雌激素受体α真核表达载体的构建及在大鼠骨髓基质干细胞中的表达

目的雌激素在很多靶器官中发挥重要生物调节作用,主要通过雌激素受体(estrogen receptor,ER)来介导。构建ERα真核表达载体并于大鼠骨髓基质干细胞(rat marrow mesenchymal stem cells,rBMSCs)中表达,为后续研究ERα的功能奠定良好的基础。方法采用RT-PCR技术从SD大鼠子宫及双侧附件中提取并扩增ERα,酶切后,克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+);重组载体经PCR、酶切、测序鉴定正确后瞬时转染rBMSCs,采用RT-PCR和Western blotting分析ERα在细胞中的表达,并采用Realtime-PCR和MTT的方法比较ERα高表达后对细胞生长周期的影响。结果成功构建了重组质粒pcDNA-ERα,RT-PCR和Western blotting显示该质粒能在rBMSCs中高效表达,Realtime-PCR和MTT比较分析表明,ERα的高表达对细胞的生长产生一定的抑制作用。结论成功构建ERα真核表达载体,该载体在rBMSCs中成功转录与表达,外源性ERα基因转染能使rBMSCs的增殖受抑,可能与ERα的核内高表达相关。