo-3和fura-red染色后,用激光扫描共聚焦显微镜监测其胞内游离钙的空间分布和动态变化,以fluo-3/fura-red荧光比值大小指示游离钙浓度的高低。外毛细胞胞内游离钙呈不均匀分布,荧光比值分别为细胞质1.71±0.85,质膜1.61±0.75,表皮板1.47±0.65及胞核1.39±0.66,显示细胞质游离钙浓度最高而胞核游离钙浓度最低。静息状态下连续扫描时荧光比值变化小于0.1,而在受到机械刺激后荧光比值增加幅度达0.3—1.2。实验结果表明,fluo-3和fura-red双发射比例法能更准确反映听毛细胞胞内钙的空间分布和动态变化,第二信使钙可能参与了听毛细胞的机械-电换能过程,研究了换能过程中听毛细胞钙信号的时空模式。

软骨细胞形态对其缝隙连接的影响

目的 探讨体外培养状态下新生兔软骨细胞的缝隙连接(gap junction)与软骨细胞形态、表型的关系。方法 1.向形成集落的兔膝关节软骨细胞(第5代)培养基内加入荧光染料CFDA-AM,经激光共聚焦显微镜测量不同形态的单个软骨细胞内的荧光强度。2.以激光淬灭软骨细胞内的荧光后定时测量其荧光的恢复曲线。3.将因股骨颈骨折而行人工关节置换的人股骨头关节软骨切成20um薄片,同样加入荧光染料后测定淬灭前后荧光强度。结果 1.各种形态的扁平状软骨细胞摄入CFDA-AM后平均荧光强度差异很大(范围1-274,n=30),平均值明显低于单个球形软骨细胞者(平均2057,范围340-3538,n=30)。2.只有集落中央的球形软骨细胞才有逐渐的荧光恢复。3.人股骨头关节软骨陷窝内软骨细胞内的荧光经激光淬灭后可以恢复。结论 1.软骨细胞的形态影响其荧光染料的摄入量。2.缝隙连接只出现在球形软骨细胞之间,它与软骨细胞的特有表型同时出现。

卵巢上皮癌化疗药物敏感试验的临床研究

目的 :探索体外化疗药物敏感试验对卵巢癌临床用药的指导作用。方法 :将卵巢上皮癌患者的肿瘤细胞体外培养 ,经 10种、2 0个不同浓度化疗药物作用 ,用活细胞荧光探剂标记 ,在激光扫描共聚焦显微镜 (CLSM)下测定药物作用前后的活细胞数量。结果 :标本可评价率为 80 95 %,预测结果的临床阳性符合率为 89%,阴性符合率为 10 0 %。 82 35 %的标本对泰素敏感 ,泰素、顺铂、卡铂和足叶乙甙具有显著的剂量效应关系。用敏感试验指导治疗的患者 ,无瘤生存时间较对照组长 ,P <0 0 5。结论 :CLSM法体外化疗药物敏感试验 ,准确直观 ,细胞用量少 ,对临床用药有指导意义。

油酸在人肝癌HepG2细胞内转化生成9,10-二羟基硬脂酸

目的以人肝癌细胞株HepG2验证油酸转化生成9,10-二羟基硬脂酸(DHSA)途径。方法将HepG2细胞消化传代接种于24孔培养板,24h贴壁后分别加入含50μmol/L和100μmol/L油酸的无血清MEM培养液,培养24h和48h后测定细胞裂解液及上清液中DHSA和油酸(OA)的含量。结果添加50μmol/L和100μmol/L油酸培养24h后,HepG2细胞裂解液中DHSA浓度分别为(3.29±0.38)ng/ml和(6.33±1.99)ng/ml,无油酸对照组为(2.08±0.61)ng/ml;OA含量分别为(645.07±142.81)ng/ml和(1341.6±349.69)ng/ml,对照组为(359.68±12.06)ng/ml;上清液中DHSA和OA含量亦显著高于对照组。培养48h后,油酸组细胞裂解液中OA含量仍高于对照组,DHSA含量仅100μmol/L油酸组高于其他组;细胞上清液中OA含量仅100μmol/L油酸组高于对照组,DHSA含量各组间无显著差异。结论油酸可在HepG2细胞内代谢生成DHSA。

人参四物汤对成瘾动物胸腺T细胞亚群增殖及IL-2R的作用研究

目的：观察吗啡对胸腺细胞ＣＤ４，ＣＤ８细胞周期增殖、ＩＬ２的影响及人参四物汤对其调节作用。方法：小剂量递增给药建立吗啡成瘾动物模型后，采用流式细胞仪分析各组小鼠胸腺ＣＤ４、ＣＤ８细胞ＤＮＡ含量、增殖指数以及ＩＬ２Ｒ的情况。结果：吗啡成瘾组小鼠ＣＤ４、ＣＤ８细胞Ｓ，Ｇ２＋Ｍ期和增殖指数显著低于正常组和人参四物汤组动物，而Ｇ０／Ｇ１期高于后二者；吗啡依赖小鼠ＩＬ２Ｒ表达下降，人参四物汤组动物的Ｔ细胞表面ＩＬ２Ｒ表达有明显增加。结论：吗啡使胸腺细胞ＤＮＡ复制受阻导致功能细胞减少，ＩＬ２Ｒ表达下降。

