肝门部胆管癌外科治疗的临床与实验研究

肝管汇合部癌曾一直被认为是一少见病,患者生前很少能确诊.由于其位置深在,曾以为不可能手术切除.Altemeier et al1957年报告3例主要肝管的硬化型癌,其中1例在3 a 时间内曾手术7次而未得到确诊,直至最后肝门发生腺癌转移才明确诊断。

聚乳酸/聚羟基乙酸共聚物网管支架体外预血管化及体内植入的实验研究

目的研究预血管化对含网管的多孔可降解聚乳酸/聚羟基乙酸共聚物(polylacticl/glycolicacidcopolymer,PLGA)支架血管化的影响。方法将含网管的多孔可降解PLGA支架由小鼠微血管内皮细胞预血管化,分为体外预血管化组(A组)和单纯支架组(B组)。将两组支架植入12只雌性NIH小鼠肠系膜间,分别于术后2、4周取材,行组织学及免疫组织化学观察血管化情况,并应用图像分析软件计算支架血管化面积。结果支架体外预血管化后,其网管内可见微血管内皮细胞均匀贴壁。支架植入体内2周,切片血管化面积A组为2260.91±242.35μm2与B组823.64±81.29μm2比较,差异有统计学意义(P<0.01);4周时A组为17284.36±72.67μm2与B组17041.14±81.51μm2比较,差异无统计学意义(P>0.05)。植入2周支架切片肌动蛋白阳性染色面积A组为565.22±60.58μm2与B组205.91±16.25μm2比较,差异有统计学意义(P<0.01);4周时A组为4321.09±19.82μm2与B组4260.28±27.17μm2比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论含网管的多孔可降解PLGA支架是一种良好的简易血管化支架模型;预血管化可以明显增强支架植入早期的血管化。

壳聚糖-生物蛋白胶用于工程化血管构建的初步研究

目的探讨壳聚糖管和生物蛋白胶作为工程化血管支架的可行性。方法血管内皮细胞和平滑肌细胞取自大鼠主动脉,体外扩增后,血管内皮细胞被接种在壳聚糖管的内表面;平滑肌细胞与生物蛋白胶混合后接种在壳聚糖管的外表面构建工程化血管。采用倒置显微镜观察、免疫组化染色和扫描电镜观察方法对工程化血管进行评价。结果血管内皮细胞在壳聚糖管的内壁形成连续的单层细胞层,覆盖在壳聚糖支架管腔内壁。平滑肌细胞在生物蛋白胶中成活生长,并形成三维的立体结构。结论壳聚糖生物蛋白胶可潜在地作为工程化血管支架。

野战腹部创伤非控制性失血性休克的分阶段救治模拟研究

目的制作野战腹部血管损伤非控制性失血性休克(UHS)模型,探索在休克不同阶段给予不同复苏方案的治疗效果。方法SD大鼠50只,左股动、静脉及左心室插管后开腹,其中42只于腹主动脉中下段用25G针头穿刺造成活动性出血模拟UHS,32只造模成功。根据战创伤实际,将动物分为受伤早期、早期救助期、后期救治期及观察期4个阶段。大鼠随机分为以下4组:对照组(n=10),不进行治疗;院内治疗组(n=11),早期不复苏,后期救治期给予手术止血并输入林格液维持血压在90mmHg左右;分阶段救治组(n=11),于早期救助期以1ml/(kg.min)的速度持续缓慢输入林格液,后期救治期治疗同院内治疗组;假手术组(n=8)。监测大鼠平均动脉压(MAP)、中心静脉压(CVP)、血乳酸水平及肝肾功能等,并统计腹腔出血量及存活时间。结果血管损伤后15min对照组大鼠平均动脉压由94.7mmHg下降到28.9mmHg(P<0.01),分阶段救治组早期持续性液体复苏后休克大鼠平均动脉压逐渐升高,但仍然未超过60mmHg。CVP的变化与MAP相似。对照组、院内治疗组伤后早期血乳酸水平、转氨酶活性及肌酐水平即升高,而分阶段救治组升高显著延迟。对照组、院内治疗组、分阶段救治组大鼠平均存活时间为分别为76、846、2480min,对照组大鼠均在24h内死亡,院内治疗组及分阶段救治组72h死亡率分别为72.7%和36.4%。结论采用以早期持续性缓慢液体复苏为特征的分阶段救治措施,虽然不能快速升高血压及有效循环血量,但可有效抑制血乳酸水平的升高,维持器官功能,且不会显著增加腹腔出血量,从而可延长UHS动物存活时间、提高存活率。

人胃癌鸡胚移植模型的建立及其肿瘤生物学研究

目的 建立人胃癌鸡胚移植模型 ,为胃癌研究提供一种简便实用的手段。方法 将人胃癌细胞系SGC 790 1细胞接种到鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)上 ,动态观察移植瘤的形态学及肿瘤生物学特性 ,分析影响移植瘤成活的因素 ,并对瘤组织行组织学检查。结果 成功建立了人胃癌鸡胚移植模型 ,移植瘤组织学结构与人胃癌相似 ;接种癌细胞数量影响接种成瘤率 ,癌细胞数量越大 ,成瘤率越高 ;移植瘤可诱发大量血管生成并向肿瘤呈放射状集中。结论 将SGC 790 1细胞接种到鸡胚上建立鸡胚移植胃癌是可行的 ,本模型可动态观察胃癌生长 ,模拟其在体内生长情况 。

小鼠再生肝浸出液体外诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞样分化的研究

目的应用小鼠再生肝浸出液体外诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞样分化。方法利用2／3肝部分切除术后36h小鼠再生肝组织浸出液定向诱导小鼠骨髓间充质干细胞，在倒置显微镜下观察细胞形态，应用免疫荧光法鉴定细胞性质。结果骨髓间充质干细胞经小鼠再生肝浸出液诱导7d后，呈肝细胞样圆形，1～2周后免疫荧光染色可见细胞表达肝细胞标记物CK8、CK18和清蛋白。结论小鼠再生肝浸出液可诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞方向分化。

肝组织工程支架评价方法研究

目的:以人肝细胞系HepG2作为种子细胞,建立一种细胞支架评价方法,为肝组织工程筛选合适支架。方法:将HepG2细胞接种在生物可降解聚合物支架——聚乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)、壳聚糖(3%CS)和丝素(2%SF)上,体外常规培养;采用四唑盐(MTT)比色法、HE染色和尿素氮检测试剂盒对接种在支架上HepG2细胞的生长、分布及功能情况进行检测。结果:培养在3种支架上的HepG2细胞均维持增殖状态,相比之下,丝素支架上的细胞增殖较快,而PLGA和壳聚糖支架上的细胞增殖相对缓慢;培养至第7d时,组织学检测显示丝素支架上的HepG2细胞分布均匀,数量最多;而在PLGA和壳聚糖支架上只能发现少量细胞;细胞功能检测显示丝素和PLGA支架上的尿素合成能力下降缓慢,而壳聚糖支架上的尿素合成能力快速下降。结论:3种支架均具有比较好的生物相容性;相比较而言,丝素更适合作为肝组织工程支架;该方法可用于批量筛选肝组织工程支架。

透明质酸支架构建工程化肝组织小块的初步研究

目的探索肝窦血管内皮细胞和肝细胞与透明质酸支架复合后构建工程化肝组织小块的可行性。方法分离小鼠肝细胞和肝窦血管内皮细胞,分别种植于透明质酸海绵状支架上培养,形成支架材料细胞复合体,植于小鼠肝包膜下肝组织表面。2周后将支架取出观察植入效果。结果分离获得的肝细胞和肝窦血管内皮细胞活力较高。构建的支架细胞复合物植入体内后与宿主肝组织紧密融合,可见移植物内有微血管形成,血管周围肝细胞聚集生长,结构类似正常肝组织。结论利用透明质酸支架复合肝窦血管内皮细胞和肝细胞构建工程化肝组织小块的方法可行。

血管组织工程实验研究

目的获得血管组织工程的实验依据。方法获取大鼠血管内皮(VEC)和平滑肌细胞(VSMCs),进行培养扩增,然后接种到血管组织工程支架上;将VSMCs-血管支架移植到大鼠体内,观察移植后大鼠活体和组织病理反应。结果培养的细胞符合血管种子细胞的形态特征;VSMCs接种到血管组织工程支架上获得成功;VSMCs-血管支架移植到大鼠体内10d后,支架被纤维组织包裹,支架内见VSMCs生长,支架中央管腔存在,但与正常血管结构有很大差别,而且不具备血管功能。结论利用血管组织工程支架构建的大鼠VSMCs-血管支架移植到大鼠皮下是可行的;人工构建血管具有类似血管雏形,但尚不具备血管的正常结构。