非甾类抗炎药物对软骨细胞内游离钙的影响

目的：了解不同种类非甾类抗炎药（ＮＳＩＡＤｓ）在低浓度水平（相当于常用口服剂量药物下的人体平均血浆最高浓度）对体外培养的人软骨细胞内游离钙的影响。方法：培养３ｄ的人膝关节软骨细胞经钙的荧光指示剂Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ染色后，在激光扫描共聚焦显微镜下动态观察ＮＳＡＩＤｓ对软骨细胞内平均荧光强度的即刻变化。结果：在高浓度的消炎痛、阿司匹林、扶他林和奇诺力作用下，软骨细胞内平均荧光强度变化值均明显高于正常对照生理盐水组（Ｐ＜０．００１，ｎ＝６）；而在低浓度作用下，仅扶他林对软骨细胞的平均荧光强度变化值与正常对照组无显著性差异（Ｐ＞０．０５，ｎ＝６）。结论：不同种类和不同浓度非甾类抗炎药物，对正常软骨细胞内游离钙产生不同影响，扶他林在低浓度下对正常软骨细胞内游离钙的影响最小或无影响，并提示该药物对正常软骨细胞的损伤作用比其它３种药物小。

激光对猪色素上皮细胞间通讯功能的影响

目的：观察激光对培养的猪色素上皮细胞的通讯功能的影响。方法：用不同输出功率的氩激光直接照射融合状态下的色素上皮细胞，然后测定光斑直径周围细胞的胞间通讯功能。结果：设定激光光斑直径为２００μｍ，曝光时间为０．２ｓ，功率输出为０．１Ｗ时对细胞通讯功能无明显影响、０．５Ｗ的激光对细胞通讯功能有轻度的抑制作用、０．９Ｗ、１．８Ｗ、２．７Ｗ的激光对细胞通讯功能则有明显的抑制作用。结论：不同功率的激光光凝对细胞胞间通讯功能影响程度不同。

共刺激因子在细胞免疫中的作用

共刺激因子是一类参与免疫反应的辅助性分子，存在于Ｔ／Ｂ细胞、抗原提呈细胞（ＡＰＣ）和靶细胞表面（表１）。在细胞对抗原的识别中通过细胞表面共刺激因子的特异结合，可有效增强Ｔ细胞与其它细胞的粘附，传导抗原刺激信息，参与细胞的免疫活化过程，在细胞抗原识别及...

蛋白质双向电泳、印迹转移及蛋白质合成无细胞体系技术在小鼠腹水细胞EF-3研究中的应用

本文应用近年发展起来的生化技术－蛋白质双向电泳（其第一向为等电聚焦，第二向为ＳＤＳ凝胶电泳），将小鼠腹水细胞核粮体蛋进行了指纹分离，并利用蛋白质印迹转移（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ），将转移后的硝酸纤维素膜与交联了碱性磷酸的第二抗体和抗酵缮母ＥＦ－３抗体反应，证实该核粮体蛋白含有ＥＦ－３同源片段，进而制备了蛋白质合成无细胞体系。通过测定ＰｏｌｙＵ指导下＾３Ｈ－ｐｈｅ掺入活力的免疫失活实验。

铽在生物活性分析中的应用

介绍了铽（Ｔｂ３＋）的理化性质、发光机理及其配体。综述了近年来Ｔｂ３＋在酶放大镧系发光法（ＥＡＬＬ）、多标记的时间分辨荧光免疫分析（ＴＲＦＩＡ）、直接固相ＴＲＦＩＡ、核酸分子杂交分析、生物大分子结构检测等方面的应用。

异丙酚对大鼠海马神经元缺氧损伤的保护作用

目的研究异丙酚对大鼠海马神经元缺氧损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法 以原代培养的新生大鼠海马神经细胞作为研究对象,建立缺氧模型,用MTT法测定神经元存活率。采用激光扫描共聚焦显微镜动态监测单个海马神经元内Ca2+浓度随缺氧或加入谷氨酸、KCl前后的实时变化。结果 异丙酚可明显降低神经元缺氧损伤时的细胞死亡率(P<0.01),异丙酚对缺氧、谷氨酸和高浓度KCl诱发的神经细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的升高有抑制作用(P<0.05)。结论异丙酚对离体培养的大鼠海马神经元缺氧性损伤具有保护作用,其作用机制部分与异丙酚抑制[Ca2+]i异常升高有关。

油酸在高甘油三酯血症患者体内转化生成9,10-二羟基硬脂酸

目的比较高甘油三酯血症患者食用油酸（oleic acid,OA）含量不同的茶籽油和调和油前后,血清OA和9,10-二羟基硬脂酸（9,10-dihydroxystearic acid,DHSA）的含量和变化,以探讨OA是否在高甘油三酯血症患者体内转化生成DHSA。方法采用随机双盲对照研究,将50名高甘油三酯血症患者随机分为茶籽油组和调和油组,每组各25例。受试者每日摄入以上实验油25~30g,持续8w。在研究开始时和结束时测定身高、体重、BMI以及血清中OA、DHSA、总甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、血糖、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平。结果研究结束后茶籽油和调和油组分别获得21和25例有效数据。实验开始时两组性别分布、年龄、BMI、TG、TC、ALT、AST、总能量、三大营养物质摄入水平、各脂肪酸摄入量及活动水平无显著差异。实验结束时,与调和油组相比,茶籽油组油酸和单不饱和脂肪酸摄入量以及血清OA和DHSA水平显著增加,多不饱和脂肪酸摄入量减少,其他各项指标无显著变化。与实验开始时相比,茶籽油组油酸和单不饱和脂肪酸摄入量以及血清中OA和DHSA含量显著增高,体重和BMI显著下降及多不饱和脂肪酸摄入量减少,其他各项指标无显著变化;调和油组除体重和BMI显著下降外,其他各项指标无显著变化。结论油酸在高甘油三酯患者体内可代谢生成DHSA。