肝脏外科技术的发展

1 历史的步调 至19世纪的末期,通过动物实验研究,已经确立通过肝实质切开是可行的,切除肝脏的3/4后,动物仍可活存,并且余肝可以再生以达到其原来的体积.Carl Langenbuch(1888)被认为首先施行成功的肝左叶切除,但Langenbuch的"病人"是一30岁的妇人,因为腹痛而剖腹,他发现在肝左叶上的一肿块,将其蒂部结扎后,切除重370g的组织,术后认为是由于束腰过紧肝受压迫所致,但手术后发生肝门处血管出血,Langenbuch又为其做了第二次手术,病人终归治愈了.

肝干细胞及其调控因子的研究进展

肝干细胞具有向肝细胞和胆管细胞分化的潜能,在肝细胞移植、人工肝脏的体外构建和基因治疗方面有着巨大的潜力,笔者就肝干细胞的来源及其调控机制综述如下。

体外三维肿瘤模型的研究进展

体外三维肿瘤在肿瘤生物学行为和治疗方面已经取得了较多进展。为进一步探索三维肿瘤模型的构建方法,了解肿瘤细胞在三维模型中的侵袭、转移及凋亡等生物学机制及三维肿瘤模型在肿瘤治疗研究中的应用,本文对三维肿瘤模型的构建方法和在肿瘤研究中的主要应用进行综述。

胆管癌神经浸润及转移的形态计量学研究

目的：利用普通病理切片的形态参数评测胆管癌神经浸润情况，推测患者生存中位时间。方法：利用图像分析技术，从胆管癌细胞、细胞核、核仁三个层次，对４０例高、中、低分化及乳头状腺癌病理标本的细胞截面积、等效直径、细胞形状因子、核浆比、核面积、核形状因子、ＡｇＮＯＲｓ记数等７个形态计量学参数进行测量。结果：中、低分化腺癌的神经周围浸润指数（ＰＮＩ）大于０７０，属于严重性神经浸润。建立了ＰＮＩ与生存中位时间和与细胞形态计量学参数的数学模型。ＰＮＩ与生存中位时间呈负相关，而与除细胞截面积外的６个参数呈正相关。结论：（１）胆管癌的ＰＮＩ值反映了胆管癌的生物学特性，对判断预后有重要价值。（２）细胞、细胞核、核仁三个层次的形态计量学参数中，后二者与ＰＮＩ相关性更好。（３）应用数学模型可以判断胆管癌的神经浸润情况，并推测患者的生存中位时间。

恶性肿瘤转移机制的研究现状

侵袭和转移是肿瘤难以治愈的主要原因。近年来在肿瘤的侵袭和转移机制方面进行了广泛的研究,且已取得较大进展。其研究方向已向分子表达、粘附特点及基因调控方面发展。正常组织变为恶性肿瘤有三大表型改变:即恶性转化、侵袭和转移。恶性转化包括癌基因激活,抑癌基因失活,各种生长因子调控紊乱等均与肿瘤发生,转移有关。目前认识到,肿瘤的侵袭、转移是一个多因素、多步骤、多阶段的极其复杂的过程。

腹腔镜外科时代胆管狭窄治疗的意义

自从1882年首例胆囊切除术以来,手术中损伤肝外胆管和手术后胆管狭窄便引起重视,因为损伤肝外胆管后,可使原较为安全的手术将面临严重的结局。1905年,距首例胆囊切除术后23年,美国Mayo才首次报告用胆管-十二指肠吻合术治疗2例损伤性胆管狭窄。此后,随着胆囊切除术的病例数增多,胆管损伤及其严重的临床经过更引起外科界的重视,一个世纪以来,胆道外科的重点便经常是围绕着如何避免胆囊切除和上腹部手术时发生肝外胆管损伤,外科界的先驱们制定了很多的手术“法规”,临床教学上亦总是千方百计地强调如何避免损伤胆管。但是,胆管损伤仍时有发生。

中国胆道外科的发展

中国胆石病的特点 由于原发性胆道结石的原因,使中国的胆石病复杂化.在20世纪中期,胆道感染、胆道寄生虫病、胆石构成该时中国胆道疾病的三大特点.至于胆石,原发性胆管结石约占了半数.因而当时重庆西南医院所报告的228例胆道病中,胆石占60.1%;在80例胆管结石中,60例为原发性胆管结石.